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2009年10月24日

【期刊论文】c-raf-1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响

李少林, 任庆兰

实用肿瘤杂志,2003,18(1):27~29,-0001,():

摘要

目的 探讨癌基因c-raf-1的反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 设立c-raf-1正义寡核苷酸组和非处理组(仅加入等量的脂质体,作对照,用RT-PCR检测卵巢癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化。用平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-raf-1反义寡核苷酸作用前后受60C0γ射线不同剂量照射后的集落形成率。结果 c-raf-1反义寡核苷酸能抑制c-raf-1癌基因的表达,经脂质体介导的c-raf-1反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降(P<O.01),而转染c-raf-l正义寡核苷酸组的集落形成率与单纯照射组相比无明显差异(P>0.05)。结论 c-raf-l反义寡核苷酸通过抑制c-raf-1的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性。该作用可能与c-raf-1反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。

关键词: 卵巢肿瘤, 脂质体, 寡核苷酸类,, 反义, 辐射耐受性

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2009年07月14日

【期刊论文】c-myc反义寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的影响

陈剑秋, 陈传贵, 吴义生, 沈洪

天津医药,2003,3(19): 593~595,-0001,():

摘要

目的:探讨c~myc反义基因治疗肿瘤的机制。方法:将正义(sense)、反义(antisense)、错配(mismatch)的c-myc寡核苷酸作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721,分别应用免疫组化、RT-PCR、PCR-ELISA等方法,观察对c-myc蛋白表达、端粒酶亚单位及活性表达的影响。结果:10μmol/L浓度的反义c-myc寡核苷酸作用于SMMC-772l 24h、48h后,相应的c-myc蛋白、端粒酶催化亚单位hTERT mRNA及其端粒酶活性与空白对照组相比,差别有统计学意义(P<O.O1);而正义组和错配组与空白对照组相比,差别无统计学意义(P>O.O5)。结论:c-myc反义寡核苷酸可能通过抑制端粒酶活性而抑制肿瘤细胞增殖。

关键词: 寡核苷酸类,, 反义, 端粒, 末端转移酶, 转录因子

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2009年07月14日

【期刊论文】反义碱性成纤维细胞生长因子对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

陈剑秋, 孙晋津

中华实验外科杂志,2004,21(9):1123~1125,-0001,():

摘要

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义脱氧寡核苷酸(A0DN)对血管平滑肌细胞(vSMCS)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 利用脂质体分别将浓度为5μmol/L的bFGF反义、正义及随机寡核苷酸(ODN)导入体外培养的VSMCs;应用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和westem blot半定量测定方法,观测ODN对bFGF基因表达的影响;通过细胞活性测定观察ODN对VSMCs增殖的抑制作用。结果 bFGF AODN作用于VSMCs后1~5d,其相应的mR-NA表达和蛋白表达均明显减弱,细胞增殖活性受到抑制。反义组与对照组相比,mRNA在第1~4天表达差异有非常显著性(P<0.01),第5天有显著性(P<0.05);蛋白表达在1~5d差异有显著性(P<0.05);细胞增殖率在1~4d差异有非常显著性(P<0.01),第5天差异无显著性(P>0.05)。而正义、随机组无此效应,同单纯脂质体和空白对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论 反义bFGF ODN可通过特异性抑制其相应基因表达来实现阻遏血管平滑肌细胞增殖。

关键词: 寡核苷酸类,, 反义, 成纤维细胞生化因子,, 碱性, 平滑肌细胞, 增殖

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2009年03月18日

【期刊论文】HBVPreS2反义寡核苷酸对HepG2.2.15细胞系HLA-I类抗原表达及生物活性的影响*

马春红, 丁培芳, 孙汶生, 王勤友, 蒋保云, 曹英林

山东大学学报(医学版),2002,40(3):202~204,-0001,():

摘要

目的:观察针对乙型肝炎病毒(HBV)PreS2基因特异性反义寡核苷酸(asON)对转基因细胞HepG2.2.15表面的人类白细胞Ⅰ类抗原(HLA2I)基因表达的影响。方法:设计合成互补于HBV PreS2翻译起始区的反义寡核苷酸即序列Ⅰ,并设非互补序列作对照即序列Ⅱ,免疫细胞化学染色观察asON对HepG2.2.15表面表达的HLA-I类抗原的影响,用ELISA法动态检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg的变化,放射免疫测定法检测asON对宿主细胞自身分泌蛋白2血清铁蛋白的影响。结果:HepG2.2.15细胞表面HLA-I类抗原表达降低,用药组和对照组相比有统计学意义(P<0.05)。asON能够抑制HBV表达HBsAg和HBeAg,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为66%和91%,而序列Ⅱ对HBsAg和HBeAg的抑制率均为11%。asON对宿主细胞自身分泌蛋白无影响,即对宿主细胞无毒性作用。结论:asON以序列特异性方式抑制HBV基因表达而对宿主细胞无毒性作用,HLA-I类抗原表达降低,这对减轻过度炎症反应,阻止慢性肝炎至重症肝炎的发生具有重要意义。

关键词: 寡核苷酸类,, 反义, 肝炎病毒,, 乙型, HLA抗原

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2009年03月18日

【期刊论文】反义寡核苷酸抗HBV作用的双峰现象

马春红, 孙汶生, 张利宁, 曹英林, 宋静, 刘素侠, 丁培芳

世界华人消化杂志,1999,7(8):708-709,-0001,():

