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2011年04月29日

【期刊论文】真皮生物模板对成纤维细胞生物学行为的影响

陆树良, 刘英开, 青春, 廖镇江, 史济湘

中华修复重建外科杂志,2005,19(1):10~14,-0001,():

摘要

目的 研究真皮生物模板的应用对皮肤组织创伤修复过程中成纤维细胞(fibroblast,FB)生物学行为的影响,探讨其在影响组织修复及减轻瘢痕形成中的作用机制。方法 SD大鼠120只,在背部造成2.5cm×2.5cm的全层皮肤组织缺损创面,随机分为4个处理组,即开放创面组、全厚皮移植组、刃厚皮移植组、复合移植组(无细胞真皮基质+刃厚皮移植),分别于术后1、2、4、6及12周取材。通过免疫组织化学及图像分析技术检测组织标本中肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)的标志蛋白——α平滑肌肌动蛋白(α sinoothmuscle actin,α SMA)的表达以及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、整合素α2、β1及转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1))的表达量。结果 复合移植组αSMA在术后1~12周低于开放创面组,术后1、4、6周低于刃厚皮移植组,术后2、12周高于全厚皮移植组(P<0.05);复合移植组FN在术后1~12周低于开放创面组和刃厚皮移植组,术后1~4周高于全厚皮移植组(P<0.05);复合移植组整合素α2在术后1~12周低于开放创面移植组,术后1~4周低于刃厚皮移植组,术后1、2周高于全厚皮移植组(P<0.05);复合移植组整合素β1在术后1~12周低于开放创面组,术后2~12周低于刃厚皮移植组,术后1~6周高于全厚皮移植组(P<0.05);复合移植组TGFβ1在术后1~12周低于开放创面组,术后2~12周低于刃厚皮移植组,术后4~12周高于全厚皮移植组(P<0.05)。结论 真皮生物模板可减少创面愈合过程中FB向MFB的转化,并有利于FB中FN、整合素α2、β1及TGFβ1,表达量下调。真皮生物模板弥补了单纯刃厚皮移植的不足,减少瘢痕形成、改善创面愈合质量。

关键词: 创面愈合 复合移植 成纤维细胞 真皮模板

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2011年04月29日

【期刊论文】糖尿病病程对真皮成纤维细胞生物学行为的影响

陆树良, 王敏骏, 青春, 花兰女, 史桂英, 盛昭园, 廖镇江

上海第二医科大学学报,2005,25(5):459~462,-0001,():

摘要

目的 探讨病程对糖尿病皮肤和真皮成纤维细胞(FB)生物学行为的影响。方法 通过制备不同病程糖尿病模型,对皮肤中的组织生化和真皮FB的生物学行为进行检测。结果 短程糖尿病皮肤厚度变薄,糖含量升高,且病程至8周有晚期糖基化终末产物(AGEs)蓄积,真皮S期细胞比例升高和单位面积皮肤羟脯氨酸含量减少。高糖和AGE—HSA导致真皮FB生长抑制和凋亡,呈剂量依赖性。结论 糖尿病皮肤随着病程延长,病理生理异常会不断加重;糖尿病真皮FB的生物学改变与皮肤高糖和AGEs蓄积存在直接关系。

关键词: 糖尿病, 晚期糖基化终末产物, 成纤维细胞

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2009年11月20日

【期刊论文】凝血酶受体激活肽和凝血酶对人成纤维细胞释放TGF-[3和VEGF的影响

黄跃生, 杨宗城

中华烧伤杂志,2003,19:5~7,-0001,():

摘要

目的探讨凝血酶受体激活肽TP508和d一凝血酶对体外培养的人成纤维细胞Lu13释放转化生长因子-[3(TGF-[3)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响,以了解其促进创面愈合的部分机制。 方法在体外培养融合的Lu13中,加入不同浓度的凝血酶和TP508,置培养箱培养一定时间后,收集上清液离心,采用ELISA法测定TGF-pl、TGF-[32和VECF的含量。 结果 d一凝血酶能显著促进Lu13释放TGF-[3l;单纯TP508使Lu13释放TGF-[3l显著减少(P<0.01),与小剂量凝血酶复合应用,对Lu13释放TGF-pl有一定协同作用。经凝血酶处理后,Lu13释放TGF-[32也显著增高(P<0. 05)。在较大剂量(100 yg/ml)时,TP508对Lu13释放TGF-[32呈轻度抑制作用(P>0.05)。经凝血酶处理后,VECJF释放量显著增加,TP508使Lu13释放VEGF减少。 结论凝血酶可刺激Lu13释放TGF-[3.、TCF-[3.和VEGF,TP508抑制上述生长因子释放。TP508对TGF-[3.释放的抑制作用,可能有助于减少瘢痕形成,提高创面愈合质量。

