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2009年11月09日

【期刊论文】羊膜负载骨髓间充质干细胞与表皮细胞对放创性皮肤损伤促愈合研究

粟永萍, 闫国和, 艾国平, 屈纪富, 冉新泽, 程天民, 庞学利, 肖红

中国修复重建外科杂志,2004,29(6):497~501,-0001,():

摘要

肤缺损圆形创面(3.67cm)各3个,共48个创面。将经处理的人羊膜(human amniotic mambrane, HAM)分别负载自体骨髓间充质干细胞(mesenchvmal stem cells,MSCs)和表皮细胞,移植到其左侧24个创面作为实验组(A组);以单纯无种植细胞的HAM敷盖其右侧前16个创面(B组);以单纯油纱布敷盖其右侧后8个创面(C组)。B、C作为对照组。观察移植后1~3周内各组创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况,并进行创面组织HE染色及vWF免疫组织化学检测。用图像分析法测算各组各时间点创面平均面积(CIT12),并计算其愈合百分率。结果C组于伤后99--23天愈合,B组于伤后19~21天愈合;A组于伤后15~17天愈合,较B、C组分别提前6~7天和5~6天,愈合质量好。移植15—17天,A组与B、C组创面平均残留面积及愈合面积百分率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。A组创面的新生上皮已完全覆盖整个创面,肉芽组织生长旺盛,肉芽组织中vWF、成纤维细胞相毛细血管含量丰富,可见胶原沉积;B、C组创面仍见许多炎性细胞浸润,肉芽组织中vWF、成纤维细胞和毛细血管含量少,胶原沉积不明显。 结论HAM负载自体MSCs和表皮细胞植入对放创性全厚皮肤缺损创面有较好的促愈合作用,愈合质量较高。

关键词: 骨髓间充质干细胞 表皮细胞 人羊膜 放创性皮肤损伤 创面愈合

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2009年08月07日

【期刊论文】骨髓间充质干细胞的分离培养及定向诱导软骨细胞的实验研究

金连弘, 李冬梅, 张宇, 李呼伦, 刘慧雯, 张宝东

哈尔滨医科大学学报,2004,38(1):19~22,-0001,():

摘要

目的 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞并向软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程软骨种子细胞的可行性。方法 取成年大鼠股骨骨髓,体外培养、纯化。取第三代成年大鼠骨髓间充质干细胞,实验组用HG-DMEM无血清培养液诱导;对照组用含10%.胎牛血清的HG-DMEM, 培养液自然分化。形态学观察,免疫组化检测II型胶原分泌。结果 大鼠骨髓间充质干细胞为均一的成纤维细胞样。实验组与对照组II型胶原免疫组化阳性率有显著差异(P<0.01)。结论 成年大鼠骨髓间充质干细胞在特定的培养基能向软骨细胞方向转化,作为软骨组织工程种子细胞具有可行性。

关键词: 骨髓间充质干细胞 软骨, 分化, 大鼠

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2009年06月09日

【期刊论文】小鼠骨髓问充质干细胞的分离与培养

赵连三, 张怡, 唐红

生物医学工程学杂志(5):1-4,-0001,():

摘要

探索在体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞(Bonemarrow mesenchy malstemcells, BMSCs)的最适条件。以密度梯度离心技术及贴壁筛选法相结合,在体外分离BALB/C小鼠的BMSCs,通过MTT法测定了不同离心力、不同换液时间、不同血清浓度、不同种植密度等因素对BMSCs分离和培养的影响。在500g×30min的离心力下分离细胞,加入10%的胎牛血清,原代按(12~20)×105/ml的细胞密度接种,接种24h后换液,继代种植密度为6.4~25.6×104/ml时最适宜细胞生长;在此条件下,细胞快速增殖,传代后8h贴壁达90%以上,24h便进入对数生长期,直至第5d,细胞约增殖3倍。本研究建立了在体外分离培养骨髓间充质干细胞的细胞生物学方法和技术参数。

关键词: 骨髓间充质干细胞 细胞培养, 细胞生物学

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2009年05月12日

【期刊论文】人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞的免疫调节作用

刘霆, 陆晓茜, 孟文彤, 朱焕玲, 席亚明, 刘咏梅

中国实验血液学杂志,2005,13(4):651-655,-0001,():

