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2011年06月21日

【期刊论文】单核细胞化学吸引蛋白质1小分子干扰RNA人肾小管上皮细胞株的建立

严海东, 刘娜, 李雪竹

中华肾脏病杂志,2007,23(4):251~256,-0001,():

摘要

目的建立单核细胞化学吸引蛋白质1(MCP-1)小分子干扰RNA(siRNA)人肾小管上皮细胞株,并检测MCP-1 siRNA对人肾小管上皮细胞(HKC)MCP-1基因的抑制效应。方法针对人MCP-1 mRNA 67、116、142位点设计并合成3对MCP-1 siRNA序列。构建MCP-1特异性siRNA真核表达载体,以脂质体法瞬时转染至HKC。转染24h后分别应用实时定量RT-PCR及Westem印迹技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达,筛选出抑制效率最高的MCP-1 siRNA。以筛选出的MCP-1 siRNA序列构建慢病毒穿梭质粒。使用慢病毒穿梭质粒进行慢病毒颗粒的包装和生产,得到病毒液并确定其滴度。以病毒液感染HKC,筛选MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株,并应用实时定量RT-PCR及Westem印迹技术检测HKc内MCP-1 mRNA、蛋白表达。结果成功建市MCP-1特异性siRNA人肾小管上皮细胞株。MCP-1 siRNA稳定转染能下调人肾小管上=皮细胞MCP-1 mRNA(68.49±6.38)%、蛋白(72.97±6.13)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论MCP-1特异性siRNA能高效抑制HKC内MCP-1基因表达。MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株的建立为MCP-1基因功能及肾问质纤维化防治研究提供实验材料和依据。

关键词: 单核细胞化学吸引蛋白质1; RNA, 小分子干扰; 纤维化; 人肾小管上皮细胞; 转染

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2011年05月27日

【期刊论文】重型病毒性肝炎患者预后模型的临床应用分析

丁惠国, 单晶, 徐瑞平, 丁小君, 王慧芬, 林伟, 马兵, 董培玲, 张斌丁, 惠国

中国危重病急救医学,2005,17(10):586~588,-0001,():

摘要

目的评价重型肝炎患者预后评分模型(MSLD)的临床应用价值。方法应用我们已建立的MSLD,采用队列研究方法前瞻性分析103例重型肝炎患者的生存时间,其中慢性者85例,亚急性者8例,急性者10例,随访终点为6个月。根据受试者工作特征曲线(ROC)确定MSLD最佳危险值;应用Kaplan-Meier进行统计分析,预测患者2周、4周、3个月和6个月的生存率。结果MSLD分数值-5为最佳危险值;MSLD总分≤4分(A组)和MSLD总分≥5分B组)两组患者的生存曲线有明显差异(近期及远期危险性差异均有显著性(P均<0.000)。经内科治疗2周后,总分无变化或增加者的2周和4周生存率分别为37.9%和3.5%;总分降低1分者的2周、4周和3个月生存率分别为61.5%、15.4%和5.8%;总分降低2分以上者的2周、4周、3个月和6个月的生存率分别为95.0%、90.0%、63.9%和52.4%P<0.001)。结论MSLD对预测重型肝炎患者近期预后(6个月内)具有重要意义,并可作为预测内科治疗重型肝炎疗效的指标之一。

关键词: 病毒性肝炎,, 重型, 生存分析, 评分模型

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2011年05月27日

【期刊论文】复方中药861对大鼠肝星状细胞系一氧化氮合酶表达及其活性的影响*

丁惠国, 王宝恩△, 尚宏伟, 王兴翠, 唐素珍, 贾继东, 赵春惠

中国中西医结合杂志,2000,22(5):362~394,-0001,():

