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味细胞谷氨酸受体(mGluR4)基因克隆、表达及功能的研究
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杨慧, Hui Yang, , Ina B. Wanner, Stephen D. Roper, and Nirupa Chaudhari
Volume 47(4):431-445, 1999,-0001,():
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【期刊论文】α-synuclein2pEGFP真核表达载体的构建及其在SH2SY5Y细胞中的表达①
杨慧, 张宇新, 赵焕英, 苏月, 苏玉金, 赵春礼, 徐群渊
神经解剖学杂志,2003,19(3):124~128,-0001,():
为了构建α-synuclein-pEGFP真核表达载体,检测其在SH-SY5Y细胞内的表达,本研究应用下述方法:PCR扩增α- synuclein基因并消除终止密码子;PCR产物连入pGEM T-easy载体,经测序确认无误后,亚克隆入pEGFP-N1,构建α-synucle-in-pEGFP真核表达载体;LipofectAMINE法转染SH-SY5Y细胞;荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,原位杂交和免疫荧光细胞化学法检测α-synucleinmRNA及其蛋白表达。结果显示,该载体转染SH-SY5Y细胞后,可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物。结论:α-synuclein-pEGFP真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达。本工作为今后动态观察研究α-synu-clein致Parkinson病多巴胺能神经细胞损伤机制奠定基础。
关键词: α-synuclein, 绿色荧光蛋白, 原位杂交, 荧光免疫细胞化学
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【期刊论文】The Taste of Monosodium Glutamate: Membrane Receptors in Taste Buds
杨慧, Nirupa Chaudhari, Hui Yang, Cynthia Lamp, Eugene Delay, Claire Cartford, Trang Than, and Stephen Roper
The Journal of Neuroscience, June 15, 1996, 16(12):3817-3826,-0001,():
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关键词: umami, gustation, rats, taste buds, chemosensory, glutamate receptors
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【期刊论文】Apoptosis and Activation of Erk1/2 and Akt in Astrocytes Postischemia
杨慧, Zhongjian Jiang, , * Yun Zhang, * Xiao Qian Chen, Philip Yeung Lam, Hui Yang, Qunyuan Xu, and Albert Cheung Hoi Yu
Neurochemical Research, Vol. 28, No.6, June 2003 (,-0001,():
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【期刊论文】骨髓基质细胞的分离、鉴定以及TH基因的转染与表达
杨慧, 鲁玲玲, 苏玉金, 赵春礼, 邹西峰, 侯少平, 徐群渊, 杨慧*
生物化学与生物物理学报,2003,35(4):536~541,-0001,():
目的 是探索骨髓基质细胞的分离培养、鉴定及其接受并表达TH基因的能力。实验中通过密度梯度离心法成功地从成年SD大鼠骨髓中分离获得了骨髓基质干细胞,并用流式细胞仪对其进行鉴定,纯度可达75%。进一步采用复制缺陷型腺相关病毒载体介导的基因转染方法, 将之改造成为携带lacZ与TH基因的工程细胞,经X-gal 染色和TH免疫组化检测,转染效率为(74.6±19.4)%。实验结果表明骨髓基质细胞易于接受并表达外源基因,有望作为运载细胞应用于帕金森病的基因治疗。
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杨慧, *, 徐群渊, Roper S Chaudhari N
解剖学报,2000,31(S1):41~44,-0001,():