摘要

为了探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)体外对T淋巴细胞的免疫调节作用,从人骨髓液中分离培养MSC,通过细胞形态、免疫组织化学及流式细胞术检测其表面标记进行鉴定;将植物血凝素(PHA)及从人脐血中分离培养的树突状细胞(dendritic cell,DC)作为刺激因素,经磁珠分选的人CD2+T淋巴细胞作为反应细胞。用3H-TdR标记8液体闪烁计数仪检测与MSC共培养前后T淋巴细胞增殖能力的变化;用流式细胞术检测与MSC共培养10天后的CD2+T细胞内各亚群Th1、Th2、Tc1、Tc2比例的变化。结果表明:MSC能明显抑制由Dc诱导的T淋巴细胞增殖(P=0.004),同时MSC抑制由PHA引起的T细胞增殖,但不具有显著性差异(P=0.26),MSC培养上清液单独并不具备抑制T细胞增殖的作用,与MSC共培养后的T细胞亚群中,Th2及Tc2亚群含量较共培养前明显增加(P<0.05)。结论:MSC对由Dc和PHA诱导的淋巴细胞增殖反应均具有抑制作用,并且这种作用可能与细胞间相互作用及诱导T细胞亚群的改变有关。

关键词: 骨髓间充质干细胞 T淋巴细胞, 树突状细胞, 免疫调节

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2006年11月09日

【期刊论文】绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞的多向分化潜能研究

田卫东, 李志勇, 刘磊, 陈希哲, 林云锋, 闫征斌, 陈玲, 李声伟

华西口腔医学杂志,2005,23(2)152~154,-0001,():

摘要

目的研究绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞(MSCS)体外定向诱导下的多向分化潜能。方法取6周龄GFP转基因小鼠1只,用密度梯度离心法结合贴壁法体外培养获得GFP转基因小鼠骨髓MSCS有限细胞系(GFP-MSCS)。取第3代GFP-MSCS进行体外多向分化诱导:成骨诱导后进行碱性磷酸酶增殖活性检测及茜素红钙盐染色;成脂肪诱导20d后进行油红O染色鉴定;成神经诱导6h后用免疫组织化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)的表达。结果GFP-MSCS经成骨诱导后ALP表达较对照组明显升高,20d后茜素红染色可见有橘红色钙盐沉积;经成脂诱导后油红O染色阳性;经成神经诱导后,细胞形态由梭形转变为星状细胞,NSE染色呈强阳性表达。结论GFP转基因小鼠骨髓MSCS在体外诱导下具有多向分化能力,对GFP稳定表达无影响,可以作为研究MSCS多向分化潜能机制的一个有效示踪工具。

关键词: 绿色荧光蛋白, 转基因小鼠, 骨髓间充质干细胞 多向分化潜能

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2006年11月17日

【期刊论文】骨髓间充质干细胞骨向诱导分化过程中破骨细胞分化因子和细胞间粘附分子-1的表达变化

赵志河, 王军, 罗颂椒, 樊瑜波

华西口腔医学杂志,2005,23(6):240~243,-0001,():

摘要

目的观察破骨细胞分化因子(ODF)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在不同分化状态成骨细胞的表达变化,探讨正畸牙移动过程中成骨细胞对破骨细胞分化成熟的诱导机制。方法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,成骨定向诱导后获得不同分化状态的成骨细胞,RT-PCR检测不同分化状态下的成骨细胞ODF和ICAM-1的表达变化。结果成骨细胞在分化成熟过程中,ICAM-1mRNA表达水平逐渐升高;ODFmRNA则在诱导后6d开始表达,并维持在一较稳定的水平。结论不同分化状态的成骨细胞对破骨细胞诱导分化的能力有所差异,相对成熟的成骨细胞的诱导能力可能更强。

关键词: 骨髓间充质干细胞 成骨细胞, 破骨细胞分化因子, 细胞间粘附分子-1

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2006年11月15日

【期刊论文】猕猴骨髓问充质干细胞与去细胞神经优化人工神经的体外构建

刘小林, 杨光诗, 许扬滨, 朱家恺, 朱庆棠

中华显微外科杂志,2005,28(1):35~38,-0001,():

摘要

目的探讨猕猴骨髓间充质干细胞作为种子细胞与去细胞同种异体神经作为支架,体外构建人工神经的研究。方法采用密度梯度离心的方法分离并培养猕猴骨髓间充质干细胞,利用相差显微镜观察细胞生长情况并描绘其生长曲线;取猕猴3段4cm的周围神经,其中2段用4%triton-X-100及4%脱氧胆酸钠液分别萃取1次和2次,在新鲜神经和萃取神经中段取材,组织学检测及电镜学观察萃取前后的形态学变化;采用显微注射的方法把猕猴骨髓间充质干细胞种植到萃取两次的异体神经内,HE染色观察细胞在支架内的生长情况。结果猕猴骨髓间充质干细胞自我增殖能力强;萃取1次的异体神经细胞及髓鞘结构仍部分存留,而萃取2次的其细胞及髓鞘结构消失;HE染色可见细胞在萃取2次的异体神经内可爬行生长。结论猕猴骨髓间充质干细胞与化学萃取的去细胞同种异体神经适合体外构建人工神经。