摘要

目的:研究复方中药861对大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)一氧化氮合酶(NOs)表达及其酶活性的影响,并探讨该药预防、治疗早期门脉高压的可行性。方法:细胞密度为1×105/ml的HSC-T6接种于细胞培养皿中,95%02,5%C02,37℃,培养24h进行以下分组实验,每组重复6皿,继续培养24h,1组:HSC-T6空白对照组;2组:HSC-T6加复方中药861(2mg/m1);3组:HSC-T6加复方中药861(4mg/m1);4组:HSC-T6加复方中药861(8rng/m1);5组:Hs0k加复方中药861(4rng/m1)加L一硝基精氨酸甲酯(L-NAME,4mg/m1)。采用化学比色法测定NOs活性,采用硝酸还原酶法测定培养液一氧化氮(NO)水平。4%多聚甲醛固定细胞2h,采用免疫细胞化学法观察Hs0R诱导型一氧化氮合酶(iNOs)表达。结果:复方中药861能增加HSC-T6 NOs活性(P<0.01),上清液NO水平也平行增加(P<0.01),L-NAME不能抑制复方中药861刺激的HSC-T6合成、分泌NO增加(P>0.05)。免疫细胞化学研究发现,活化的HSC-T6细胞浆有iN-0s表达,复方中药861能增加HSC-T6 iNOs表达。结论:活化HSC-T6 iNOs表达阳性,与自分泌NO有关;复方中药861能明显增加HSC-T6iNOs表达及其酶活性,NO合成、分泌增加。复方中药861可能通过增加肝星状细胞分泌NO途径,抑制肝星状细胞的收缩,从而降低肝窦阻力。因此,复方中药861在预防、治疗早期门脉高压中可能具有重要作用。

关键词: 复方中药861 肝星状细胞 一氧化氮合酶 门脉高压

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2011年04月29日

【期刊论文】PTCA前后应用多普勒导丝测定冠状动脉血流速度及储备功能的意义

魏盟, 魏盟钱, 菊英, 沈学东, 樊冰, 王齐冰, 严卫, 邵志丽, 潘翠珍, 戎卫海, 陈灏珠

临床心血管,1999,15(9),-0001,():

摘要

目的:评价经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)前后应用多普勒导丝测定冠状动脉血流速度及冠状动脉血流储备的变化意义。方法:对25例冠心病患者的31支冠状动脉行PTCA。于PTCA前后用多普勒导丝分别记录狭窄近端和远端的平均峰值血流速度(APV),狭窄近、远端血流速度比(P/DVR)及冠状动脉血流速度储备(CFR)。结果:PTCA前31支冠状动脉的直径狭窄率为(84.88±12.25)%。PTCA后残余狭窄为27.65%(P<0.05),术后病变冠状动脉近端APV较PTCA前有所增加,但差别未达统计学意义〔(23.74±15.98)cm/s:(27.36±18.32cm/s,P=0.06〕。狭窄远端基础APV、充血相APV及CFR均较术前明显增加〔(15.07±11.63)cm/s:(23.09±10.33)cm/s,(20.53±10.69)cm/s:(41.67±17.43)cm/s,1.20±0.40: 1.81±0.66,均P<0.05〕,P/DVR则明显降低(1.84±1.06: 1.45±0.74,P<0.05)。但残余狭窄的多少与PTCA后基础及充血相APV、CFR、P/DVR改善的程度之间并无明显的相关关系。结论:多普勒导丝测量技术可以更细致的评价PTCA前后冠状动脉血流模式的变化及PTCA术后的急性期疗效,是一种值得在临床上使用并进一步深入研究的新方法。

关键词: 超声心动图, 多普勒, 血管成形术, 经腔, 经皮冠状动脉, 血流速度

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2011年04月07日

【期刊论文】Case report Successful application of nonmyeloablative stem cell transplantation for paroxysmal nocturnal hemoglobinuria

李建勇, XU Wei, LI Jian-yong, WANG Li, YU Hui, ZHANG Su-jiang and SHENG Rui-lan

Chin Med J 2007; 120(22): 2056-2058,-0001,():

摘要

暂无

关键词: nonmyeloablative stem cell transplantation, hemoglobinuria,, paroxysmal

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2011年04月07日

【期刊论文】Multiplex fluorescence in situ hybridization in identifying chromosome involvement of complex karyotypes in de novo myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia

