构建携带VEGF121cDNA重组复制缺陷型腺病毒表达载体，制备重组腺病毒，该腺病毒能介导vEGF121cDNA基因促进人脐静脉血管内皮细胞增殖，促进毛细血管管腔样结构形成ELIsA检测表明vEGF121cDNA基因表达产物分泌至培液上清，并显示强烈血管通透作用为进一步利用重组腺病毒介导vEGF121cDNA进行缺血性疾病的基因治疗奠定良好的基础。

化学合成人纤溶蛋白酶原K5（pK5）的编码基因并克隆到毕赤氏酵母表达系统的分泌型载体pPIC9K上，将重组质粒经BglⅡ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株，筛选出对G418有高抗性和在MM培养基上生长缓慢的转化子。经摇瓶发酵和甲醇诱导后，用15%SDS-PAGE检测发酵上清液，表明有重组蛋白pK5的高表达。经CM.Sepherose离子交换柱和Superdex 75分子筛层析两步分离纯化，获得了纯度达到98%的rpK5。用MTT方法检测的结果表明，纯化的rpK5可显著地抑制人血管内皮细胞的生长。

将编码人的血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）的cDNA克隆至分泌表达载体pPIC9k上，在Pichia Pas-toris酵母宿主菌SMD1168中获得分泌表达；用MTT方法检测的细胞生长抑制实验结果表明，发酵液中分泌表达的重组蛋白ANGPTL4对人脐静脉内皮细胞的生长具有一定的抑制作用。

目的:探讨补肾宁心方药物血清对成骨细胞(osteoblast，OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法：颅骨酶解法培养OB，体外模拟雌激素撤退现象，分别予以5%～30%系列浓度的对照鼠血清或中药血清培养，流式细胞仪分析DNA含量，Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡，透射电镜观察OB超微结构。结果：DNA含量分析显示与相应对照组相比，10%～20%药物血清组的S期和G2/M期细胞百分比明显增加，G0/G1期细胞百分比明显下降，细胞增殖指数(PI)显著增加(分别为P<0.05和P<0.01)；10%～20%的药物血清还具有显著的抗凋亡作用(分别为P<0.05和P<0.01)；透射电镜可见经20%药物血清诱导后的OB细胞出现典型的细胞器明显增多，内质网扩张，线粒体丰富等形态学改变。结论：补肾宁心方药物血清在体外可有效地促进鼠OB的增殖周期，从而促进OB增殖并抑制其凋亡。

目的：探讨脱氢表雄酮(DHEA)对去势鼠CD4+T细胞Th1/Th2型细胞因子表达和成骨细胞(OB)增殖的影响。方法：建立小鼠绝经后骨质疏松(PMO)模型，分为OVX组、OVX+DHEA组、OVX+E2组。另设Sham组为假手术对照。取腰椎和股骨行骨组织形态计量分析；流式细胞术(FCM)检测各组鼠脾脏CD4+T细胞内IL-2、IFN-γ(Th1型)和IL-4、IL-10(Th2型)的表达；并取椎骨植块法培养OB，FCM分析增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果：OVX组与Sham组相比，椎骨和股骨骨小梁面积显著下降(P<0.01)，说明PMO模型成功建立；与OVX组相比，OVX+DHEA组腰椎、股骨及OVX+E2组腰椎、股骨骨小梁面积都明显增加(P<0.01)。OVX组IL-2及IFN-γ表达显著低于Sham组(P<0.05)；而OVX+DHEA组和OVX+E2组显著高于OVX组(分别为P<0.01和P<0.05)。OVX+DHEA组IL-4及IL-10表达显著低于OVX组(P<0.01)。OVX组IFN-γ/IL-4比值明显低于Sham组(P<0.05)；OVX+DHEA组和OVX+E2组IFN-γ/IL-4比值均显著高于OVX组(P<0.01)。OVX组OB的PCNA表达与Sham组相比显著增高(P<0.05)；与OVX组相比，OVX+DHEA组OB核内PCNA的平均表达强度和阳性细胞百分率皆显著增高(分别为P<0.05和P<0.01)。OVX+DHEA组OBPCNA表达与CD4+T细胞IFN-γ水平呈明显正相关(r=0.931，P<0.05)；与IL-4水平呈负相关(r=-0.815，P<0.05)。结论：DHEA可通过细胞免疫调节作用形成Th1型免疫偏移，从而显著改善PMO的免疫状态；并有效促进OB增殖，显著改善骨形态。

目的：探讨脱氢表雄酮(DHEA)对小鼠成骨细胞(OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法：颅骨酶解法分离OB和体外培养OB，体外模拟雌激素撤退现象，分为对照组、10-10mol/L E2组、10-7mol/LDHEA组共3组，流式细胞仪分析DNA含量，Annexin V-FITC／PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡，透射电镜观察OB超微结构。结果：DNA含量分析显示，DHEA组的S期和G2/M期细胞百分率比对照组明显增加，细胞增殖指数显著增加(P<0.01)；DHEA和E2对OB还具有显著的抗凋亡作用(P<0.01或P<0.05)；透射电镜可见经10-7 mol/L DHEA诱导后的OB细胞器明显增多，内质网扩张，线粒体丰富等形态学改变。结论：DHEA在体外可直接促进小鼠OB的增殖并抑制其凋亡。