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2006年11月01日

【期刊论文】华支睾吸虫表膜相关蛋白基因的扩增、序列分析和克隆*

余新炳, 黄艳, 徐劲, 吴德, 胡旭初, 王海, 吴忠道

中国人兽共患病杂志,2005,21(12):1064~1067,-0001,():

摘要

目的识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫表膜相关蛋白(tegumentalproteinofClonorchissinensis,CsTP)的cDNA序列克隆到原核载体中,为进一步的研究奠定基础。方法对华支睾cDNA质粒文库进行随机筛选并测序,用在线生物信息学工具进行序列分析,识别CsTP基因,并对其进行同源性、物理性质及结构分析。设计引物,从华支睾cD-NA质粒文库中扩增目的基因cDNA序列,并构建原核重组质粒,相同引物从华支睾吸虫基因组中扩增出CsTP的DNA序列。结果发现CsTP基因,其cDNA完整阅读框含555个碱基,编码184个氨基酸,理论分子量为20.7kDa;其DNA序列含1393个碱基,含有3个外显子、2个内含子。序列分析表明,CsTP蛋白与其它物种的表皮蛋白或膜相关蛋白有一定的同源性。所构建的重组原核表达质粒PGEX-4T-1-CsTP经PCR、双酶切及测序证实与目的基因相符。结论发现华支睾吸虫表膜相关蛋白基因,成功构建其重组原核表达质粒为进一步研究该基因的功能提供了条件。

关键词: 华支睾吸虫, 表膜相关蛋白基因, 序列分析, 克隆

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