李建勇, W. XU*, J.-Y. LI*, Q. LIU*, Y. ZHU*, J.-L. PAN†, H.-R. QIU*, Y.-Q. XUE†

Journal compilation 2008 Blackwell Publishing Ltd, Int. Jnl. Lab. Hem. 2010, 32, e86-e95,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Multiplex fluorescence in situ hybridization,, myelodysplastic syndromes,, acute myeloid leukemia,, complex chromosomal aberrations

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2010年12月10日

【期刊论文】In vivo transfection of NF-jB decoy oligodeoxynucleotides attenuate renal ischemia/reperfusion injury in rats

丁小强, CHANG CHUN CAO, XIAO QIANG DING, ZHOU LOU OU, CHUN FENG LIU, PENG LI, LEIWANG, and CHUN FANG ZHU

Kidney International, Vol. 65 (2004), pp. 834-845,-0001,():

摘要

暂无

关键词: acute renal failure,, ischemia,, nuclear factor-jB,, nuclear factor-jB decoy oligodeoxynucletides,, transfection.,

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2010年12月10日

【期刊论文】肾脏缺血预适应及细胞间黏附分子1的作用

丁小强, 李鹏, 曹长春, 邹建洲, 欧周罗

中国肾脏病杂志,2004,20(3):199~201,-0001,():

摘要

目的 建立肾脏缺血预适应大鼠模型,探讨缺血预适应对细胞间黏附分子(ICAM)-1mRNA表达的影响。方法摘除右肾后,对左肾采用2min缺血+5min再灌注,4个循环后再缺血45min,建立大鼠肾脏缺血预适应模型。RT-PCR检测肾脏ICAM-1 mRNA表达。结果缺血预适应使肾缺血后Scr的升高幅度值减少,肾小管损伤减轻,髓质ICAM-1 mRNA表达降低。结论 肾脏缺血预适应可从组织学和功能上减轻肾脏的急性缺血性损伤,这可能与肾组织ICAM-1表达降低及局部炎症减轻有关。

关键词: 缺血预处理, 肾功能衰竭,, 急性, 细胞间黏附分子

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2010年11月29日

【期刊论文】急性冠状动脉综合征和稳定型心绞痛患者的血管内超声显像结果

钱菊英, 葛均波, 吴鸿谊, 樊冰, 刘学波, 王齐兵, 葛雷, 路艳

中国介入心脏病学杂志,2005,13(2):71~75,-0001,():

摘要

目的采用血管内超声显像(IVUS)的方法比较急性冠状动脉综合征(ACS)和稳定型心绞痛(SAP)患者的冠状动脉病变性质。方法共入选85例患者(男性59例,平均年龄59±10岁),其中ACS患者50例,SAP患者35例,对罪犯血管采用clearView或Galaxy2(BostonScientific,USA)行IVUS检查。IVUS分析资料包括罪犯病变的定性分析和定量测定。定量测定的数据包括病变部位和参照节段的血管面积(EEMcsa)、管腔面积(Lcsa)和斑块面积(EEMcsa-Lcsa),斑块负荷:(EEMc卅Lcsa)/EEMcsa×100%,计算血管重构指数(Pd)。RI>l0者为正性重构,Pd<l0者为负性重构。结果ACS患者的罪犯病变中软斑块为主,占74%,明显高于SAP患者的3l%(P=0.001),更多斑块破裂[ACS(38%)比SAP(8%),P<0.0022和血栓形成[ACS(24%)比SAP(0%),P=0.0022ACS患者的病变处EEMcsa(150±4.4nmF比113±36nmF,P<0.001),斑块面积(115±4lnmF比76±29m辞,P<0001),斑块负荷(76.7%±10.4%比668%±126%,P<0.001)和Pd(105±011比095±016,P:0002)均显著高于SAP。ACS患者冠状动脉病变部位的正性重构较SAP患者更常见(67%比36%,P=0006)。两组病变均主要为偏心性(90%比83%,P=0932)。结论ACS患者的冠状动脉病变主要为偏心性病变和软斑块,与SAP患者相比,ACS患者冠状动脉病变中软斑块、斑块破裂、血栓形成和正性重构更常见。