摘要

HBV基因组含3.2kbDNA,有至少4个ORF,其中S区包含S基因,pre-S1基因和pre-S2基因,编码形成大、中、小3种蛋白,构成HBV的包膜蛋白(HBsAg, preS1Ag, preS2Ag)。其中HBsAg在体内引起的免疫病理反应是HBV感染中的重要致病机制,preS2Ag较HBsAg有更强的抗原性,并具有反式激活作用,在HBV感染及肝癌发生中关系密切。因而如何从基因水平抑制HBsAg和preS2Ag的表达,对抗HBV治疗有重要意义。我们设计了针对S基因翻译起始区和preS2基因翻译起始区的反义寡核苷酸(asON)作为基因封条,作用于HepG2.2215细胞,对其抑制作用进行研究,并首次报道了asON抑制作用的双峰现象,为开发新型抗HBV基因药物奠定基础

关键词: 乙型肝炎病毒, 寡核苷酸类,, 反义, 乙型肝炎表面抗原, 乙型肝炎核心抗原

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2006年07月12日

【期刊论文】放射性碘标记反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠中的分布及显像研究

王荣福, 沈晶, 王荣福△, 张春丽, 刘萌, 郭凤琴

北京大学学报(医学版),2004,36(6):655~659,-0001,():

摘要

目的:探讨用放射性碘标记的杠架区(framework regmon Mrna FR)mrna 反义寡核苷酸(antrsense oligo-nucleonde,ASON)作为B细胞淋巴瘤反义显像剂及反义治疗药物的可能,方法:通过氯胺T法用碘[125] GN DMA [131 I] 标记含酷胺的18聚体寡核苷酸获得125或131I-FR-ASON,建立茶大淋巴次郎固定资裸鼠动物模型,将148KBq125I-FR-ASON(2-3μg)经尾静脉注入正常小鼠,于不同时间处死小鼠,测定不同组织及标准源的放射性计数,荷瘤裸鼠瘤内注入脂体包裹的3.33MBq131I-FR-ASON(7-9μg)分别于注射后不同时间进行单光子发射计算机断层(single phelen emesion coputer tomography SPECT)显像,以脂质体包裹的正义寡核苷酸作为对照,24h显像后死裸鼠,取出血液,重要器官和肿瘤组织,测定各组织的放射性计数,并计算每克组织摄取率及肿瘤与非肿瘤组织放射性摄取比值(T/NT)结果:125I-IR-ASON注入正常小鼠体内后1h各脏器的放射性摄取达高峰24h基本清除,肝,胃和肠放射性分布最,骨,骨肉,脑中放射性分布较小,荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体包裹的131I标记ASON后立即用SPECT成像仅见肿瘤部位,1和2h成像可见小踪剂从肿瘤到腹腔,24h仍可见肿瘤显像,比较24h反义组与正义组肿瘤的每克组织摄取率,T/NT均有显著性差异,结论:放射性碘标记ASON对淋巴瘤组织有很强特导性,有望用于淋巴瘤反义显像和反义治疗的研究

关键词: 淋巴瘤, 寡核苷酸类,, 反义, 碘放射性同位素, 同位素标记

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2006年07月12日

【期刊论文】125I标记反义寡核苷酸及其识别淋巴瘤细胞的实验研究

王荣福, 邱峰, 张春丽, 朱平

中华核医学杂志,2003,23(2):69~71,-0001,():

摘要

目的 探讨用125I标记免疫球蛋白重链V1家族框架区(IgHV1FR)mRNA反义寡核苷酸(125I-FR-ASON)作为反义显像剂和反义治疗药物的可能性。方法 用DNA合成仪将含酪胺(tyramine)的单体连接在18 聚体寡核苷酸的5'端,再用氯胺-T法进行125I标记。用阳离子脂质体DMRIE-C包裹125I-ASON 转导Namalwa 细胞(B 淋巴瘤细胞系)和HL260细胞(人髓系白血病细胞系),测定转导效率,同时比较未用脂质体情况下的转导效率。质量分数为20%聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定tyramine-ASON与血清保温后的稳定性。结果 标记率为80.7%,放化纯为98.7%,24h放化纯仍高于90%。脂质体介导ASON 转导Namalwa 细胞的效率为(26.8±1.54)%,是未用脂质体的近18倍,转导HL260细胞的效率是(13.6±2.54)%,两组比较差异有显著性(P<0.01)。质量分数20%PAGE于2、6和24h时点未见异常条带。结论 通过连接酪胺碘标记寡核苷酸法是比较成功的方法。125I-FR-ASON 对Namalwa细胞具有较强的特异性,可用于淋巴瘤反义显像和反义放射治疗的研究。

关键词: 淋巴瘤, 寡核苷酸类,, 反义, 同位素标记, 碘放射性同位素

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2005年02月24日

【期刊论文】脂质体-C-erbB2反义脱氧寡核苷酸对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及化疗药物敏感性的影响

丰有吉, 沈梅, 周先荣, 姚明

中国妇产科杂志,1999,34(2):110~112,-0001,():

摘要

目的 探讨脂质体-C-erbB2反义脱氧寡核苷酸(C-erbB2 S-ODNs)对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及顺铂(DDP)敏感性的影响。方法 对20只裸鼠建立人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型,分为对照组(腹腔注射无菌水)、观察组(腹腔注射脂质体-C-erbB2 S-ODNs)、化疗组(腹腔注射无菌水及DDP)、观察+化疗组(腹腔注射脂质体-C-erbB2 S-ODNs及DDP)。治疗期间观测裸鼠体重变化,治疗结束后取瘤体称重进行电镜观察。结果 观察组抑瘤率为37%,电镜下可见细胞异染色质增多,线粒体退化。观察+化疗组抑瘤率可达50%。观察组裸鼠体重无明显改变。结论 C-erbB2反义基因治疗在卵巢癌基因治疗中有一定作用,与化疗联合应用可以取得更好的治疗效果。

关键词: 原癌基因, 寡核苷酸类,, 反义, 卵巢肿瘤, 疾病模型,, 动物

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