目的 利用原位杂交检测味细胞中G蛋白的表达。方法 分别用RT-PCR方法克隆大鼠味蛋白及(a-rod)转导蛋白的全长cDNA,制备地高辛标记的正义链及反义链探针。结果原位杂交分析了150个大鼠味蕾,结果显示味蛋白和转导蛋白在舌味蕾细胞中都有表达。但两种蛋白标记细胞数量有明显差别。每个味蕾大约有1.2个转导蛋白阳性细胞,占总味蕾细胞的0.8%;而每个味蕾平均有6.2个味蛋白阳性细胞,占总味蕾细胞的4.1%;即味蕾中味蛋白阳性细胞大约是转导蛋白阳性细胞的5倍。转导蛋白探针对味蛋白mRNA无交叉杂交反应。在视网膜上可见转导蛋白基因的高度表达,而无味蛋白的表达。结论味蛋白和转导蛋白可能是味细胞的G-蛋白,但以味蛋白特异性表达为主。它们可能参与味觉的信号转导作用。
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杨慧, 苏玉金, 江小华, 姜重建, 张宇新, 杨秋慧, 徐群渊
解剖学报,2003,34(4):349~352,-0001,():
目的 研究人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ(GCH Ⅰ)基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法 从人胚胎肝脏中提取总RNA,以RT-PCR法扩增GCH ⅠcDNA,克隆于PGEM-T-easy载体中,测序正确后+G18再构建真核表达载体,转染猴肾成纤维细胞系COS7,原位杂交检测其表达。结果 RT-PCR扩增出904bp的cDNA,并成功构建真核表达载体pCI-neo-GCH Ⅰ,原位杂交证实其在COS7表达阳性率为70%~80%。结论 GCH Ⅰ有望用于帕金森病的基因治疗。
关键词: 三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ, RT-PCR, 原位杂交, 人胚肝脏
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【期刊论文】逆转录病毒载体ex vivo途径表达TH和GDNF基因①
杨慧, 段德义, 吴杰军, 赵春礼, 蔡青, 徐群渊
神经解剖学杂志,2004,20(3):215~219,-0001,():
为了通过逆转录病毒载体ex vivo途径高效表达TH和GDNF基因。本实验构建有TH和GDNF基因的重组逆转录病毒载体pLHCX/TH和pLNCX2/GDN F,分别转染包装细胞PA317和PT67中;经筛选、RT-PCR、免疫组化等鉴定得到产毒细胞PA 317/TH和PT67/GDNF。培养COS-7细胞,以两种产毒细胞的上清分别感染COS-7细胞,筛选后,免疫组化、原位杂交检 测基因的表达量,将基因改造的细胞移植到大鼠纹状体内,免疫组化检测体内移植的TH、GDNF基因的表达。结果表明:TH和GDNF基因可在靶细胞表达,且筛选后基因表达阳性细胞显著增加;TH阳性率达50%,GDNF阳性率达70%。在体内实验中,可以观察到这两种外源基因可同时在大鼠脑内移植区表达。以上结果提示,TH和GDNF基因改造细胞,可通过ex vivo 途径在脑内移植区高效表达。这一实验结果将对Park inson病复合性基因治疗提供依据。
关键词: 基因治疗, 逆转录病毒, 酪氨酸羟化酶, 胶质源性神经营养因子
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杨慧, *, 徐群渊, Roper S, Chandhari N
解剖学报,2002,33(1):1~5,-0001,():
目的 利用脑型及味型mGluR4在体内外的表达,检测两种受体结构功能上的差异,从而证实它们在信号转导功能上的不同。方法 将克隆得到的脑型及味型mGluR4分别通过脂质体介导转染CHO 细胞。在L-MSG和L-AP4 的作用下,检测两种受体的功能。利用Western Blot及原位杂交技术,分别检测它们在体内外的表达。结果 转染脑型及味型mGluR4的CHO细胞,表达两种不同分子量的免疫活性蛋白,其中脑型分子量约为120kD而味型约为68kD。在L-MSG和L-AP4作用下,味型mGluR4对刺激物反应的浓度远高于脑型mGluR4。对大鼠脑组织及舌味蕾的原位杂交证明,mGluR4 在小脑颗粒细胞有很高的表达,而在味蕾细胞表达率较低,阳性细胞仅占味蕾细胞的5%。结论 味组织中的mGluR4 与脑组织中mGluR4在结构和功能上有明显不同。味型mGluR4特异性表达于味蕾细胞,在高于脑内的浓度下,结合细胞外的谷氨酸,通过降低cAMP的浓度引发味觉信号转导。是谷氨酸味觉的特异性受体。
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【期刊论文】Activation of Erk1/2 and Akt in astrocytes under ischemia
杨慧, Zhongjian Jiang, a, Yun Zhang, b, Xiaoqian Chen, b Philip Yeung Lam, b Hui Yang, a Qunyuan Xu, a and Albert Cheung Hoi Yub, c, *
Biochemical and Biophysical Research Communications 294(2002)726-33,-0001,():
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关键词: U0126, LY294002, Astrocyte, Ischemia, Erk, Akt, Bcl-2, Bcl-xL
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