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2009年11月03日

【期刊论文】含人过氧化物酶体增殖物激活受体δ基因高效真核表达载体的构建及其意义

周岐新, 章涛, 杨贵忠, 袁野, 万敬员, 杨俊卿, 蒋建新, 周岐新*

解剖学报, 2007, 38(2):173~177,-0001,():

摘要

目的构建高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPARδ)的真核表达载体,为hPPARδ受体功能和基于hPPARδ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台。方法 采用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR),从HepG2细胞总RNA克隆hPPARδ全长基因,与经BamHI、Sa/I相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建重组质粒phPPARδ-IRES2-EGFP,经酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARδ基因的完整性和忠实性;荧光显微镜观察重组质粒转染的293细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞hPPARδ的表达进行荧光定量PCR和免疫细胞化学检测。结果 经酶切和测序证实重组赝粒构建正确,并在转染的293细胞巾获得hPPAR6的高效表达。结论 成功构建phPPARδ-IRES2-EGFP重组质粒。

关键词: 过氧化物酶体增殖物激活受体δ, 基因克隆, 真核表达, 逆转录-聚合酶链反应

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2009年11月03日

【期刊论文】携带人PPARα基因高效真核表达载体的构建及其意义

周岐新, 章涛, 杨贵忠, 袁野, 李苌清, 万敬员, 蒋建新

中国药理学通报,2007,23(3): 413~417,-0001,():

摘要

目的 构建可以高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体(αahPPARa)的真核细胞表达载体,为筛选作用于PPARa受体的药物提供分子平台。方法将HepG2细胞总RNA经逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆hPPARα全长基因,用BamHI、SalI双酶切后,与相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建phPPARα-IRE52-EGFP重组质粒,用酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARα綦因的完整性和可靠性;重组质粒转染293细胞,荧光显微镜观察EGFP报告基因表达强度,并对转染细胞的hPPARα表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测。结果 经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARα的高效表达。结论 成功构建重组质粒phPPARa-IRES2-EG-FP,为基于hPPARα受体靶点的药物筛选平台的建立提供了高效表达hPPARα的重组载体。

关键词: 过氧化物酶体增殖物激活受体d, 基因克隆, 真核表达

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2009年11月03日

【期刊论文】罗格列酮对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外抗肿瘤作用

周岐新, 章涛, 余华荣, 杨贵忠, 刘颖菊, 杨俊卿, 蒋建新

第四军医大学学报,2007,28(11):971~974,-0001,():

摘要

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体叫(PPAR7)激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生长影响,以评价其在人乳腺癌治疗上的应用潜力.方法:噻唑蓝( MTT)法检测罗格列酮对MDA-MB-231绌胞体外生长抑制作用;应用PPARα拮抗剂GW9662,分析罗格列酮对MDA-MB-231细胞增殖影响与PPARγ受体关系;流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC和TUNEL法检测细胞凋亡.结果:罗格列酮T预下MDA-MB-231细胞Go/G,期比例上升,而S期比例下降,呈量一效关系抑制其生长,IC50=5.2ymol/L.PPARγ拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用(P<0.05);100 pdmol/L罗格列酮还可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,TUNEL法检测的凋亡率(18.4±3.1)%与Annexin V-FITC法检测的结果一致[(16.6±2.7)%l(P>0.05).结论:罗格列酮通过PPARγ介导,使MDA-MB-231细胞G.期阻滞而抑制其增殖,高浓度时还可诱导其发生凋亡,罗格列酮有望成为治疗乳腺癌的有效药物.

关键词: 过氧化物酶体增殖物激活受体γ, 罗格列酮, 抗肿瘤药, 乳腺肿瘤, MDA-MB-231细胞

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2009年11月02日

【期刊论文】P53基因对K562细胞增殖的影响

蒋利萍, 王靖雪, 杨锡强, 王莉佳

免疫学杂志,2004,20(2):106~109,-0001,():

摘要

目的观察恢复K562细胞的p53蛋白功能后该细胞的生物学行为的改变,探索用野生型p53基因治疗白血病的可能性。方法以K562细胞为研究对象,电穿孔法转导野生型p53基因,RT-PCR和免疫细胞化学方法检测p53基因的表达,3H-TdR掺人法检测细胞增殖,用流式细胞仪分别以TUNEL、annexin-V、细胞周期检测细胞的凋亡情况和细胞周期分布情况。结果转染p53基因的K562细胞,出现明显细胞周期C1期停滞,增殖抑制率为24.17%,但用TUNEL、annexin-V和亚二倍体峰检测未发现与未转染p53基因组有凋亡细胞比例差异。结论P53基因对K562细胞有一定的治疗效应,但不能诱导其发生凋亡。

关键词: P53, K562细胞, 细胞增殖 细胞凋亡

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2009年11月01日

【期刊论文】乙肝病毒X基因致肝细胞癌机理探讨*

任红, 陶小红**, 沈鼎明, 张晓实, 张大志, 古柏燕, 叶珈

中国科学,2008,30(4):428~433,-0001,():

摘要

构建HBx基因真核表达载体,导入HepG2细胞中,无血清培养同步化后,Western杂交检测HepG2-X细胞IGF-IR,PCNA和VEGF表达增强,但无p21CIPI/WAFI表达,流式细胞检测细胞周期,HepG-Xo细胞70%进入Go-Gi期,而HepG2-X细胞仅56%进入G0-G1期,与血清培养亲本HepG2细胞几乎相同.HBx基因增强IGF-IR表达,通过信号通路到细胞核,同时使PCNA表达增强,p21CIPl/WAFl表达抑制,推进细胞周期,使G0-G1细胞明显减少.HBx基因增强VEGF表达,通过旁分泌作用使血管内皮增生;以上可能是HBx蛋白致HCC的机理之一。

关键词: 乙肝病毒x基因 肝细胞癌 p21CIP1/, WAFI 核增殖抗原 血管内皮生长因子 胰岛素样生长因子-I受体

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