关键词: 冠状动脉疾病; 超声检查, 介入性

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2009年11月08日

【期刊论文】紫杉醇对培养的兔血管平滑肌细胞和内皮细胞增生与迁移的影响及其相互关系

黄岚, 武晓静, 晋军, 宋明宝, 于世勇

中华心血管杂志,2004,32(7):626~630,-0001,():

摘要

目的观察不同浓度紫杉醇对兔血管平滑肌细胞和内皮细胞增生、迁移的影响及其相互关系。方法培养兔血管平滑肌细胞及内皮细胞,建立细胞共培养体系,模拟紫杉醇对血管壁平滑肌细胞及内皮细胞的作用方式,观察不同浓度紫杉醇对兔血管平滑肌细胞及内皮细胞DNA合成、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达的影响,测定不同浓度紫杉醇对兔血管平滑肌细胞及内皮细胞的迁移率,用直线回归法推算紫杉醇对平滑肌细胞及内皮细胞增生迁移的半数有效抑制浓度(IC50)。结果溶剂对照组平滑肌细胞及内皮细胞氚一胸腺嘧啶脱氧核核苷(3H-TdR)掺入、PCNA蛋白表达和迁移与对照组相比差异均无显著性。在1 nmol/L~lμmol/L之间,紫杉醇呈浓度依赖地抑制平滑肌细胞3H-TdR掺入、PCNA蛋白表达和迁移(n=6,P<0.05);在10nmol/L~1μmol/L之间,紫杉醇呈浓度依赖地抑制内皮细胞3H-TdR掺入、PCNA蛋白表达和迁移(n=6,P<0.05);1nmol/L酌紫杉醇对内皮细胞3H-TdR掺入和PCNA蛋白表达有抑制倾向,但与对照组相比差异无显著性,而lnmol/L的紫杉醇却显著抑制内皮细胞迁移(n=6,P<0.05)。紫杉醇对兔血管平滑肌细胞增生、迁移抑制的IC50分别为(10.09±0.47)和(9.16±0.54)nmol/L,对内皮细胞增生、迁移抑制的IC50分别为(19.05±0.35)和(5.37±0.51)nmol/L。结论一定浓度的紫杉醇在抑制兔血管平滑肌细胞增生迁移的同时可能会抑制内皮细胞增生迁移,延迟内皮再生。

关键词: 紫杉酚, 肌., 平滑,, 血管, 内皮,, 血管, 增生, 细胞运动, 冠状动脉再狭窄

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2009年11月08日

【期刊论文】心绞痛患者冠状动脉内皮损伤及意义

黄岚, 于世勇, 宋耀明, 李爱民, 覃军, 耿召华

中华内科杂志,2003,42(7):473~475,-0001,():

摘要

目的探讨冠心病患者冠状动脉(冠脉)内皮细胞损伤及在冠心病发生、发展过程中的临床意义。方法37例心绞痛患者均经冠脉造影证实有明显冠脉狭窄,测定其冠状赛和外周血中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)含量和循环内皮细胞(CEC)数量,比较不稳定性心绞痛、稳定型心绞痛和对照组间相同和不同部位之间指标的差异。结果不稳定性心绞痛、稳定型心绞痛患者冠状窦和外周血中NO含量较对照组均明显降低(P<0.01或P<0.05),ET含量和CEC数量均明显增高(P<0. 01或P<0.05),不稳定性心绞痛组NO含量较稳定型心绞痛组明显降低(P<0.05),ET含量和CEC数量均明显增高(P<0.01),不稳定性心绞痛和稳定型心绞痛患者冠状窦血中NO含量均明显低丁外周血(P<0. 05) ,ET含量和CEC数量均明显高于外周血(P<O.01或P<0.05),对照组冠状窦与外周血相比三项指标均未见明显差别(P>0.05)。结论心绞痛患者冠脉局部内皮受损及功能紊乱与病情严重程度相一致,内皮损伤的加重可能是病情恶化以及急性冠脉事件发生的病理生理基础。

