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2010年12月16日

【期刊论文】重组B因子小干扰RNA对激光诱导大鼠脉络膜新生血管的抑制作用

马景学, 全欢, 尚庆丽, 高建, 郑海洲, 魏素琴, 杨爱琴

,-0001,():

摘要

目的 探讨重组B因子(CFB)小干扰RNA(SIRNA)抑制激光诱导的大鼠脉络膜新生血管(CNV)的效果。方法 采用基因重组的方法获得重组CF&siRNA,取棕色挪威(BN)大鼠42只84只眼,用激光光凝方式建立CNV模型,随机分为尾静脉注射组、玻璃体腔注射组.视网膜下腔注射组、对照组。3种不同的注射方式组分别设有相应的空质粒注射组。除对照组外,其余各组于激光光凝后第1、3、5夭分别进行注射CFBsiRNA,尾静脉、玻璃体腔、视网膜下腔注射组的注射剂量分别为50、20、10 pg;对照组激光光凝后不给于任何干预。激光光凝前和光凝后14d分别行荧光素眼底血管造影(FFA)。根据荧光渗漏程度对各激光光斑评分来检测CNV的牛成情况;免疫组织化学法检测各组大鼠脉络膜内血管内皮生长因子(VEGF)、第Ⅷ因子的表达情况。结果 各组激光光斑荧光渗漏程度评分结果显示,CF隆siRNA尾静脉注射组与对照组相比荧光渗漏程度明显减轻(F-15.1620,P<0.05)。免疫组织化学结果显示,cF&siRNA尾静脉注射组VEGF、第Ⅷ因子的阳性表达强度在激光光凝后不同时间点之间差异无统计学意义(F-20.35,18.33;P>0.05),而与同时间点其他各组相比,明显降低(F-77.96,55.68;P<0.05)。其他各组VEGF、第Ⅷ因子的阳性表达强度在激光光凝后14 d均显著强于激光光凝后7 d(F=60.89, 61.12;P<0.05)。结论 通过下调VEGF及第Ⅷ凶子的表达水平,重组CF&siRNA能有效的抑制CNV的生成。

关键词: 脉络膜新生血管化/治疗; 基因疗法; RNA, 小分子干扰; 疾病模型, 动物

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2010年12月16日

【期刊论文】羊膜匀浆治疗实验性孑L源性视网膜脱离

马景学, 郝玉华, 修贺明

中华眼底病杂志,2009,25(1):47~50,-0001,():

摘要

目的 观察和探讨羊膜匀浆在封闭视网膜裂孔中的作用及其机制。方法 40只新西兰白兔随机分为A、B、C、D 4组,其中A、C为治疗组,B、D为对照组,每组各10只兔。每只兔随机取1只眼进行实验。经扁平部玻璃体切割,视网膜造孔,人为造成视网膜脱离,气液交换。治疗组裂孔表面滴加0.1ml羊膜匀浆,而对照组滴加0.1 ml磷酸盐缓冲液(PBS);术毕视网膜复位,20%SFs眼内填充。A、B组于手术后14 d处死动物,C、D组于手术后28 d处死动物,进行光学显微镜、电子显微镜和免疫组织化学染色检查。结果 手术后14 d,A组视网膜复位6只眼,占60%,B组视网膜复位2只眼,占20%(P=0.021)。手术后28 d,C组视网膜复位8只眼,占80%,D组视网膜复位3只眼,占30%(P=0.046)。各组之间视网膜复位的比例比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组手术后出现轻度前节炎症反应,经局部应用糖皮质激素后炎症于3~5 d消退。光学显微镜检查结果显示,治疗组应用羊膜后在视网膜裂孔边缘有多层成纤维细胞样细胞增牛,与其下脉络膜和视网膜色素上皮细胞发生粘连。对照组视网膜裂孔边缘细胞增生明显减少,视网膜不能和脉络膜形成粘连。电子显微镜检查与光学显微镜检查结果一致。成纤维细胞样细胞免疫组织化学染色显示胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性,提示裂孑L边缘增生细胞主要是视网膜胶质细胞。 结论 羊膜匀浆有助于封闭视网膜裂孔,通过刺激裂孔边缘视网膜胶质细胞增生,促进视网膜脱离复位。