关键词: 凝血酶, 成纤维细胞 转化生长因子一B, 内皮生长因子

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2009年07月14日

【期刊论文】反义碱性成纤维细胞生长因子对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

陈剑秋, 孙晋津

中华实验外科杂志,2004,21(9):1123~1125,-0001,():

摘要

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义脱氧寡核苷酸(A0DN)对血管平滑肌细胞(vSMCS)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 利用脂质体分别将浓度为5μmol/L的bFGF反义、正义及随机寡核苷酸(ODN)导入体外培养的VSMCs;应用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和westem blot半定量测定方法,观测ODN对bFGF基因表达的影响;通过细胞活性测定观察ODN对VSMCs增殖的抑制作用。结果 bFGF AODN作用于VSMCs后1~5d,其相应的mR-NA表达和蛋白表达均明显减弱,细胞增殖活性受到抑制。反义组与对照组相比,mRNA在第1~4天表达差异有非常显著性(P<0.01),第5天有显著性(P<0.05);蛋白表达在1~5d差异有显著性(P<0.05);细胞增殖率在1~4d差异有非常显著性(P<0.01),第5天差异无显著性(P>0.05)。而正义、随机组无此效应,同单纯脂质体和空白对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论 反义bFGF ODN可通过特异性抑制其相应基因表达来实现阻遏血管平滑肌细胞增殖。

关键词: 寡核苷酸类,, 反义, 成纤维细胞生化因子,, 碱性, 平滑肌细胞, 增殖

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2009年07月14日

【期刊论文】大鼠血管平滑肌细胞中bFGF及其受体FGFR-1的基因表达

陈剑秋, 孙晋津

天津医科大学学报, 2005,11(1):8~10(下转第l4页),-0001,():

摘要

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体FGFR-1在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的表达情况。方法:建立大鼠血管平滑肌细胞原代培养并鉴定;使用原位杂交检测VSMCs中bFGF及其受体FGFR-l的mRNA表达;用免疫组织化学和Western Blot技术鉴定bFGF蛋白表达情况。结果:通过光镜和免疫组织化学技术从细胞形态和结构上使VSMCs得到鉴定;原位杂交证实大鼠VSMCs表达bFGF及其受体FGFR-l的mRNA;免疫组织化学表明VSMCs的胞核和胞浆中有bFGF蛋白表达,Western Blot显示bFGF有18KDa、22KDa、22.5KDa 3种异构体形式。结论:大鼠血管平滑肌细胞表达bFGF及其受体FGFR-1 mRNA,bFGF有多种异构体形式并分布在VSMCs的胞核和胞浆中。

关键词: 碱性成纤维细胞生长因子, 受体, 血管平滑肌细胞, 大鼠

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2006年11月22日

【期刊论文】成纤维细胞体外培养、冻存及复苏的实验研究

蔡景龙, 李惠斌, 潘博, 刘振中, 安纲

中国美容医学,2005,14(4):394~397,-0001,():

摘要

目的:探讨正常皮肤和瘢痕疙瘩组织成纤维细胞在体外培养情况下其生物学特性的差异,以及细胞冻存和复苏的方法及其应用价值。方法:对8例正常皮肤和8例瘢痕疙瘩组织标本分别进行体外成纤维细胞的原代培养、传代培养,观察培养的成纤维细胞形态,并作生长曲线比较细胞增殖情况。选取处于对数生长期的培养细胞梯度降温后置入液氮(-196℃)中保存4-6个月,进行细胞复苏培养,以2%台盼蓝确定细胞活力,并观察复苏的成纤维细胞形态不状况。结果:体外培养的正常皮肤和瘢痕疙瘩组织成纤维细胞形态和生长曲线基本相同,但瘢痕疙瘩原代成纤维细胞萌出生长较正常皮肤快,生长融合后成纤维细胞排列紊乱,极性消失,有明显的交叉重叠现象;体外培养的成纤维细胞,经冷冻、保存4-6个月后,复苏超过80%,细胞形态无明显示改变。结论:体外培养的正常皮肤和瘢痕疙瘩组织成纤维细胞形态与生长特性基本相同。瘢痕疙瘩成纤维细胞可成功冻存和复苏。

