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2011年04月29日

【期刊论文】苦瓜 MAP3D基因原核表达载体的构建和PCR快速检测重组子的研究

胡忠, 庄东红, 欧阳永长

遗传,2004,26(5):701~704,-0001,():

摘要

根据已报道的序列,把苦瓜(Momordica charantia)MAP30基因成功克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并对PCR快速检测阳性克隆进行了研究。结果表明,直接用菌落、菌液、酚氯仿处理过的菌液,以及提取的质粒进行PCR都可以成功地筛选阳性菌落。其中,酚氯仿处理过的菌液PCR与质粒PCR的结果最接近,而且比质粒PCR简单,因此可作为方便可靠的阳性克隆筛选的新方法。

关键词: MAP30, PCR, 克隆子筛选, 苦瓜

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2009年08月07日

【期刊论文】流感病毒RNA聚合酶亚基PA6片断的克隆及表达

曲章义, 赵宏宇, 赵育莹, 郑宏霞, 刘勇, 杨宝峰

国外医学免疫学分册,2004,27(6):362~364,-0001,():

摘要

目的 将流感病毒RNA聚合酶PA6亚基片段进行亚克隆、表达,获得重组的亚克隆多肽,为进一步研究PA6亚基功能奠定基础。方法 以PA亚基cDNA为模板,用PCR方法扩增出PA6片段,应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pQE32重组,阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定,IPTG诱导各亚克隆系高效表达,优化表达条件。结果 PCR法扩增出402bp的片段,酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒,在E。coliM15中表达得到相对分子量约为17KD的重组蛋白,获得重组多肽。结论 成功地亚克隆及表达了流感病毒RNA聚合酶PA6亚基。

关键词: 流感病毒, RNA 聚合酶, PA 亚基, 克隆 表达

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2009年08月07日

【期刊论文】流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基片段的克隆及表达

曲章义, 刘佳, 扬力明, 赵育莹, 郭彩玲, 杨宝峰

哈尔滨医科大学学报,2003,22(6):465~467,-0001,():

摘要

目的 将流感病毒RNA聚合酶PBI-I亚基进行亚克隆、表达,获得重组的亚克隆多肽,为进一步研究PB1亚基功能奠定基础。方法 以PB1亚基cDNA为模板,用PCR方法扩增出PB1-1片段,应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pQE30重组,阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定,1PTG导各亚克隆系高效表达:优化表达条件。结果 PCR法扩增出487hp的片段,酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒,在E-coliM15中表达得到相对分子量约为20KD的重组蛋白,获得重组多肽。结论 成功地亚克隆及表达了流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基。

关键词: 流感病毒, RNA聚合酶, PR1亚基, 克隆 表达

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2009年08月07日

【期刊论文】人腺病毒3型六邻体基因的克隆与鉴定

曲章义, 侯咏, 刘佳, 郭彩玲, 金玉霞

中国地方病学杂志,2003,22(3):465~467,-0001,():

摘要

目的 克隆人腺病毒3型(Ad3)六邻体-L1(Hexon-L1)、六邻体-L2(Hexon-L2)区基因,构建含有该基因的重组质粒,并进行测序鉴定,为进一步构建表达载体,制备基因工程疫苗打下基础。方法 从Ad3感染的HeLa细胞中提取Ad3DNA,用PCR方法扩增Hexon-L1、Hexon-L2基因,将得到的片段定向克隆到克隆载体pUC19质粒中,对克隆片段进行DNA测序鉴定。结果 构建了重组质粒pUC19Hexon,测序结果与Genebank中该序列进行同源性比较证明克隆的片段为Ad3六邻体序列。结论 成功克隆了Ad3的Hexon-L1、Hexon-L2区基因。

关键词: 3型腺病毒, 六邻体, 克隆 重组质粒

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2009年03月17日

【期刊论文】丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立

郑从义, 姚相杰①, 郭佳①, 郑从义①*, 方呈祥①, 屈三甫①, 陈震球②, 李中红②, 李信墙②*, 李卫云②

科学通报,2004,49(10):965~970,-0001,():

摘要

以含有丙肝病毒全基因组 cDNA的重组质粒(pHCV)为材料, 通过基因转染、重组痘病毒辅助使之在HeLa细胞中表达HCV病毒体,建立了一种新的HCV体外细胞培养系统。采用RT-PCR,荧光定量RT-PCR,链特异性RT-PCR,免疫印迹,免疫电子显微镜和电子显微镜负染技术跟踪检测HCV的增殖效率,结果显示,该培养体系中有HCV正链RNA的合成和HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达,并组装成直径约47nm的HCV病毒体,病毒体可被偶联有胶体金的抗HCV结构蛋白E2的单抗标记;该体系产生的HCV病毒体滴度达107基因拷贝/mL,远远高于病人血清中的HCV基因拷贝数,也高于迄今报道的任何一种HCV细胞培养体系的病毒滴度,检测结果证明,转染细胞裂解上清中的HCV病毒体可以感染肝癌细胞系Huh7,并在感染细胞中增殖和合成负链RNA中间体,病毒滴度达106基因拷贝/mL。

关键词: 丙型肝炎病毒(, HCV), 全基因组, 侵染性cDNA, 克隆 重组痘病毒, 细胞培养体系

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2009年03月17日

【期刊论文】构建猪瘟病毒致细胞病变的PK-15细胞模型

郑从义, 吴海祥, 张楚瑜*, 王家富, 潘兹书, 李蕾, 曹晟, 伊光辉

科学通报,2004,48(8):822~826,-0001,():

