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2010年12月16日

【期刊论文】A族链球菌表面蛋白Fba单克隆抗体的制备及其对应表位的初步鉴定①

魏林, 马翠卿, 顾海燕, 郭奕阳, 胡光磊, 魏澎

中国免疫学杂志,2008,24(11):1046~1048,-0001,():

摘要

目的:制备抗A组溶血性链球菌(GAS)表面蛋白Fba(fibronectin-binding proteins a)的单克隆抗体(mAb),并对单抗的生物学功能及其相应表位进行了初步鉴定。方法:以重组Fba蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术及间接ELISA筛选出针对Fba的杂交瘤细胞株,以Western blot鉴定mAb的特异性,并将获得的mAb与Fba+GAS和Fba-GAS分别行全菌ELISA、与Fba的分段表达蛋白行Western blot,初步鉴定mAb针对的表位所在区域。结果:获得了稳定分泌抗Fba-mAb的杂交瘸细胞株,其中一株mAb能特异结合天然Fba+链球菌,且该单抗针对的表位包含了Fba蛋白的第104~108位氨基酸,该位点也是链球菌Fab蛋白结合补体调节蛋白FH的位点。结论:成功地制备了抗GAS表面Fba蛋白的mAb,其中一株mAb对应的表位为位于菌体表面的天然表位,并检测出了该mAb对应的表位所在区段,这为深入研究GAS的致病机制提供了有力工具。

关键词: A族链球菌 Fba蛋白, 单克隆抗体, 表位

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2010年12月16日

【期刊论文】A族链球菌表面新发现蛋白Fba真核表达质粒的构建及其诱导的免疫应答①

魏林, 李彩虹, 马翠卿, 王锦②

中国免疫学杂志,2007,23(9):835~838,-0001,():

摘要

目的:构建新发现的A族链球菌(GAS)表面蛋白Fba 的真核表达质粒,并将其以及Fba蛋白、M 蛋白分别免疫小鼠,对它们诱导的体液免疫及细胞免疫应答进行评价分析。探讨Fba 蛋白作为GAS候选疫苗的可能性。方法:以SSI-9菌株(GASM 1血清型标准株)作为模板,采用PCR方法扩增Fba基因,测序正确后克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建真核表达质粒pcDNA3.1/fba;将雌性CD1小鼠随机分成6组,分别为Fba蛋白免疫组、M 蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba+Fba蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba免疫组、pcDNA3.1空质粒对照及PBS对照组。EL ISA检测各免疫组血清IgG的动态变化水平;脾细胞增殖试验检细胞增殖水平,并用流式细胞术检测小鼠体内CD4+ 、CD8+ 淋巴细胞的变化。试验结果经SPSS10. 0统计处理。结果:成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/fba;质粒或蛋白免疫后小鼠IgG产生水平以Fba蛋白免疫组增高最为明显,其次为Fba质粒蛋白混合免疫组及Fba质粒组。特异性抗原诱导后体外脾细胞增殖试验显示:pcDNA3.1/fba免疫组增殖水平明显高于其它组,流式细胞检测结果与此一致,并显示以CD4+ T细胞水平升高为主,CD8+ T细胞水平在各组别之间也有一定的差异。结论:(1) Fba 蛋白与M 蛋白一样均能有效地诱导机体产生抗体,提示Fba蛋白很有希望成为GAS的候选疫苗。(2)成功构建了Fba蛋白的真核表达质粒pcDNA3. 1/fba,且该重组质粒能有效地诱导抗链球菌所需的抗体,并能增强CD4+ T 细胞、CD8+ T细胞的增殖功能。

关键词: A族链球菌(, GAS), Fba蛋白, 真核表达质粒, 免疫

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2010年12月16日

【期刊论文】A族链球菌(GAS)Fba蛋白单克隆抗体对应表位核心氨基酸的确定①

魏林, 郭奕阳, 马翠卿, 魏澎, 王秀荣, 冯惠东, 阎婉依

中国免疫学杂志,2009,25(12):1059~1062,-0001,():

摘要

目的:对A族链球菌Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位。方法:以初步定位的表位区段为线索合成三段重叠多肽,dot-ELISA检测McAb2与合成肽的亲合力,并以McAb2为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,用竞争ELISA鉴定阳性克隆。结果:dot-ELISA检测结果表明Fba100-112肽段与McAb2的结合能力最强。经过3轮亲和筛选后,随机挑选20个噬菌体克隆,竞争ELISA对其与McAb2的亲和力做检测,其中12个克隆显示较强的阳性结果。阳性克隆DNA测序,与Fba基因第100位氨基酸至110位氨基酸中ITPDL同源性较高。结论:通过dot-ELISA将A族链球菌Fba蛋白McAb2对应的表位定位于100~112位氨基酸,结果同噬菌体随机肽库筛选的核心氨基酸位置吻合。为进一步研制表位肽疫苗、研究Fba蛋白及其单克隆抗体的生物学功能奠定了基础。

关键词: A族链球菌 Fba蛋白, 单克隆抗体, 表位, 噬菌体肽库

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