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2009年05月08日

【期刊论文】自身免疫性肾炎模型中自身反应性T细胞的克隆诱导及免疫学行为分析

姜傥, 刘云启, 谭敏, 关伟明, 周建中, 董秀清

中华肾病杂志,2003,19(2):99~104,-0001,():

摘要

目的 了解自身反应性T淋巴细胞(ART)在自身免疫性肾小球肾炎中的可能致病作用, 探讨肾脏自身免疫性损伤与致肾炎性ART存在的相关性。方法 建立Brown-orway(BN)大鼠氯化汞(HgCI)自身免疫性肾炎模型。在此基础上,对该模型体内的致肾炎性ART进行克隆诱导以及分离、活化、增殖等处理,并采用动物转输试验、噻唑蓝(MTF)法、流式细胞术及ELISA法对所获ART的致病性、抗原性以及免疫学行为进行详细分析。结果 (1)成功建立了BN大鼠自身免疫性肾炎模型;(2)在BN大鼠自身免疫性肾炎模型中诱导、分离、获得了自身反应性T细胞克隆;(3)发现所获ART克隆对大鼠自身基底膜抗原成分层粘蛋白(1aminin)有明显的增殖活性;(4)将所获ART细胞克隆转输至同种正常BN大鼠后,后者出现与原模型鼠相类似的临床、病理改变;(5)细胞表型分析发现所获ART细胞克隆多具有CD3/CIM的免疫学特征;(6)与对照组相比,所获ART细胞克隆的培养上清中,主要含有细胞因子IL-4[(455.0±85.1)ng/L比(139.0±46.7)ng/L,P<0.01)]。IFN.的分泌量与对照组细胞无明显差异[(124.0±34.6)ng/L比(147±50.3)ng/L,P>0.05。结论 在氯化汞致自身免疫性肾小球肾炎模型中。经定向诱导、分离所获的ART细胞克隆,可呈现明显的抗原特异性及转输致病性。细胞免疫分析显示这些ART克隆的免疫表型主要为CD3/CIM,其在体外可分泌大量的Th2型细胞因子IL-4。因此,自身免疫性肾小球肾炎的发病可能与自身反应性T细胞的存在及参与有关。

关键词: 肾小球肾炎., 自身免疫性, 克隆 自身反应性T细胞

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2009年05月08日

【期刊论文】狼疮性肾炎患者T淋巴细胞受体Vβ的表达及克隆聚集性

姜傥, 刘云启, 谭敏, 周建中, 关伟明, 孔庆瑜

中华检验医学杂志,2002,25(3):159~161,-0001,():

摘要

目的 检测活动性狼疮性肾炎(LN)患者外周血和肾组织内浸润T淋巴细胞受体(TCR)基因亚家族的限制性取用,以探讨体内自身反应性T细胞克隆存在的证据。方法 用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分析18例活动性LN患者和12名正常对照者的T细胞受体Vβ亚家族的部分基因表达。结果 活动性LN患者外周血T淋巴细胞受体Vβ8基因表达明显高于正常对照组(0.67±0.11vs0.36±0.03,P<0.001),肾活检组织中浸润淋巴细胞Vβ8基因的表达也明显高于TCRVβ1、TCRVβ11、TCRVβ20这些TCRVβ家族的其他成员(P<0.001),并呈现出以TCRVβ8为优势克隆的T细胞的大量增殖和聚集。结论 在LN的自身免疫性损伤中,存在具同一特征(TCRVβ8)自身反应性T细胞的克隆聚集、增殖,这一发现提示其在LN中可能具有致病作用。

关键词: 基因, T细胞受体; 狼疮肾炎; 克隆 分子

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2006年01月10日

【期刊论文】抗人胰腺癌单克隆抗体介导LAK细胞体外体内抗胰腺癌作用的研究

陈其奎, Chen Qi-kui, Yuan Shi-zhen

中华肿瘤杂志,1994,16(5):3543-355,-0001,():