关键词: 瘢痕疙瘩, 成纤维细胞 细胞培养, 冻存, 复苏

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2007年09月21日

【期刊论文】软骨形态发生蛋白1诱导真皮成纤维细胞向软骨细胞表型分化的影响因素

崔磊, 尹烁, 邓辰亮, 李宇琳, 杨光辉, 陈富国, 刘伟, 刘德莉, 曹谊林

中华医学杂志2005年8月31日第85卷第33期/Natl Med J China , August 31, 2005. Vol. 85. No. 33,-0001,():

摘要

目的 探讨软骨形态发生蛋白1(CDMP1)生长因子体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化的影响因素。方法 取包皮环切术后丢弃的真皮组织共3 例,分离成纤维细胞体外培养扩增,以含10% 胎牛血清的F-12 培养液加入CDMP1( 终浓度为100 ng / ml)进行诱导,未加CDMP1 的作为对照。观察细胞多次传代后(P2、P5、P10)细胞表型分化情况;调整CDMP1 浓度分别为10、30、100、300 ng / ml,观察诱导后软骨细胞表型的变化;单层培养与微团块培养成纤维细胞分别体外诱导7、14 d,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞诱导前后骨形态发生蛋白受体(BMPR)、Ⅱ、Ⅳ、X型胶原表达;Western 印迹检测细胞诱导前后Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖的表达;流式细胞术检测表面标志CD29、CD105、CD106、CD166 及细胞诱导后Ⅰ、Ⅱ型胶原表达。结果 细胞多次传代后(P5、P10)仍可表达特异软骨基质Ⅱ型胶原与蛋白聚糖,Ⅱ型胶原阳性细胞率与P2 诱导后差异无统计学意义(P > 0. 05)。CDMP1 浓度为10、30 ng / ml 诱导7、14 d,均未见Ⅱ型胶原与蛋白聚糖表达;CDMP1 浓度为100、300 ng / ml 时,Ⅱ型胶原与蛋白聚糖表达强度差异无统计学意义。单层培养成纤维细胞诱导14 d 后,软骨基质表达消失;微团块三维培养诱导14 d,软骨基质仍保持表达。RT-PCR检测诱导后ActR-I / ALK-2,BMPR-IA/ ALK-3,BMPR-IB/ ALK-6 基因表达明显增强。结论在CDMP1 生长因子诱导下,人真皮成纤维细胞体外扩增后可保持向成软骨细胞表型分化能力,细胞分化与CDMP1 浓度、细胞三维培养条件及BMPR 介导有关。

关键词: 软骨细胞, 成纤维细胞 骨形态发生蛋白质类, 分化

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2007年09月21日

【期刊论文】软骨形态发生蛋白1诱导真皮成纤维细胞表达软骨细胞表型的实验研究

崔磊, 尹烁, 邓辰亮, 杨光辉, 陈富国, 刘伟, 刘德莉, 曹谊林

中华医学志2004年8月2日第84卷第15期/Natl Med J China , August 2, 2004. Vol. 84. No. 15,-0001,():

