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2007年05月31日

【期刊论文】N-甲基-D-门冬氨酸受体主亚基单克隆抗体抗谷氨酸兴奋毒性的体外实验研究

孙长凯, 康晓楠, 范明, 丁爱石, 赵杰, 王吉庆, 韩大跃, 施广霞

中华医学杂志2003年9月25日第83卷第18期/Natl Med J China, September 25, 2003, Vol. 83, No. 18,-0001,():

摘要

目的 研究人N-甲基-D-2门冬氨酸受体(NMDAR, NR)主亚基(NR1)单克隆抗体mAbN1是否对兴奋毒性脑损害有防护作用。方法 取10只新生大鼠海马神经细胞进行体外原代培养,建立了谷氨酸对培养海马神经细胞兴奋毒性神经损伤模型,观察抗体保护后神经细胞形态,检测细胞存活率(锥虫蓝拒染法)和细胞培养上清乳酸脱氢酶漏出量,每组2个平行皿,实验重复4次。结果 经0. 3μmol/ L mAbN1预处理后,神经元具有明显抗谷氨酸兴奋毒性损伤能力,存活率提高35 %;抗体表位合成肽可以阻断这种保护,提示该抗体的保护功能是特异性的。结论 NR1单克隆抗体mAbN1具有体外抗兴奋毒作用,该研究为兴奋毒性脑损害抗体治疗提供了重要依据。

关键词: 受体, N-甲基-D-天冬氨酸 兴奋性氨基酸类, 细胞培养, 治疗

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2007年05月31日

【期刊论文】N-甲基-D-门冬氨酸受体重组肽抗血清对谷氨酸兴奋毒性导致神经元坏死和凋亡的保护作用

孙长凯, 康晓楠, 朱克, 范明, 丁爱石, 马清钧, 石成华, 赵杰, 韩大跃, 王耀山, 施广霞, 包礼平

中华神经科杂志2003年10月第36卷第5期/Chin J Neurol, October 2003, Vol. 36, No. 5,-0001,():

摘要

目的 观察N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDAR, NR)主亚基(NR1)M3M4环重组肽自身抗血清对不同浓度谷氨酸诱导的神经元死亡的保护作用。方法 用NR1 M3M4环重组肽免疫Balb/C(H-2d)小鼠制备抗血清,用锥虫蓝染色法和原位末端标记(TUNEL)法观察抗血清对原代培养海马神经元兴奋毒性坏死和凋亡的保护效应。结果 在高浓度谷氨酸(500 μmol/L)条件下,阳性抗血清可以使神经元坏死减少16%; 在低浓度谷氨酸(50 μmol/L)作用下,阳性抗血清保护可使神经元凋亡率减少13%。结论 NMDAR重组肽自身免疫抗血清具有抗兴奋毒性作用,这一结论为免疫防治兴奋毒性脑损伤策略的建立提供了坚实的体外基础。

关键词: 受体, N-甲基-D-天冬氨酸 肽类, 谷氨酸, 自身免疫, 神经元, 细胞凋亡

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2007年05月31日

【期刊论文】人NMDA受体主亚基M3-M4环基因片段的高效表达、纯化与鉴定

孙长凯, 张玉梅, 范明, 李伍举, 刘淑红, 赵杰, 韩大跃, 王嘉玺

中国生物化学与分子生物学报2003年10月19(5): 588-593/Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,-0001,():

摘要

用基因工程方法获得人N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)受体主亚基M3-M4环靶片段,以此为免疫原,用于进一步免疫原性及相关应用研究。自人脑胶质瘤组织中提取总RNA,采用RT-PCR扩增出人NMDA受体主亚基M3-M4环的基因片段,并按照计算机辅助原核表达载体pBV220中外源基因高效表达的数学模型预测方法,将其进行优化改构。将目的基因克隆到pBV220中,转化大肠杆菌DH5α,升温诱导表达,从蛋白质水平检测重组体在大肠杆菌中的表达情况,通过制备性SDS-PAGE进行纯化,从相对分子质量、免疫反应性、肽质谱指纹分析等方面进行鉴定。结果表明,成功构建了人NMDA受体主亚基M3-M4环的原核表达载体(命名为pBV-NR1L3),通过基因优化,实现了高效表达。凝胶扫描分析表达量约占菌体总蛋白29%,重组肽纯度达95%以上。