摘要

体外4小时51Cr释放试验表明,抗人胰腺癌单克隆抗体 (YPC3 McAb)能增强LAK细胞对Capan-2人胰腺癌细胞的杀伤作用,这种LAK细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC),随YPC3 McAb的浓度增加而加强,50μg/ml的YPC3,McAb增加LAK细胞的杀伤率约60%。而对照抗体无此作用。裸鼠体内实验表明,YPC3 McAb和LAK细胞同时使用,能完全阻止Capan-2细胞的生长,优于LAK细胞、脾细胞和YPC3 McAb的分别作用。结果提示,YPC3 McAb和LAK细胞的联合应用,对胰腺癌治疗有一定价值。

关键词: 胰腺肿瘤/, 治疗, 抗体,, 克隆 LAK细胞, 细胞毒性,, 免疫

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2006年01月10日

【期刊论文】单克隆抗体对活化腹腔巨噬细胞抗胰腺癌作用的影响①

陈其奎, Chen Qikui, Yuan Shizhen

中山医科大学学报,1997,18:73~75,-0001,():

摘要

观察重组人白细胞介素2(γ-IL2)体外诱导的腹腔巨噬细胞,在YPC3抗人胰腺癌单克隆抗体(YPC3mAb)介导下,通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)机制对胰腺癌细胞的杀伤作用。4h51Cr释放实验表明,在YPC3mAb作用下,活化腹腔巨噬细胞对Capan-2人胰腺癌细胞的杀伤活力明显增强,比单用巨噬细胞杀伤活力约提高70.0%,而对照1-F/7抗登革热病毒单抗无明显影响。γ-IL2作用的腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞具有类似的ADCC杀伤效应。结果提示,γ-IL2和YPC3mAb联合腹腔注射,可能为胰腺癌的局部治疗提供一个新方法。

关键词: 胰腺肿瘤/, 治疗, 抗体,, 克隆/, 治疗应用, 巨噬细胞,, 淋巴因子活化, 细胞毒性,, 免疫

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2005年05月10日

【期刊论文】CD25单克隆抗体治疗皮质激素耐药的重度移植物抗宿主病

黄晓军, 路瑾, 许兰平, 陈欢, 张耀臣, 任汉云, 郭乃榄, 陆道培

Natl Med J China, February 10, 2003, Vol 83, No.3,-0001,():

摘要

目的 观察白细胞介素(IL)22受体α链(CD25)单克隆抗体治疗激素耐药重度移植物抗宿主病(GVHD)的疗效方法 对异基因造血干细胞移植后诊断皮质激素耐药重度GVHD体17例患者(18例次),在诊断确立后第1、4(3)、8、15、22天将CD25人源化单克隆抗体(赛尼派)50mg溶于100ml生理盐水中静脉点滴治疗观察治疗后GVHD缓解情况,副作用以及合并感染情况结果(1)18例次中11例GVHD完全缓解,5例GVHD部分缓解,2例无效(2)7例出现感染(3)完全缓解11例患者中GVHD复发4例(4)无输注相关毒副作用。结论IL22受体α链(CD25)单克隆抗体治疗重度皮质激素耐药GVHD疗效显著。

关键词: 抗体, 克隆 移植物抗宿主病, 受体, 白细胞介素2

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2005年04月25日

【期刊论文】血管紧张素Ⅱ上调人肾小球系膜细胞硬化相关基因的克隆

张宏, 周安宇, 梁秀彬, 侯平, 王海燕

中华肾脏病杂志,2002,18(2):140~145,-0001,():