摘要

目的 应用软骨形态发生蛋白(CDMP)生长因子,体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性。方法 取包皮环切术丢弃真皮组织共3例,成纤维细胞体外培养扩增至第二代,以1×104/cm2密度接种,12h后加入细胞诱导液(10%胎牛血清F-12培养液,CDMP1终浓度为100ng/ml)单层培养,未加的成纤维细胞培养用CDMP1为对照。诱导7d后观察细胞形态变化,Image Plus图像分析软件计算细胞长宽比例。激光花聚焦显微镜分别观察诱导前后细胞内I、II、III型胶原表达及分布,Western印迹检测诱导前后细胞II型胶原蛋白表达。反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测诱导后成软骨相关的Sox9、聚焦蛋白聚糖与II、IX型胶原mRNA表达;同时检测与成骨相关的X型胶原、碱性磷酸酶(AKP)mRNA表达。培养第二代细胞以2×107个细胞/ml细胞密度进行离心管法培养,诱导14d后行阿辛蓝与II型胶原免疫组化染色。结果 诱导后可见单层培养的成纤维细胞形态由长梭形向软骨细胞样多角形转变,Image Plus图像分析软件计算细胞诱导后的长宽比例为(1.40±0.15),较诱导前(7.40±1.30)差异有显著意义(P<0.05);与正常软骨细胞(1.29±0.24)差异无显著意义。免疫荧光激光共聚焦观察发现诱导后细胞内出现II型胶原表达,I、III型胶原表达呈阳性。RT-PCR检测成软骨相关的Sox9,聚集蛋白聚糖,II、IX型胶原mRNA表达阳性;X型胶原、AKP未检测到mRNA阳性表达。Western印迹检测细胞诱导后II型胶原蛋白表达阳性。离心管培养诱导7d后阿辛蓝染色示糖胺聚糖(GAG)均匀分布于基质中,免疫组化染色示基质中II型胶原表达阳性。结论 第二代成人真皮成纤维细胞在CDMP1生长因子诱导下可向成软骨细胞表型分化,并能分泌软骨细胞特异性基质,有望成为软骨组织工程新的种子细胞来源。

关键词: 软骨细胞;成纤维细胞;骨形态发生蛋白质类;抗原, 分化

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2005年02月25日

【期刊论文】苯丙酸诺龙对烧伤后∝(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA表达影响的实验研究

岑瑛, 刘宁, 罗旭松, 刘晓雪

,-0001,():

摘要

目的 探讨苯丙酸诺龙对烧伤后成纤维细胞∝(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA表达的影响及其作用机制。方法 Wistar大鼠32只,制成20%TBSA深Ⅱ度烧伤模型,随机分为苯丙酸诺龙治疗(NP)组和对照组,于4、7、14和21天分别取创面肉芽组织,测定其成纤维细胞中雄激素受体及∝(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA含量,分析比较两组间成纤维细胞雄激素受体和∝(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA的表达及其相关关系。结果 NP组在7、14和21天∝(Ⅰ)前胶原蛋白mRNA的表达均高于同期对照组∝(Ⅰ)两组间比较有统计学意义(P<0.05)。NP在4、7、14和21天成纤维细胞雄激素受体的表达均明显高于同期对照组,有统计学意义(P<0.05)。雄激素受体的表达与胶原蛋白基因的表达之间有相关关系,且有统计学意义。结论 NP能促进Ⅰ型前胶原蛋白mRNA和成纤维细胞雄激素受体的表达,二者间存在正相关关系,NP在转录水平促进胶原蛋白的合成,这种作用与改变成纤维细胞雄激素受体的含量有关。

关键词: 苯丙酸诺龙,, 成纤维细胞,, 雄激素受体,, ∝(, Ⅰ), 型前胶原蛋白mRNA

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2005年02月25日

【期刊论文】γ-干扰素对增生性瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

岑瑛, 严小蓉

,-0001,():

摘要

目的 观察γ-干扰素对增生性瘢痕及成纤维细胞的作用,探索γ-干扰素治疗增生性瘢痕的依据。方法 取10例患者增生性瘢痕标本,培养增生性瘢痕的成纤维细胞,取第1代细胞,分为实验组和对照组。实验组加入γ-干扰素100 UPml,作用5天,并观察成纤维细胞的细胞计数、肌成纤维细胞分化比例及细胞凋亡率。结果 实验组成纤维细胞计数、肌成纤维细胞分化比例下降,细胞凋亡率增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论γ-干扰素抑制成纤维细胞生长,抑制向肌成纤维细胞分化,促进成纤维细胞凋亡。

关键词: γ-干扰素,, 增生性瘢痕,, 成纤维细胞,, 成纤维细胞,, 凋亡

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