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2006年11月16日

【期刊论文】广州管圆线虫Y-丁基甜菜碱羟化酶基因的获得与分析*

詹希美, 孟锦绣, 梁瑜, 何蔼, 李卓雅, 雷智刚, 易冰, 张瑞琳

中国人兽共患病杂志,2004,20(3):186-189,-0001,():

摘要

目的对广州管圆线虫成虫cDNA文库的插入片段进行研究。方法铺平板培养广州管圆线虫成虫cDNA文库,从中挑选生长、分离良好的噬菌斑进行PCR扩增,根据PCR产物电泳结果挑选较大的cDNA插入片段进行克隆、测序和原核诱导表达,对表达产物进行免疫学鉴定,用生物信息学方法分析其结构和功能。结果获得了国内外尚未见报道的广州管圆线虫全长基因,该基因长1416bp,编码由421个氨基酸组成的7-丁基甜菜碱羟化酶(gsmma-butyrobetaine,2-oxoglu-tarateclioxygenase。GAMMA-BBH,EC1.14,11.1);免疫学鉴定结果显示GAMMA-BBH不能与大鼠的抗血清结合。结论首次获得广州管圆线虫成虫GAMMA~BBH表达基因,为广州管圆线虫的研究提供实验室依据。

关键词: 广州管圆线虫, eDNA文库, 克隆 7-丁基甜菜碱羟化酶, 生物信息学

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2006年11月16日

【期刊论文】日本血吸虫组织蛋白酶L2(SjCL2)基因巴氏毕赤酵母表达载体的构建*

詹希美, 易冰, 何蔼, 雷智刚, 郑小英, 张瑞林, 孟锦绣, 中川军, 李卓雅

中国人兽共患病杂志,2004,20(5):390-393,-0001,():

摘要

目的扩增SjCL2基因,构建巴氏毕赤酵母表达载体pPICZB-SjCL2,为进一步研究其蛋白酶的功能奠定基础。方法运用RT-PCR技术,从日本血吸虫(中国大陆株)成虫总RNA中扩增获得SCL2基因;将其定向克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPICZaB质粒;经KpnI、xbaI双酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序分析SCL2基因并确定其读码框的正确插入。结果利用RT—PCR技术从日本血吸虫成虫总RNA中扩增到约1Kb大小的S]CL2基因,通过双酶切分析、PCR鉴定以及DNA序列分析确定SjCL2基因被克隆到巴氏毕赤酵母表达载体pPICZaB中。结论成功构建了含有SjCL2基因编码区序列的巴氏毕赤酵母表达载体pPICZaB-CL2质粒。

关键词: 日本血吸虫, 组织蛋白酶L2, 基因克隆 巴氏毕赤酵母表达载体

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2006年11月16日

【期刊论文】日本血吸虫组织蛋白酶L1基因的编码区全序列分析及克隆

詹希美, 雷智刚, 孟锦绣, 何蔼, 李卓雅, 易冰

中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2002,20(6):325-327,-0001,():

摘要

目的分析日本血吸虫组织蛋白酶LI(SjCL1)基因编码区的完整序列,并定向克隆到真核表达质粒pcD。NA3中。方法从日本血吸虫成虫提取总RNA,进行反向巢式RT-PCR,T载体克隆后测序。PCR扩增SjCL1基因的编码区序列,并将扩增产物克隆到pcDNA3质粒的BamHI和XhoI位点上。结果通过反向巢式RT-PCR扩增出332bpSjCL1基因5端序列,测序后与报道的SjCL1基因部分序列拼接,可得到一个编码317个氨基酸的完整编码区序列。PCR特异性扩增出SjCL1编码区基因序列,其大小约为1kb。经酶切、PCR鉴定和测序表明所构建的质粒pcDNh-SiCL1中含有所扩增的基因序列。结论构建了含SjCL1基因的编码区序列的真核表达质粒pcDNA。SjCL1。

关键词: RT-I, 日本血吸虫, 组织蛋白酶L, 基因克隆

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2006年11月16日

【期刊论文】日本血吸虫组织蛋白酶L2基因扩增及克隆*

詹希美, 雷智刚, 何蔼, 李卓雅, 孟锦绣, 易冰

中国人兽共患病杂志,2003,19(6):34-37,-0001,():

摘要

目的体外扩增日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L2(SjeL2)的编码区基因序列,将其克隆到真核表达质粒pcDNA3中,为进一步对其进行功能研究奠定基础。方法用TRIZOL分离日本血吸虫成虫RNA,RT-PCR扩增目的基因。将扩增产物定向克隆到真核表达载体pcDNA3中。结果RT-PCR特异性扩增出S)CL2编码区基因序列。其片段大小为lkb左右,经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pcDNA一CL2中含有所扩增的基因序列。结论RT-PCR扩增的SCL2编码区基因序列与预期长度相符合,成功构建了含CL2编码区基因的真核表达质粒pcDNA-SfCL2。

关键词: 日本血吸虫, 组织蛋白酶, RT-PCR, 基因克隆

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