关键词: 心绞痛, 冠状动脉疾病, 内皮,, 血管

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2009年11月08日

【期刊论文】人钠/二羧酸协同转运蛋白1基因融合表达及其抗体制备

何娅妮, 陈香美*, 于志恒, 吕杨, 师锁柱, 朱晗玉, 彭丽霞

中国生物化学与分子生物学报,2002,18(3):356~360,-0001,():

摘要

利用DNA重组技术,将编码人钠/羧酸协同转运蛋白l(hNaDCI)抗原表位区(W138-Q219)的cDNA克隆至融合表达栽体pCEX-5 X-I,构建重组质粒pCEX-hNaDCL6。在大肠杆菌BI21中,经IPTC诱导,获得谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-hNaDCI重组融合蛋白的表达。以谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析,获得纯化的CST-hNaDCI,以此为免疫原制备的抗hNaDCI抗体可特异性识别人类和大鼠肾组织以及小肠组织中天然的钠/二羧酸协同转运蛋白1。利用该抗体,首次证实了hNaDC1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘,与大鼠钠,二羧酸协同转运蛋白l(SDCTl)分布一致。

关键词: 人钠/, 二羧酸协同转运蛋白1,, 融合表达,, 抗体制备

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2009年11月08日

【期刊论文】血红素氧合酶在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达

钱桂生, 王关嵩, 毛宝龄, 蔡文琴, 关崧

中华内科杂志,2002,41(7):439~443,-0001,():

摘要

目的观察血红素氧合酶(HO)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中的表达及其变化。方法设COPD组、COPD合并肺癌组、单纯肺癌组及正常健康组。4组均进行血气分析和肺功能测定。应用紫外分光光度计间接测定动脉血一氧化碳血红蛋白(COHb)含量和肺脏HO-1的活性。用逆转录-聚合酶链反应检测肺脏和肺动脉组织HO mRNA表达水平。用免疫组化法测定肺脏组织HO蛋白的表达。结果COPD组和COPD合并肺癌组患者动脉血氧分压低于60 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),提示这两组患者均为I型呼吸衰竭患者。与正常健康组比较,这两组患者的肺一氧化碳弥散量、肺一氧化碳弥散量/肺泡通气量及1秒钟用力呼气容积占预计值的百分比均显著降低,残气容积/肺总量显著升高,提示这两组患者均患有中度COPD(Ⅱ级)。这两组患者的COHb明显高于单纯肺癌组和正常健康组(P<0.01),单纯肺癌组和正常健康组比较差异无显著性。COPD合并肺癌组患者胆红素生成量、肺脏及肺动脉组织HO-1mRNA吸光度值明显高于单纯肺癌组和正常健康组。HO-1免疫组化染色显示,COPD合并肺癌组非癌变肺组织肺泡壁细胞、肺内小血管和支气管壁细胞胞质HO-1的表达显著增强。结论COPD患者HO-1表达增多。

关键词: 肺疾病,, 阻塞性, 血红素氧化酶

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2009年11月08日

【期刊论文】大鼠缺氧肺动脉高压模型肺组织信号转导与转录激活因子的表达

钱桂生, 王关嵩, 白莉, 陈琰, 吴国明, 周德山, 钱频

中华内科杂志,2003,42(11):768~772,-0001,():

摘要

目的 通过观察大鼠常压缺氧肺动脉高压模型肺组织信号传导与转录活化因子(STATs)的表达水平,探讨其在低氧性肺动脉高压(HPH)形成过程中参与的可能机制。方法健康成年雄性Wistar大鼠60只,随机分为缺氧组和健康对照组,缺氧组大鼠复制HPH模型。用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)和Northern hlot检测2组大鼠肺组织STATsmRNA的表达水平,免疫组化检测大鼠肺组织STATs蛋白的含量。结果RT-PCR扩增显示,缺氧1周大鼠肺组织STAT 1、STAT 2、STAT 3、STAT 5 mRNA表达水平升高,缺氧2周表达水平最高,缺氧3周表达水平降低,但明显高于健康对照组;且缺氧2周的表达水平高于其他缺氧时间(P<0. 05);STAT 4未检出。Northern blot显示,缺氧2周大鼠肺组织STAT 1、STAT 3、STAT 5 mRNA表达高于其他缺氧时间(P<0.01)。缺氧3周大鼠肺组织STAT 3和STAT 5组化染色可见,肺泡壁细胞、支气管壁细胞、小血管壁细胞及巨噬细胞的胞核呈紫蓝色;图像定量分析显示,缺氧3周大鼠肺组织STAT 3和STAT 5蛋白表达含量最高,缺氧4周含量降低.但仍高于健康对照组(P<0.01)。结论大鼠常压缺氧肺动脉高压模型肺组织STATs mRNA和蛋白表达增高,提示STAT可能参与了HPH的发病机制。

