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2007年05月28日

【期刊论文】海兰鸡白细胞介素-18全基因的克隆与序列分析

崔保安, 陈红英, 黄青云, 李新生, 王学斌

中国预防兽医学报2006年1月第28卷第1期/Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Jan., 2006, Vol. 28, No. 1,-0001,():

摘要

白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)是一种能诱导产生IFN一y的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应( RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597bp,与在GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。

关键词: 鸡IL-18基因, 克隆 序列测定

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2007年05月28日

【期刊论文】猪伪狂犬病病毒单抗双夹心ELISA的构建

崔保安, 祁小乐, 牛春玲, 王莉娟, 刘占通

河南农业大学学报2004年12月第38卷第4期/Journal of Henan Agricultural University Dec., 2004, Vol. 38, No. 4,-0001,():

摘要

建立了检测猪伪狂犬病痛毒(Pseudo rabies virus,PRV)的单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验(Enzyme-Iinked immunosor-bent assay,ELISA)方法,为该病的快速诊断奠定了基础,作者对其组装条件进行了筛选,认为兔抗PRV IgG最佳包被质量浓度为4.59mg·L-1;抗PRV的单克隆抗体(Monoclonal antibodies,McAb)的最佳质量浓度为6.45mg·L-1;最佳封闭剂为10gL-1BSA(牛血清白蛋白),封闭时问为60min,制定了科学的结果判定标准,最低病毒检出量为200µg·L-1.与病毒分离、动物试验和中和试验相比较,该方法特异、灵敏、可靠、方便。

关键词: 猪伪狂犬病病毒, 克隆抗体, 双夹心ELISA

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2007年05月28日

【期刊论文】伪狂犬病病毒gD、gE基因的克隆及转移载体的构建

崔保安, 胡涛, 杨明凡, 王学斌, 张素梅, 王岩

中国预防兽医学报2004年3月第26卷第2期/Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Mar., 2004, Vol. 26, No. 2,-0001,():

摘要

利用PCR扩增了伪狂犬病病毒Min-A株gD、gE基因,扩增产物克隆于pGEM-T Easy载体。将gD、gE基因连接于质粒pUC18获得pUgDgE,缺失质粒pUgDgE的BamHI和BstEII位点间391bp的片段。在此缺失位置插入来自质粒pcD-NA3.1.的一段含hCMV启动子、多克隆位点和Neo报告基因的片段,构建了通用转移载体pgD-M-gE。该转移载体缺失了伪狂犬病病毒gl基因和gE基因ORF5’端363 bp的碱基,有II个酶切位点可供外源基因的插入,上下游侧翼分别为1.25bp和1.42bp。这为开发以伪狂犬病病毒为载体的多价基因工程疫苗提供了有力工具。

关键词: 伪狂犬病毒, gD, gE, 克隆 通用转移载体

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2007年05月28日

【期刊论文】伪狂犬病病毒Min-A株TK基因的克隆与序列分析

崔保安, 胡涛, 王岩, 杨明凡, 王学斌, 张素梅

河南农业大学学报2004年3月第38卷第1期/Journal of Henan Agricultural University Mar., 2004, Vol. 38, No. 1,-0001,():

摘要

参考CeneBank收录的伪狂犬病病毒TK基因的序列设计了l对引物,对PRV Min-A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM-T Easy栽体.对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性.测序结果表明目的片段包含1个957bp的开放性阅读框(ORF),编码318个氨基酸组成的多肽,在TK ORF上游.22,-166,-199位存在3个GC框样序列,在终止密码子下游第110个核苷酸处的l306位存在有多聚腺苷加尾信号.PRV Min-A株与PRV Ea株、NIA-3株TK的核苷酸同源性分别为98.4%,97.9%;推导氨基酸的同源性分别为97.8%,97.2%.通过对a疱疹病毒TK氨基酸进行多序列比较,获得了在PRV TK氨基酸序列上的6个保守区间推测这些保守氨基酸对于胸苷激酶(TK)结构的稳定性和催化活性的发挥是必需的。

关键词: 伪狂犬病毒, 胸苷激酶, 克隆 序列分析

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