关键词: 骨髓间充质干细胞 组织工程, 去细胞神经, 猕猴

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2006年10月10日

【期刊论文】5-氮杂胞苷诱导骨髓源性心肌干细胞向心肌分化过程中心肌肌钙蛋白T的表达变化

谭玉珍, 孙丽莉, 王海杰, 贺其志, 王新艳

解剖学报,2005,36(3):329~323,-0001,():

摘要

目的 研究5-氮杂胞苷诱导骨髓源性心肌干细胞(MCSC)向心肌分化过程中,心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达变化和超微结构。方法 从SD大鼠骨髓间充质干细胞(MMSC)中筛选MCSC,用5-氮杂胞苷诱导向心肌定向分化。取分化后不同时间的细胞作cTnT免疫细胞化学染色,并对结果进行图像分析。透射电镜下观察分化细胞的超微结构。取不同发育期和成熟期的sD大鼠心肌作对比研究。结果 用5.氮杂胞苷诱导后2周,细胞内开始表达cTnT;诱导后3周,eTnT表达增强,可见横纹样结构;诱导后4周,cTnT表达明显增强,横纹增多,但排列不规则。诱导后4周的细胞内出现心房粒,可见丰富的粗面内质网和糖原。胚胎11 d大鼠的心肌内,横纹样结构较少且排列不规则。新生大鼠心肌内横纹增多,排列较规则。1月龄和3月龄心肌的横纹样结构发达,排列规则。诱导分化后4周的细胞cTnT表达特征与胚胎11 d的心肌相似。结论 MCSC经5-氮杂胞苷诱导后可分化为心肌细胞,表现为未成熟心肌的结构和功能特征。

关键词: 骨髓间充质干细胞 骨髓源心肌干细胞, 心肌分化, 心肌肌钙蛋白T, 心肌细胞, 免疫细胞化学, 大鼠

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2005年09月07日

【期刊论文】骨髓间充质干细胞的克隆培养及其向心肌细胞的诱导分化*

王海杰, 孙丽莉, 谭玉珍△, 贺其志

复旦学报(医学版),2003,30(6):519~525,-0001,():

摘要

目的建立骨髓问充质干细胞(MMSC)单细胞克隆,筛选具有心肌特异性分化潜能的c-kit+MMSC克隆,进行体外心肌诱导分化研究。方法取成年雄性SD大鼠骨髓细胞,进行原代培养和单克隆培养。通过c-kit免疫细胞化学标记和RT-FCR检测,筛选出向心肌特异性分化的MMSC克隆。然后用5-氮杂胞苷诱导分化,RT-PCR检测诱导前后心肌特异性基因表达的变化。结果骨髓中含有多种MMSC克隆,以不同形态和大小的成纤维细胞样克隆数目最多。较大的戚纤维细胞样克隆和扁平多角形细胞克隆均表达c-kit。用5-氮杂胞苷诱导后,表达Nkx2.5的c-kit+MMSC克隆的细胞形态和排列方式发生变化。诱导后2周,细胞变为短柱状,且平行排列;第3周,相邻细胞间形成明显的细胞连接;第4周,由多个细胞相互连接形成肌管样结构,井可观察到肌管的自发性搏动。心室肌特异性肌球蛋白轻链(MLc-2v)mRNA从第3周开始明显表达。结论骨髓中含有多种干细胞克隆。筛选具有心肌特异性分化潜能的MMSC克隆并构建心肌干细胞库,将为临床干细胞移植治疗心肌梗死提供理想的干细胞来源。

关键词: 骨髓间充质干细胞 心肌干细胞, 细胞克隆, 心肌分化

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2005年03月04日

【期刊论文】大鼠骨髓商质干细胞的培养和生物学特征

李连达, 吴理茂, 刘红

科学技术与工程,2003,3(6):547~550,-0001,():

摘要

为探索大鼠骨髓间充质干细胞的最佳培养条件及表型,用大鼠股骨抽取骨髓,密度梯度离心分离骨髓间充质干细胞。通过测定生长曲线和克隆形成能力,比较不同培养条件、不同融合度传代及不同生长基质对MSC的影响。免疫组化双标法检测增殖MSC的表型。结果Matrigel包被培养器皿,含10%胎牛血清、10ng/mL EGF的α-MEM培养基,50%融合时消化传代,是MSC保持低分化状态、体外大量扩增的较佳条件。绝大部分。MSC表达CD44,部分MSC表达c-kit,MSC几乎不表达CDM。说明以上培养条件是MSC保持低分化状态又大量增殖的较好培养条件,为MSC用于细胞移植和组织工程打下了良好基础。

关键词: 骨髓间充质干细胞 培养条件, 表型

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