摘要

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞(Mscj在血管紧张素Ⅱ(Angiotcnsin 1I,AngⅡ)作用下,产生以纤连蛋白(Fibronectin.FN)为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找AngII致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨AngU在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础。方法人MsC经Angn(10柚mol/L)刺激24h后,采用抑制性消减杂交(suppressfonsubtractive hybrJdiznlion,SSH)获得Angll描关的差异表达的eDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经厦向Nortbern筛选上调表达的基因eDNA片段,并肚orthern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较。采用5。一和3'-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长eDNA。结果在120个随机选择的克胯中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调。挑选其中2十克隆进甜DNA序列测定,结果品示18个为独立的基必片段序列(有两个序列为双拷贝),其中15个为已知基冈,包括细胞外基质成分:如IIItd~板反应素I、I型胶原2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白d、钙凋蛋白I、1一胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1.1、arnesyl pyrophosphate synthetase等;噩白分解相关蛋白:如组织蛋白酶、泛索蛋白连接酶等。3个克隆(克隆104、52、46)与已知序列没有明品同源性,提示为新基因。3个新基因分别命名为AngRem(AngiolensinⅡrelated gencinmesaagial cells)104、AngRcm52、1gRein46,GenBank登录号分别为Ab367870、AY040225、AY040224。结论对已知基冈的分析表明,AngII对细胞外基质具有双重作用,即:既刺激培养的人Msc细胞外慕质成分表达上凋。也通过刺激PAl-I等分子的表达而抑制细胞外基质成分的降解。此外,我们还发现了目前尚未报告的与Angll对MaC的生物学效应一细胞外基质堆积和增生等作用辛H关的基四(包括3个新基因)。为揭示AngII介导的MsC在肾小球硬化进展过程的可能分子机制提供了新的线索。

关键词: 血管紧张素11, 细胞外基质, 基因克隆 系膜细胞, Ang Rcm

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2005年03月04日

【期刊论文】中国人4型登革病毒E基因部分片段的cDNA克隆与序列分析

李刚, 姚集鲁, 彭文伟, 王飞

Chinese J Exp Clin Virol, March 1997, Vol. 11, No.1,-0001,():

摘要

1993年10月广东省发生登革热的流行,我们从其中一个病人血清中扩增到4 型登革病毒(DV4)包膜蛋白基因(E)的部分cDNA片段,对其进行了分子克隆及序列测定。DV RNA经随机引物逆转录后用DV4特异的引物扩增,获得421bp的产物,补齐和提纯后插入pUC18和pUC19质粒载体,采用双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列,与同型DV代表株比较,同源性达到93172%,与不同型DV的同源性介乎61126%~64140%,而与同属的乙型脑炎病毒比较,同源性只有40131%。比较推导的氨基酸序列后发现一个含有12个氨基酸的保守区,可能是黄病毒属中具有重要生物学功能的部位。

关键词: 登革热病毒, 克隆,, 分子, 碱基序列

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2005年03月04日

【期刊论文】丙型肝炎病毒(HCV)广东株包膜蛋白区cDNA的序列测定*

李刚, 姚集鲁, 彭文伟

病毒学报,1997,13(1):24~32,-0001,():

摘要

采用微粒吸附法从广东省一慢性丙型肝炎病人血清中提取丙型肝炎病毒(HCV)RNA,经随机引物逆转录为cDNA,再经聚合酶链反应(PCR),获得包膜蛋白区(E1,E2/NS1)两个部分重叠的产物片段,分别为489bp和806bp。其中,489bp片段主要位于E1区,小部分位于C区;806bp片段位于E2/ NS1区。将489bp片段插入pUC19载体,再亚克隆进pUC18质粒载体。806bp片段则插入到pBV220质粒及M13mp18、M13mp19噬菌体。将所测定的序列(共为1246bp)与多个已知分离株相应序列比较后发现,核苷酸同源性介乎61.00%-89.41%,与Ⅱ(1b)型同源性最大,超过86%;推导的氨基酸同源性为60.24%-87.23%。与其它株比较,HCV广东株(HCV-GD)较大变异区包括251-258、383-406、434-446及475-480位氨基酸。其中两个与公认的高变异区(383-408、475-480)相对应。

关键词: 丙型肝炎病毒(, HCV), ,, 分子克隆,, 核苷酸序列

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