关键词: N-甲基-D-天冬氨酸受体, 原核表达, 纯化与鉴定

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2007年11月28日

【期刊论文】应用比较分子力场法对3-取代的4,6-二氯吲哚-2-甲酸类化合物进行3D-QSAR 的研究

闻韧, SONG

Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2004, 13 (2),-0001,():

摘要

研究一系列新的C-3取代的4,6-二氯吲哚-2-甲酸类化合物的结构和它们与NMDA受体甘氨酸位点亲和活性之间的关系。方法 比较分子力场法(CoMFA)是一种三维定量构效关系(3D-QSAR) 研究方法。结果 所建立模型的交叉验证相关系数q2和非交叉验证相关系数r2分别为0.744和0.993,标准偏差E = 0.039,F = 261.343。结论 所得到的模型对该类化合物的活性会有较好的预测,用此模型设计的新化合物的活性预测数值也符合我们得到的结论。

关键词: 三维定量构效关系;比较分子力场法分析;C-3取代4 , 6-二氯吲哚-2-甲酸;N-甲基-D-天冬氨酸受体

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2006年04月19日

【期刊论文】N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基口服基因疫苗的制备和激活SD大鼠产生循环抗体的初步报告

王任直, TIAN Shi-qiang, WANG Ren-zhi, LI Gui-lin, ZHANG Bo, YAO Yong, DOU Wan-chen, KONG Yan-guo, ZHANG Zhen-xing, LI Shi-fang

中国神经免疫学和神经病学杂志,2004,11(4):224~238,-0001,():

摘要

目的 研制携带N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl,D-aspartatereceptorsubunit1,NR1)的口服疫苗,探讨疫苗激活SD大鼠产生循环抗体的可能性。方法 采用聚合酶链反应、酶切连接和蓝白筛选的方法构建NR1的表达载体;以磷酸钙共沉淀的方法转染HEK293细胞,并用G418筛选阳性细胞克隆;应用逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色方法鉴定阳性细胞株经氯化钙法制备携带NR1表达载体的减毒鼠伤寒沙门(氏)菌口服疫苗(SL-NR1);胃内灌注600LL、D(K)260nm为016的SL-NR1,2周内4次给药;以阳性细胞株为靶细胞,用免疫荧光方法检测大鼠循环中NR1抗体滴度。结果 扩增出NR1基因并构建了含有NR1基因的表达载体——pCDNA3.1-NR1;建立了细胞株HEK293-NR1;证实口服疫苗可激活SD大鼠(23/25只)产生NR1抗体。结论 成功研制了携带NR1基因的口服减毒鼠伤寒沙门(氏)菌活疫苗,其可激活机体免疫反应产生NR1抗体。

关键词: N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基, 口服疫苗, 循环抗体

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2005年09月16日

【期刊论文】慢性复合应激对大鼠学习与记忆及海马NMDA受体亚基NR2A和NR2B表达的影响①

刘能保, 程少容, 张敏海, 刘少纯, 李辉, 孙臣友, 刘向前, 汪薇曦

神经解剖学杂志,2004,20(3)275~280,-0001,():

摘要

为了观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内NMDA受体亚基NR2A、NR2B表达的变化。本研究将成年雄性wistar大鼠分为实验组和对照组。实验组动物每天交替暴露于复合应激原环境中达6周。用M0rris水迷宫和Y迷宫作业测试其空间学习与记忆成绩。再采用免疫组织化学和图像处理方法分析海马CA1、CA3、齿状回区的NR2A和NR2B的表达。结果显示:(1)Morris水迷宫测试:慢性复合应激组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组明显缩短。Y迷宫测试:慢性复合应激组大鼠学会躲避电击的正确次数较对照组明显增多;(2)慢性复合应激组海马内NMDA受体亚基NR2B表达水平较对照组明显上调。NR2A表达水平无显著变化。结论:慢性复合应激可增强学习与记忆能力。NMDA受体表达变化可能是影响学习与记忆的机制之一。

关键词: 应激, 空间学习, N-甲基-D-天冬氨酸受体, NR2A, NR2B, 海马

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