您当前所在位置: 首页 > 学者
为您找到 4 条相关结果
按相关度
  • 按相关度
  • 按时间
  • 按阅读量
  • 代表性成果优先

上传时间

2006年11月01日

【期刊论文】华支睾吸虫溶血磷脂酶基因的识别、克隆和序列分析*

余新炳, 何东苟, 余新炳*, *, 吴忠道, 徐劲, 吴德, 胡旭初, 陈守义

中国寄生虫病防治杂志,2004,17(2):96~99,-0001,():

摘要

目的筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫溶血磷脂酶(csLysoPLAH)基因编码区克隆到原核表达质粒PGEX-4T-1和真核表达质粒pcDNA3上,为进一步研究其功能奠定基础。方法对华支睾吸虫cDNA文库进行随机筛选并测序,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motif-san、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析。根据PGEX-4T-1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的sLysoPLAHcDNA编码序列设计引物,进行PcR扩增,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3上。构建的PGEX-4T-1-csLysoPLAH、pcDNA3-csLysoPLAH重组表达质粒经PcR、双酶切及测序证实。结果发现sLysoPLAH基因,完整阅读框含708个碱基,编码235个氨基酸,理论分子质量为25.2628ku,理论pI为6.03。序列分析表明,csLysoPLAH编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,csLysoPLAH具有磷脂酶/羧酸酯酶保守功能域和完整的脂酶保守功能域,并含有丝氨酸酯酶特征性的标签肽(即GxsxG)。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论发现华支睾吸虫溶血磷脂酶基因,并成功构建原核和真核重组表达质粒。

关键词: 华支睾吸虫, 溶血磷脂酶, 克隆 序列分析

  • 21浏览

  • 0点赞

  • 0收藏

  • 0分享

  • 193下载

  • 0评论

  • 引用

上传时间

2006年11月01日

【期刊论文】华支睾吸虫卵黄前体蛋白B基因的识别、序列分析和克隆表达

余新炳, 黄艳, 吴忠道, 吴德, 胡旭初, *

寄生虫与医学昆虫学报,2005,12(1):20~24,-0001,():

摘要

为识别和克隆华支睾吸虫新基因,对华支睾cDNA质粒文库进行随机筛选并测序,并利用在线生物信息学工具进行序列分析,识别华支睾吸虫未知基因,同时根据PGEX-4T-1多克隆位点及未知基因的序列设计引物,PCR扩增目的基因,并构建原核重组质粒。结果发现了CsvpB基因,其完整阅读框含762个碱基,编码254个氨基酸,理论分子量为27.7kDa。序列分析表明,CsvpB蛋白与其它物种的卵黄前体蛋白有较高的同源性,所构建的重组原核表达质粒PGEX-4T-1-vpB经PcR、双酶切及测序证实与目标基因相符。

关键词: 华支睾吸虫, 卵黄前体蛋白B基因, 序列分析, 克隆

  • 27浏览

  • 0点赞

  • 0收藏

  • 0分享

  • 108下载

  • 0评论

  • 引用

上传时间

2006年11月01日

【期刊论文】华支睾吸虫成虫转录辅激活因子基因在原核细胞中的克隆、表达及其生物功能分析

余新炳, 张咏莉, 余新炳*, 吴德, 吴忠道, 毕惠祥

中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2005,23(1):18~23,-0001,():

摘要

目的构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子(transcriptionalcoactivator,Tc)基因(TC基因)原核重组质粒,进行原核表达、鉴定及生物功能分析:方法根据TC基因已知序列设计1对引物,从华支睾吸虫成虫cDNA文库中扩增TC基因片段;将目的基因进行聚合酶链反应(NR),其产物和空质粒pGEX-4T-1.pET30a(+)同时用限制性内切酶BamHJ、SalI双酶切,纯化回收后连接并转化大肠埃希菌(E.coliBL21)将构建的重组质粒pGEX-4T-1-TC和pET30a(+)-TC分别经双酶切、PCR及测序鉴定后在大肠埃希菌BL21中诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹祛(Westemblotting)鉴定其表达效果。用亲和层析法纯化重组质粒pET30a(+)-TC表达产生的组氨酸重组蛋白(His-TC)结果构建了TC基因原核重组质粒pGEX-4T-1-TC和pFT30a(+)-Tc0sPS-PAGE结果表明TC基因在大肠埃希菌BL2l系统获得高效表达,其重组蛋白分子量与理论值相符:Westemblotting结果表明重组质粒pGEX-4T-1-TC表达的谷胱甘肽硫转移酶(GST)重组蛋白(GST-TC)可被华支睾吸虫免疫兔血清识别,具有免疫反应性。纯化的TC基因的组氨酸(His)重组蛋白(His-TC)经sDSPAGE显示单一条带:结论通过生物信息学方法由华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出TC基因,并成功予以克隆、表达及纯化。

关键词: 华支睾吸虫, 转录辅激活因子基因, 基因重组, 基因克隆 原核表达

  • 11浏览

  • 0点赞

  • 0收藏

  • 0分享

  • 73下载

  • 0评论

  • 引用

上传时间

2006年11月01日

【期刊论文】华支睾吸虫表膜相关蛋白基因的扩增、序列分析和克隆*

余新炳, 黄艳, 徐劲, 吴德, 胡旭初, 王海, 吴忠道

中国人兽共患病杂志,2005,21(12):1064~1067,-0001,():

摘要

目的识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫表膜相关蛋白(tegumentalproteinofClonorchissinensis,CsTP)的cDNA序列克隆到原核载体中,为进一步的研究奠定基础。方法对华支睾cDNA质粒文库进行随机筛选并测序,用在线生物信息学工具进行序列分析,识别CsTP基因,并对其进行同源性、物理性质及结构分析。设计引物,从华支睾cD-NA质粒文库中扩增目的基因cDNA序列,并构建原核重组质粒,相同引物从华支睾吸虫基因组中扩增出CsTP的DNA序列。结果发现CsTP基因,其cDNA完整阅读框含555个碱基,编码184个氨基酸,理论分子量为20.7kDa;其DNA序列含1393个碱基,含有3个外显子、2个内含子。序列分析表明,CsTP蛋白与其它物种的表皮蛋白或膜相关蛋白有一定的同源性。所构建的重组原核表达质粒PGEX-4T-1-CsTP经PCR、双酶切及测序证实与目的基因相符。结论发现华支睾吸虫表膜相关蛋白基因,成功构建其重组原核表达质粒为进一步研究该基因的功能提供了条件。

关键词: 华支睾吸虫, 表膜相关蛋白基因, 序列分析, 克隆

  • 24浏览

  • 0点赞

  • 0收藏

  • 0分享

  • 63下载

  • 0评论

  • 引用