关键词: 视网膜脱离/, 治疗, 视网膜脱离/, 外科学, 羊膜, 动物实验

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2010年12月16日

【期刊论文】姜黄素对兔视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

马景学, 安建斌, 高彦军, 刘丹岩, 盛梦怡, 王红霞, 刘丽娅

,-0001,():

摘要

目的 探讨姜黄素对兔视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的抑制作用及其作用机制。 方法 选取第4代RPE细胞进行实验,分为姜黄素组和空白对照组,姜黄素组设l0、15、20μg/ml3个质量浓度。噻唑蓝比色(MTT)法检测姜黄素10、15、20μg/m1分别在24、48、72、96 h对体外培养的RPE细胞增生的抑制率。线性回归分析计算各时间段的半数抑制率(ICS)剂量。流式细胞仪(FMC)检测姜黄素15μg/ml作用72 h后对RPE细胞周期的影响,并且检测姜黄素15/2μg/ml作用24、48,72h后RPE细胞增生细胞核抗原(PCNA)的表达量和凋亡率。透射电子显微镜进行RPE细胞形态学检测。 结果 姜黄素24、48、72、96 h的IC50分别是29.31、17.50、13.24、10.99μg/ml。姜黄素使RPE细胞阻滞在G0/G1期。姜黄素15μg/ml作用24、48、72h后,RPE细胞的PCN人表达量分别为(565.04±23.60),(473.61±36.88),(396.15±32.45),凋亡率分别为(12.83±0.13)%,(32.27±4.51)%,(56.81±8.67)%,各浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。透射电子显微镜显示RPE细胞出现凋亡特征。 结论 姜黄素可以影响RPE细胞的PCNA合成,诱导其凋亡,从而有效抑制RPE细胞增生。姜黄索有望成为一种有效的防治PVR的天然药物。

关键词: 姜黄素/投药和剂量; 色素上皮, 眼; 细胞增殖/药物作用; 玻璃体视网膜病, 增生性/药物疗法; 动物实验

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2006年11月02日

【期刊论文】SD 大鼠视网膜神经细胞培养上清液对胚胎干细胞体外分化的诱导作用

葛坚, 杨智宽, 郭彦, 王智崇, 刘海泉

中华眼底病杂志,2002,18(2):134~136,-0001,():

摘要

目的探讨视网膜神经细胞培养的上清液对胚胎干细胞(embryonicstemcells,ES)体外分化的诱导作用。方法收集SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液,抽滤后按2:3比例与DMEM培养液混合,用该混合液进行ES细胞的诱导分化,每天倒置相差显微镜观察ES细胞的生长及分化情况,对诱导分化后的细胞进行神经丝蛋白(nellcofilamentprotein,NFP)免疫组织化学检查。结果加入了视网膜神经细胞培养上清液的ES细胞生长出类似神经细胞突起样结构,NFP免疫组织化学染色阳性。结论SD大鼠视网膜神经细胞培养的上清液具有诱导ES细胞向神经细胞分化的作用。

关键词: 胚胎诱导,  细胞分化,  神经元,  干细胞,  动物实验替代试验

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2005年07月19日

【期刊论文】视黄酸对视网膜感光细胞增生作用的实验研究

唐仕波, 邱观婷, 刘志雄, 李加青, 林少芬

中华眼科杂志2002,2(38):112~115,-0001,():