摘要

猪瘟病毒在离体细胞培养条件下不引起宿主细胞病变,病毒与宿主细胞之间相互作用的研究一直没有合适的模型以猪瘟病毒中国标准强毒石门株为材料,通过基因工程的手段,在构建全基因组感染性克隆的基础上,对全基因组进行部分缺失,获得了7.5kh的亚基因组.以携带野生型猪瘟病毒的PK-15细胞为宿主,用亚基因组进行转染,获得到了能够诱导PK-15细胞产生CPE的亚基因组病毒,检测显示产生CPE的细胞培养物中野生型基因组和亚基因组共同存在猪瘟病毒致细胞病变模型的构建,为进一步研究其致病的分子机制开辟了新的方向。

关键词: 猪瘟病毒, 基因组感染性克隆 亚基因组, 干扰缺损颗粒, 致细胞病变效应

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2009年02月20日

【期刊论文】沼泽红假单胞菌GroE基因高保守区DNA片段的克隆, 测序和特性分析

肖敏, 朱崇日, 钱新民, 郑平

山东大学学报(理学版),2002, 8(4):1~5,-0001,():

摘要

利用原核微生物GroE 基因特定区域高保守性设计了简并引物,以Rhodopseudomonas palustris Y6 的染色体为模板进行PCR 扩增,得到片段594bp 的产物. 将该DNA 片段连接到pUC-T 载体多克隆位点上,转化大肠杆菌DH5α菌株,得到阳性重组子。经Southern 杂交验证,已克隆的594bpDNA 片段来自Rhodopseudomonas palustris。 测序结果分析表明该片段是细菌groE 基因高保守区。

关键词: Rhodopseudomonas palustris, groE 基因高保守区, 克隆 序列分析

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2009年07月29日

【期刊论文】mMR-1基因的克隆和在毕赤酵母中分泌表达

夏焕章, 李天伯, 胡洋*, 王以光**

生物工程学报, 2005, 21(1): 26~29,-0001,():

摘要

hMR-1为本实验室首次克隆发现的一个人类新基因,是一种和三种肌肉收缩蛋白及多种细胞信号蛋白具有相互作用的膜蛋白。经与鼠基因组数据库进行同源分析后设计合成引物,利用RT-PCR技术从小鼠C57BIJ6J脾脏T淋巴细胞总RNA中反转录得到鼠源MR-I基因(mMR-1),提交GenBank,收录号(AY299972)。序列分析证明其与人源MR-1基因(hMR-1)同源性为90.1%。构建表达载体pPIC9-mMR-1电转化Pichia pastoris GS115,筛选得到整合分泌表达mMR-1蛋白的重组酵母菌株。表达目的蛋白分子量25kD,诱导5d时产量达到50mg/L,通过Westem blot验证了表达产物的正确性。本研究为进一步研究新基因MR-1的生物学功能奠定了基础。

关键词: MR-1, 克隆与表达, 毕赤酵母

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2007年05月08日

【期刊论文】逆代谢工程—基于有用表型的定向遗传工程策略

陈宁, 谭青乔

生物技术通讯/LETTERS IN BIOTECHNOLOGY Vol. 13, No. 1, Jan., 2002,-0001,():

摘要

代谢工程分为推理性代谢工程和逆代谢工程,逆代谢工程是避开对代谢网络充分认识的一种全新的遗传工程。本文简要介绍了逆代谢工程的策略,并以实例详细分析了逆代谢工程的具体应用.最后,分析了逆代谢工程的问题和发展前景。

关键词: 逆代谢工程, 基因克隆 基因型, 基因组计划

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2005年11月10日

【期刊论文】稻瘟病菌单克隆抗体的研制及其对稻瘟病菌附着胞形成的影响*

林福呈, Wu Jianxiang, Liu Fucheng, Li Debao, Chen Zhengxian, Lou Yichun

,-0001,():

摘要

Selecting by indirect ELISA eleven hybridoma cell lines, secreting monoclonal antibodies (McAbs) against Magnaporthe grisea were produced by fusing mouse myeloma cells (SP2/0) with spleen cells from BALB/c mice immunized with the mixture of conidia、germ tubes and appressoria of M. grisea using 50% PEG. The result of IFTC test showed that four McAbs, named as 2B4、4A1、1D1、and 2H4 specificlly bound to the cell wall surface of the fungus; Western blotting revealed that 2B4、4A1、1D1 were recognized different protein antigens from the surface of conidia and germ tubes; These four McAbs could effectively interfere with the appressorium formation both on cellophane membrance and the surface of onion epidermis and inhibit the disease leaf lesions development in vitro test.

关键词: 稻瘟病菌附着胞,, 克隆抗体,, 间接免疫荧光试验

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2004年12月28日

【期刊论文】深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及序列分析*

邢来君, 李明春, 刘莉, 张丽, 胡国武

菌物系统,2001,20(1):44~50,-0001,():

摘要

γ-亚麻酸(GLA,C18:3△6,9,12)是由A6-脂肪酸脱氢酶以亚油酸(LA,C18:2△9,12)为底物,在C6位脱氢形成的。由于在人体中,γ-亚麻酸是花生四烯酸、前列腺素类和白三烯类等生理活性物质的前体物,而深黄被孢霉是目前用于微生物发酵生产γ-亚麻酸的主要菌株。本文根据脂肪酸脱氢酶的保守区设计引物,利用反转录聚合酶链式反应从丝状真菌深黄被孢霉中克隆了编码△6-脂肪酸脱氢酶的cDNA,全长为1374个核苷酸,编码457个氨基酸,但与其他位点的脂肪酸脱氢酶不同的是,A6-脂肪酸脱氢酶在其序列的N端特有细胞色素b5(Cytb5)区。这是国际上对深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的首次报道。

关键词: 深黄被孢霉,, △6-脂肪酸脱氢酶基因,, 克隆

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