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2009年03月30日

【期刊论文】重组腺病毒介导VEGF121cDNA体外转移与表达

宋后燕, 王跃祥, 杨健, 马春姑, 杨新英, 宋后燕*

生物化学与生物物理进展,2003(4):612-616,-0001,():

摘要

构建携带VEGF121cDNA重组复制缺陷型腺病毒表达载体,制备重组腺病毒,该腺病毒能介导vEGF121cDNA基因促进人脐静脉血管内皮细胞增殖,促进毛细血管管腔样结构形成ELIsA检测表明vEGF121cDNA基因表达产物分泌至培液上清,并显示强烈血管通透作用为进一步利用重组腺病毒介导vEGF121cDNA进行缺血性疾病的基因治疗奠定良好的基础。

关键词: vEGF121cDNA, 重组腺病毒, 基因转移, 表达, 增殖 血管通透

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2006年06月01日

【期刊论文】人纤溶蛋白酶原K5在毕赤酵母中的表达及其生物活性鉴定

吕红, SHEN Li, SONG Da-Xin, GAO Bo-Yu, L

生物工程学报,2004,20(6):879~883,-0001,():

摘要

化学合成人纤溶蛋白酶原K5(pK5)的编码基因并克隆到毕赤氏酵母表达系统的分泌型载体pPIC9K上,将重组质粒经BglⅡ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选出对G418有高抗性和在MM培养基上生长缓慢的转化子。经摇瓶发酵和甲醇诱导后,用15%SDS-PAGE检测发酵上清液,表明有重组蛋白pK5的高表达。经CM.Sepherose离子交换柱和Superdex 75分子筛层析两步分离纯化,获得了纯度达到98%的rpK5。用MTT方法检测的结果表明,纯化的rpK5可显著地抑制人血管内皮细胞的生长。

关键词: 人纤溶蛋白酶原K5,, 酵母,, 分泌表达,, 内皮细胞增殖分析

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2006年06月01日

【期刊论文】人血管生成素样蛋白4在毕赤氏酵母中的表达及其生物活性的初步研究

吕红, L

复旦学报(自然科学版),2004,43(2):147~151,-0001,():

摘要

将编码人的血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)的cDNA克隆至分泌表达载体pPIC9k上,在Pichia Pas-toris酵母宿主菌SMD1168中获得分泌表达;用MTT方法检测的细胞生长抑制实验结果表明,发酵液中分泌表达的重组蛋白ANGPTL4对人脐静脉内皮细胞的生长具有一定的抑制作用。

关键词: 血管生成素样蛋白4, 酵母分泌表达, 内皮细胞增殖分析

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2008年04月24日

【期刊论文】补肾宁心方药物血清对鼠成骨细胞的增殖周期与凋亡的影响

王凌, 王玉东, 李大金, 王文君, 朱影

中华中医药杂志(原中国医药学报)2006年第21卷第1期,-0001,():

摘要

目的:探讨补肾宁心方药物血清对成骨细胞(osteoblast,OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法:颅骨酶解法培养OB,体外模拟雌激素撤退现象,分别予以5%~30%系列浓度的对照鼠血清或中药血清培养,流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡,透射电镜观察OB超微结构。结果:DNA含量分析显示与相应对照组相比,10%~20%药物血清组的S期和G2/M期细胞百分比明显增加,G0/G1期细胞百分比明显下降,细胞增殖指数(PI)显著增加(分别为P<0.05和P<0.01);10%~20%的药物血清还具有显著的抗凋亡作用(分别为P<0.05和P<0.01);透射电镜可见经20%药物血清诱导后的OB细胞出现典型的细胞器明显增多,内质网扩张,线粒体丰富等形态学改变。结论:补肾宁心方药物血清在体外可有效地促进鼠OB的增殖周期,从而促进OB增殖并抑制其凋亡。

关键词: 细胞周期, 增殖 凋亡, 补肾宁心方, 成骨细胞

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2008年04月24日

【期刊论文】脱氢表雄酮增强去势鼠Th1型偏移及成骨细胞增殖能力

王凌, 王玉东, 李大金, 王文君, 朱影

中国免疫学杂志2007年第23卷第6期,-0001,():

摘要

目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对去势鼠CD4+T细胞Th1/Th2型细胞因子表达和成骨细胞(OB)增殖的影响。方法:建立小鼠绝经后骨质疏松(PMO)模型,分为OVX组、OVX+DHEA组、OVX+E2组。另设Sham组为假手术对照。取腰椎和股骨行骨组织形态计量分析;流式细胞术(FCM)检测各组鼠脾脏CD4+T细胞内IL-2、IFN-γ(Th1型)和IL-4、IL-10(Th2型)的表达;并取椎骨植块法培养OB,FCM分析增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果:OVX组与Sham组相比,椎骨和股骨骨小梁面积显著下降(P<0.01),说明PMO模型成功建立;与OVX组相比,OVX+DHEA组腰椎、股骨及OVX+E2组腰椎、股骨骨小梁面积都明显增加(P<0.01)。OVX组IL-2及IFN-γ表达显著低于Sham组(P<0.05);而OVX+DHEA组和OVX+E2组显著高于OVX组(分别为P<0.01和P<0.05)。OVX+DHEA组IL-4及IL-10表达显著低于OVX组(P<0.01)。OVX组IFN-γ/IL-4比值明显低于Sham组(P<0.05);OVX+DHEA组和OVX+E2组IFN-γ/IL-4比值均显著高于OVX组(P<0.01)。OVX组OB的PCNA表达与Sham组相比显著增高(P<0.05);与OVX组相比,OVX+DHEA组OB核内PCNA的平均表达强度和阳性细胞百分率皆显著增高(分别为P<0.05和P<0.01)。OVX+DHEA组OBPCNA表达与CD4+T细胞IFN-γ水平呈明显正相关(r=0.931,P<0.05);与IL-4水平呈负相关(r=-0.815,P<0.05)。结论:DHEA可通过细胞免疫调节作用形成Th1型免疫偏移,从而显著改善PMO的免疫状态;并有效促进OB增殖,显著改善骨形态。

关键词: 脱氢表雄酮, CD4+T细胞, Th1/Th2型细胞因子, 成骨细胞, 增殖

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2008年04月24日

【期刊论文】脱氢表雄酮对小鼠成骨细胞增殖周期与凋亡的影响

王凌, 李大金, 王文君, 朱影

中华内分泌代谢杂志2006年6月第22卷第3期/Chin J Endocrinol Metab June 2006, Vol.22, No.3,-0001,():

摘要

目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对小鼠成骨细胞(OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法:颅骨酶解法分离OB和体外培养OB,体外模拟雌激素撤退现象,分为对照组、10-10mol/L E2组、10-7mol/LDHEA组共3组,流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡,透射电镜观察OB超微结构。结果:DNA含量分析显示,DHEA组的S期和G2/M期细胞百分率比对照组明显增加,细胞增殖指数显著增加(P<0.01);DHEA和E2对OB还具有显著的抗凋亡作用(P<0.01或P<0.05);透射电镜可见经10-7 mol/L DHEA诱导后的OB细胞器明显增多,内质网扩张,线粒体丰富等形态学改变。结论:DHEA在体外可直接促进小鼠OB的增殖并抑制其凋亡。

关键词: 脱氢表雄酮, 成骨细胞, 细胞周期, 细胞增殖 细胞凋亡

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