摘要

目的探讨外源性视黄酸是否能诱导成年大鼠视网膜感光细胞增生。方法将32只成年健康Sprague2Dawley(SD)大鼠,每只体重约200~250g,随机平均分成4组。第1、2组:视网膜下腔注射视黄酸(retinoic acid,RA)5μl(01001mol/L),第3、4组玻璃体腔注射RA10μl(01001mol/L)。其中第1、3组在注射RA前,通过结扎眼动脉,造成眼部缺血再灌注损伤的实验模型。对照组为5只健康SD大鼠,在不注射RA的条件下,制做短暂缺血再灌注损伤模型。实验眼于注射RA后2~4周取出眼球,进行HE和免疫组化染色,于光镜下检测分析。结果第1组,于注射RA后第16天,视网膜下腔表达视杆细胞特异性标记抗体的视网膜感光细胞数量增多及内核层增厚;而第2组未发现任何细胞增生;第3、4组,玻璃体腔内注射RA后,无论在有无缺血再灌注损伤的条件下,均未见视网膜神经细胞数量增多。对照组在未注射RA的条件下,将组织学切片置光镜下观察,未见视网膜神经上皮层的形态学改变,也无感光细胞增生。结论在缺血再灌注损伤的条件下,成年大鼠视网膜下腔注射外源性RA能够诱导视网膜感光细胞增生,这将为研究哺乳动物视网膜神经细胞再生提供新的思路。

关键词: 视黄酸, 视网膜感光细胞, 神经再生, 动物,, 实验

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2005年07月19日

【期刊论文】白细胞对早期糖尿病视网膜病变作用的研究

唐仕波, 白宁艳, 马静, 罗燕, 李双农, 林少芬

中华眼科底病杂志2003,6(19):344~347,-0001,():

摘要

目的探讨白细胞在早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管中粘附、堆积及其与视网膜微血管形态学变化的关系。方法健康成年雄性Wistar大鼠90只,随机分成正常对照组和链脲佐菌素(strep to2zotocin,STZ)诱导的糖尿病组各45只(3、7、14d组各5只,30、90、180d组各10只)。取大鼠右眼制备视网膜消化铺片,进行形态学观察及白细胞共有抗原(leukocyte common ant igen,CD45)单克隆抗体免疫组织化学研究。结果正常对照组视网膜毛细血管中有少许CD45阳性细胞;糖尿病发生3d后,CD45的表达明显增加,病程第14d达高峰,以后基本稳定。病程90d时,视网膜毛细血管已出现节段性膨大、囊样扩张及闭锁等形态学改变;病程180d时,上述病变进一步加重。结论白细胞粘附发生在糖尿病视网膜病变(diabet ic ret inopathy,DR)的早期阶段,是DR在微血管水平病理变化的开端。白细胞粘附可能作为视网膜微血管形态学改变的基础,在DR的发生发展中起着重要作用。

关键词: 糖尿病视网膜病, 白细胞, 链脲佐菌素, 疾病模型,, 动物

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2005年07月19日

【期刊论文】经巩膜外路至视网膜下腔移植视网膜细胞的实验研究

唐仕波, 罗燕, 李加青, 白宁艳, 杨斌, 王铮, 郑湖玲

中华眼科杂志2003,10(39):610~615,-0001,():

摘要

目的探讨视网膜光感受器细胞的移植方法及临床意义。方法将16只昆明鼠随机分为A组和B组,每组均8只鼠。于手术显微镜下,用特殊显微注射器穿过巩膜、脉络膜,在A组昆明鼠的视网膜下腔注入视网膜混合细胞,在B组昆明鼠的视网膜下腔注入纯光感受器细胞。于移植术后30、90及180d摘除实验眼,于光镜下观察移植细胞在视网膜下腔生长的情况。结果大多数标本(13P15)HE染色显示视网膜细胞准确移植在受体眼的视网膜下腔,未见炎性细胞浸润和受体视网膜破坏;且移植到受体视网膜下腔的细胞在术后180d仍存活。仅少数(2P15)标本可见受体视网膜结构破坏。移植的视网膜混合细胞均形成“玫瑰花”样结构,而移植的纯视网膜光感受器细胞则在视网膜下腔形成整齐的细胞层。结论经巩膜外路至视网膜下腔的显微注射法是较为理想的视网膜下腔注射给药和视网膜细胞移植方式。纯视网膜光感受器细胞移植后的生长状况和功能接近正常生理状态的视网膜组织结构,为临床治疗视网膜变性疾病提供了新途径。

关键词: 光感受器, 细胞移植, 视网膜疾病, 模型,, 动物

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