关键词: 高血压,, 肺性, 低氧, 信号转导语转录激活因子

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2009年11月08日

【期刊论文】缺氧肺动脉高压大鼠肺组织中白细胞介素6和Janus激酶表达的变化

钱桂生, 王关嵩, 毛宝龄, 蔡文琴, 陈维中, 陈琰

中和结核和呼吸杂志,2003,26(11):664~667,-0001,():

摘要

目的研究缺氧肺动脉高压(HPH)肺组织中白细胞介素6(IL-6)及Janus激酶(JAKs)表达的变化。方法 雄性Wistar大鼠60只,随机分为缺氧1周(H1)、缺氧2周(H2)、缺氧3周(H2)、缺氧4周(H4)和常氧(N)组,每组12只。常压缺氧舱复制HPH大鼠模型。应用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织IL-6和JAKs mRNA的表达水平;免疫组化法检测肺组织JAKs蛋白的含量和细胞形态学变化。结果 (1)H1、H2和H3组大鼠肺组织IL-6 mRNA水平(分别为1.67±0.09、2.26 +0.12、1.55 +0.11)显著高于N组(1.20±0.11,P均<0.01);Hl、H2和H3组大鼠肺组织JAKI mRNA水平(分别为2.11 ±0. 09、2.85 +0. 12、2.36±0.13)显著高于N组(1.62±0.10,P均<0.O1);H1、H2和H3组大鼠JAK2 mRNA水平(分别为1.41±0.07、2.02±0.13、1.36±0.09)显著高于N组(1.01±0.09,P均<0.01);H1、H2和H3组大鼠肺组织JAK3 mRNA水平(分别为0.86±0.11,1.45±0.10、0.91±0.13)显著高于N组(0.55±0.08,P均<0.01);H1、H2组大鼠肺组织TYK2 mRNA水平(分别为1.36±0.10,1.76±0.11)显著高丁.N组(0.57±0.07,P均<0.01);其中H2组大鼠肺组织表达IL-6和JAKs mRNA水平显著高于H1组和H2组(P均<0.01);(2)H2组肺组织JAKI和JAK3组织化学染色可见,肺泡壁细胞、支气管壁细胞、小血管壁细胞以及巨噬细胞的胞浆呈棕黄色;TIGER图像定量分析表明,H3组JAKl(5.36±0.32)和JAK3(4.88±0.29)蛋白表达显著高于N组(分别为1.52±0.18,1.22±0.09;P均<0.01)。结论HPH大鼠肺组织中IL-6和JAKs mRNA和蛋白表达升高,说明IL-6/JAKs通路参与了HPH的发病机制。

关键词: 高血压,, 肺性, 缺氧, Janus激酶, 肺, 白细胞介素6

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2009年11月08日

【期刊论文】急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征研究现状与展望

钱桂生

解放军医学杂志,2003,28(2):97~101,-0001,():

摘要

要急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征是指由心源性以外的各种肺内外致病因素所导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭。近年来,对急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的命名和定义进行了更新和规范,对发病机制有了新的认识,提出了临床诊断标准和综合治疗措施。随着对急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的深入研究,从炎症失控、调控着手去认识发病机制,采取针对性治疗,可望取得突破性进展。

关键词: 呼吸窘迫综合征,, 成人形, 炎症, 呼吸功能不全, 全身炎症反应综合征

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2009年11月03日

【期刊论文】RNA干扰技术对肝癌细胞内源survlvln基因表达的影响*

黄爱龙, 闫歌), 蒲丹), 唐霓), 高小玲), 宋文鑫), 卢年芳), 吴刚), TONG-CHUAN HE)黄爱龙)**

生物化学与生物物理进展,2004,31(9):829~832,-0001,():

