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2009年04月23日

【期刊论文】大鼠牙囊细胞体外培养技术的建立及其鉴定

凌均棨, 凌均, 谷海晶, 高燕, 王阿丹

华西口腔医学杂志,2004,22(1):19~22,-0001,():

摘要

目的 建立体外培养大鼠牙囊细胞的方法,观察牙囊细胞体外生长的生物学特性。方法 分离乳鼠下颌第一、第二磨牙牙胚的牙囊组织,应用组织培养的方法进行牙囊细胞原代和传代培养。显微镜观察培养细胞的形态,电镜观察体内牙囊组织和体外培养的牙囊细胞的超微结构。免疫组化法检测细胞波形蛋白、Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白的表达。结果 分离组织培养24h后,梭形细胞和多角形细胞从组织块中游出,经消化排除法获得纯化的牙囊细胞。显微镜下牙囊细胞为成纤维细胞样,电镜下牙囊细胞无桥粒,胞浆中含有高密度电子颗粒和大量粗面内质网(RER)。免疫组化染色显示牙囊细胞表达波形蛋白、Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白。结论 运用组织培养和细胞生物学技术可以成功获得原代和传代培养的大鼠牙囊细胞,体外培养的细胞具有与正常大鼠牙囊细胞相一致的生物学特性。

关键词: 牙囊, 细胞培养, 成纤维细胞 牙齿萌出

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2006年11月02日

【期刊论文】沙利度胺对难治、复发多发性骨髓瘤患者骨髓微环境的影响

李娟, 罗绍凯, 洪文德, 周振海, 邹外一

Chinese Journal of Cancer, 2003, 22 (4): 346-349,-0001,():

摘要

背景与目的:越来越多的研究表明,骨髓瘤细胞的生长、生存以及耐药的产生与骨髓微环境密切相关。沙利度胺(thalidomide,Thai)是作用于骨髓微环境的药物之一,我们通过观察沙利度胺对难治、复发多发眭骨髓瘤(mulnDleⅡⅣe10ma.MM)患者骨髓微环境的影响,进一步了解Thai的作用机制。方法:用流式细胞仪检测沙利度胺治疗前后难治、复发的MM患者骨髓基质细胞膜表面的细胞间粘附分子fcAM-1)和血管细胞粘附分子(vcAM-1)的表达强度,半定量RT-PCR法检测骨髓基质细胞IL-1BmRNA、IL-6mRNA、TNF-dmRNA的表达,采用酶联免疫吸附法ELISAj删定其血清VEGF、bFGF水平。结果:难治、复发MM患者骨髓基质细胞(BMSC)膜表面ICAM-1、VCAM-1平均荧光强度分别为13.28±4.26、10.35±2.47,用Thai治疗有效的难治、复发MM患者BMsc膜表面ICAM-1、VCAM-1平均荧光强度分别为4.29±0.98、3.54±0.62,明显受抑制妒<0.05)。难治、复发MM患者BMSCIL-1BmRNA、IL-6mRNA、TNF-dmRNA与B-actin的比值分别为1.83±0.64、24.52±11.46、3.42±1.83,用Thal后有效的难治、复发MM患者BMSCIL-1Bn,RNA、IL-6mRNA、TNF-dmRNA与13-actin的比值分别为0.58±0.11、13.47±14.31、1.25±0.76,明显受抑制。P<0.05。而治疗无效的难治、复发MM患者BMSC膜表面ICAM-1、VCAM-1平均荧光强度和IL-1BmRNA、IL-6mRNA、TNF-dmRNA与13-actin的比值同治疗前的比较,其差异无显著眭妒均>0.05)。难治、复发MM患者血清VEGF、bFGF水平分别为150.26±19.33)ng/L、Q3.78±13.63)ng/L,用Thai治疗后有效及无效者血清VEGF、bFGF水平均低于治疗前妒<0.005)。结论:沙利度胺能抑制新生血管的形成,并可阻断骨髓瘤细胞与骨髓基质细胞的结合。