摘要

应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对凋亡抑制因子survlvln的siRNA抑制肝癌细胞株内源survlvln基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin至肝癌细胞株SMMC-7721,通过免疫荧光、蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survlvln蛋白表达及mRNA转录水平的变化。结果表明:构建的三种重组质粒pshRNA-survivinl/2/3均能明显抑制survlvln基因的表达;应用免疫荧光检测survlvln基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin的实验组survlvln荧光强度明显低于转染载体pTZU6+1和pshRNA-GFP对照组;蛋白质印迹结果表明,重组质粒pshRNA-survivin明显抑制survlvln蛋白韵表达,抑制率为62%~78%,通过半定量RT-PCR检测到su rvivln基因mRNA转录明显减少,抑制率为57%~64%。由上述结果可以得出结论:重组质粒pshRNAsurvivlri可明显抑制SMMC-7721细胞内源survivin的表达和mRNA的转录,为survlvln介导的肿瘤基因沉寂疗法提供实验基础。

关键词: RNA干扰,, 肝癌细胞株,, survIvin基因

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2009年11月03日

【期刊论文】应用RNA干扰治疗小鼠急性乙型肝炎病毒感染

黄爱龙, 吴莹, 唐霓, 张秉强, 卢年芳

中华医学杂志,2005,85(9):630~634,-0001,():

摘要

目的建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染的动物模型,在此基础上观察小干扰RNA(siRNA)对HBV复制和表达的影响。方法通过尾静脉注射1.3倍的HBV真核表达质粒pHBVl.3建立小鼠急性乙型肝炎感染模型,再将其与针对乙型肝炎病毒核心区的siRNA表达载体(pSI-C)共注射,于注射后第6天取血测血清HBsAg(ELISA),做肝组织HBcAg免疫组化,通过RT-PCR检测肝组织HBV C区mRNA转录子的水平。同时设立PBS对照组、无关干扰组与突变干扰组。结果转染后第6天血清HBSAg在pHBVl.3感染组中高表达(A值为4.08~9.04,平均值为5.07±1.07,A值≥2.1为阳性),肝内HBcAg阳性率为5%~10%:pSI-C干扰组HBSAg,HBcAg的表达均受到抑制,血清HBsAg阴性,A值为0.04~1.5,平均值为0.62±0.59,与感染组相比有显著性差异(P<0.01),肝内HBcAg几乎无表达,RT-PCR示肝内HBV C mRNA水平明显降低。而无关干扰pGFP及突变的干扰序列pSI-C mut则无此作用。结论RNAi技术能特异,高效地抑制小鼠体内HBV的复制和表达,提示siRNA作为一种新型抗病毒药物的巨大潜能,而通过水动力法建立的小鼠急性乙型肝炎病毒感染的动物模型,一定程度上解决了长期以来缺乏合适的HBV感染动物模型的问题,为今后进行药物筛选及抗病毒治疗的研究拓展了新的思路。

关键词: 肝炎病毒,, 乙型, 模型,, 动物, 基因疗法, RNA干扰

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2009年11月03日

【期刊论文】肿瘤特异性Survivin启动子与甲胎蛋白启动子的活性评价与比较

黄爱龙, 况舸, 唐霓

中华肝脏病杂志,2005,13(6):440~442,-0001,():

摘要

目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白(AFP)基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP基因的启动子片段,并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒中,通过测定荧光素酶报告基因的表达情况,测定Survivin与AFP基因启动子的转录活性,同时采用巨细胞病毒启动子为对照,评价其转录活性水平。结果Survivin启动子在肝癌细胞中具有相当强的活性,其活性水平在高表达AFP的肝癌细胞中为AFP启动子的54~100倍,达到巨细胞病毒启动子活性的16%~21%。结论Survivin启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性,可望开发成为新的肝癌靶向性基因治疗工具。

关键词: 癌,, 肝细胞, 启动区(, 遗传学), 基因疗法, Survivin基因

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2009年11月02日

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