关键词: 多发眭骨髓瘤, 沙利度胺, 骨髓基质细胞, 细胞间粘附分子, 血管细胞粘附分子, 血管内皮生长因子, 碱眭成纤维细胞生长因子

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2006年11月02日

【期刊论文】RNA干扰技术抑制体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的初步研究

葛坚, 黄圣松, 王莉娜, 尹心宝, 魏雁涛, 马萍

中华眼科杂志,2005,41(12):1076~1081,-0001,():

摘要

目的探讨RNA干扰技术对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法采用化学合成的靶向IKK2β的siRNA,转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞,同时以对任何基因均无作用的siRNA作为阴性对照。以逆转录聚合酶链反应(RT2PCR)技术检测IKK2βmRNA表达水平,免疫印迹法检测IKK2β蛋白表达水平。将siRNA的转染浓度分别设为5、10、25、50、100、200nmol/L,进行转染,于转染后48h采用四甲基偶氮唑盐法检测其转染后对成纤维细胞的抑制作用。结果 经转染了靶向IKK2β的siRNA,其成纤维细胞IKK2β的mRNA和蛋白表达水平均受到抑制。各个转染浓度(5、10、25、50、100、200nmol/L)均可抑制成纤维细胞的增殖(P<0.05),抑制率分别为10.72%、23.35%、30.84%、51.25%、50.06%、49.63%,50nmol/L时已达最大抑制率。结论靶向IKK2β的siRNA转染可以降低IKK2β的表达水平,同时对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖具有抑制作用。抗IKK2β的RNA干扰技术可能是抑制抗青光眼术后滤过道瘢痕化的新手段。

关键词: RNA干扰,  蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶,  筋膜,  成纤维细胞  细胞分裂,  青光眼

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2006年11月02日

【期刊论文】单纯疱疹病毒胸腺激酶基因系统抑制体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的研究

葛坚, 王继兵, 刘炳乾, 黄冰, 魏雁涛

中华眼科杂志,2006,42(3):212~217,-0001,():

摘要

目的研究单纯疱疹病毒胸腺激酶(HSV-tk)基因系统对人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTFs)增殖的抑制作用及其作用机制。方法 构建含HSV2tk基因的逆转录病毒载体pL(tk)SN并转入包装细胞系PT67进行病毒包装,G418筛选抗性克隆并扩大培养收集病毒上清,测定病毒滴度。透射电镜观察鉴定病毒颗粒;聚合酶链反应(PCR)技术鉴定tk基因在病毒基因组中的整合。用病毒感染HTFs细胞,G418筛选并扩大培养,逆转录聚合酶链反应(RT2PCR)技术和免疫印迹法检测tk基因的表达;加不同浓度前药更昔洛韦(GCV)后,以MTT法检测tk基因对HTFs细胞增殖的抑制作用;采用Hoechst33258染色及流式细胞仪检测凋亡细胞;电镜观察细胞形态学改变。结果酶切鉴定结果显示成功构建了逆转录病毒载体pL(tk)SN,电镜下包装细胞产生的病毒颗粒呈椭圆形,直径约100nm;病毒基因组中,PCR扩增出了tk基因;测得病毒滴度为4×107cfu/ml;被转染的HTFs细胞,用RT2PCR及免疫印迹法检测到tk基因在mRNA与蛋白水平均有表达;HSV-tk-GCV系统对HTFs细胞增殖的抑制作用表现为剂量依赖性,5×10-3g/L的GCV作用5d可将细胞全部杀死,IC50为6×10-4g/L,HSV2tk2GCV系统对HTFs细胞的杀伤机制表现为坏死与凋亡,凋亡率随GCV浓度的升高而增加。结论 HSV2tk基因系统能有效抑制人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖,作用机制表现为细胞的坏死与凋亡。(中华眼科杂志,2006,42:2122217)

关键词: 单纯疱疹病毒属,  胸苷激酶,  更昔洛韦,  眼,  成纤维细胞

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