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2007年05月28日

【期刊论文】一氧化氮对猪细小病毒体外增殖的影响研究

崔保安, 魏战勇, 黄克和, 王学斌, 金喜新, 张龙现

中国病毒学2005年2月第20卷第1期/VIROLOGICA SINICA February 2005, 20 (1): 33-36,-0001,():

摘要

本文研究了来源于不同前体物的一氧化氮(Nitro oxide,NO)对猪细小病毒(Porcine paruouirus,PPV)体外增殖的影响。结果表明.NO前体物S-硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)、L-精氨酸(L-Arg)均能够有效地诱导PK-15细胞产生NO,进而显著地抑制PPV在PK-15细胞上的复制,其效果与前体物的浓度呈正相关,在浓度为100µmol/L和200µmol/L时,SNAP产生NO的能力与抑制病毒复制的作用要强于L-Arg。在病毒感染前6h和3h添加SNAP或L-Arg对病毒复制的抑制作用比在病毒感染后3h和6h添加的作用强,表明NO的抗病毒作用主要发生在病毒感染的初始阶段。此外,添加具有抑制L-Arg产生NO作用的N-硝基-L-精氨酸(L-NNA)能抵消L-Arg体外抗病毒的作用。

关键词: 一氧化氮, 细小病毒, S-硝基-N-乙酰青霉胺, L-糈氨酸, N-硝基-L-精氨酸

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2007年05月28日

【期刊论文】硒蛋氨酸对猪细小病毒体外增殖的抑制作用

崔保安, 魏战勇, 黄克和, 金喜新, 王学斌, 杨明凡

南京农业大学学报/Journal of Nanjing Agricultural University 2005, 28 (2): 147-149,-0001,():

摘要

以PK-15细胞为模型,研究不同浓度的硒蛋氨酸对猪细小病毒(PPV)体外复制的抑制作用。结果表明,在2-8µmol·L-1范围内,硒蛋氨酸对细胞生长没有影响,但对猪PV的体外复制呈现显著的抑制作用(P<0.05)且随着浓度的增加其抑制作用增强。还原型谷胱甘肽和甘露醇均有增强硒蛋氨酸的抑制病毒复制作用,两者同时添加时,其作用更明显。

关键词: 细小病毒, 硒蛋氨酸, 体外增殖

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2007年05月28日

【期刊论文】猪细小病毒在PK细胞中的增殖过程

崔保安, 魏战勇, 黄克和, 金喜新, 王学斌, 胡功政, 杨明凡, 张素梅

中国兽医学报2005年9月第25卷第5期/Chin J Vet Sci Sept. 2005, Vol. 25, No. 5,-0001,():

摘要

将猪细小病毒南京毒株1(NJ-1)、南京毒株2(NJ-2)和7909毒株接种于PK-15细胞,用免疫荧光检测方法研究了猪细小病毒增殖的基本特性与规律。在PK-15细胞中,3个毒株的增殖规律基本相似,均在感染后12h即可检测到荧光,表明其子代病毒粒子产生,随后逐渐增多,在感染后48h荧光几乎遍布所有细胞,随后荧光开始衰减,在84h时病毒引起细胞大面积崩解,荧光呈现岛屿状分布。通过绘制其一步法生长曲线可知,在病毒感染后12h,细胞培养液中的病毒TCID50/mL为2.O左右,随后逐渐增高,感染后60h3种毒株的TCID50/ml均达到最高,子代病毒粒子向细胞外释放也达到高峰,其后TCID50逐渐下降。培养液中病毒粒子的丰寿期为7h。

关键词: 细小病毒, PK-15细胞, 增殖, 免疫荧光试验

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2007年05月28日

【期刊论文】猪伪狂犬病病毒单抗双夹心ELISA的构建

崔保安, 祁小乐, 牛春玲, 王莉娟, 刘占通

河南农业大学学报2004年12月第38卷第4期/Journal of Henan Agricultural University Dec., 2004, Vol. 38, No. 4,-0001,():

摘要

建立了检测猪伪狂犬病痛毒(Pseudo rabies virus,PRV)的单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验(Enzyme-Iinked immunosor-bent assay,ELISA)方法,为该病的快速诊断奠定了基础,作者对其组装条件进行了筛选,认为兔抗PRV IgG最佳包被质量浓度为4.59mg·L-1;抗PRV的单克隆抗体(Monoclonal antibodies,McAb)的最佳质量浓度为6.45mg·L-1;最佳封闭剂为10gL-1BSA(牛血清白蛋白),封闭时问为60min,制定了科学的结果判定标准,最低病毒检出量为200µg·L-1.与病毒分离、动物试验和中和试验相比较,该方法特异、灵敏、可靠、方便。

关键词: 伪狂犬病病毒, 单克隆抗体, 双夹心ELISA

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2007年05月28日

【期刊论文】猪细小病毒核酸疫苗的构建及其对小鼠免疫原性的研究

崔保安, 魏战勇, 王学斌, 黄克和, 金喜新, 王亚宾, 陈红英

中国生物工程杂志/Chin Biotechnology, 2006, 26 (12): 63-67,-0001,():

摘要

将猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核表达载体中,构建了pClneo-VP2重组质粒,转染至PK-15细胞中,利用免疫荧光方法检测在体外表达情况;并以小鼠为动物模型,将pClneo-VP2、pCI-neo重组质粒、猪细小病毒活疫苗和对照组通过肌肉注射进行免疫,检测免疫小鼠的淋巴细胞转化功能,特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示,pClneo-VP2在体外能够诱导PK-15细胞表达VP2蛋白,小鼠注射pClneo-VP2质粒1周后能够诱导机体产生抗体,4周时达到峰值,与活疫苗对照组产生的抗体滴度、诱导T淋巴细胞增殖和诱导强的细胞毒性基本一致。试验表明,构建的pClneo-VP2能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫,为研制出高效、新型猪细小病毒疫苗提供了科学依据和试验依据。

关键词: 细小病毒, VP2基因, 核酸疫苗

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2007年05月28日

【期刊论文】猪α干扰素原核表达载体的构建及表达

崔保安, 刘占通, 舒畅, 金喜新, 陈红英, 杨明凡, 魏战勇

河南农业大学学报2006年8月第40卷第4期/Journal of Henan Agricultural University Aug., 2006, Vol. 40,No. 4,-0001,():

摘要

以重组克隆质粒pGEM-T-IFN-aZ为模板,PCR扩增杂种猪d干扰素,将其插入原核表达载体pET-43.1a-c(+)中,构建了猪d干扰素原核表达载体pFT-IFN-a,实现了猪d干扰素在大肠杆菌BL21中的表达.SDS- PAGE电泳、Western-blotting检测均出现了特异性的条带.SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白以可溶性形式存在.经薄层扫描分析,表达产物约占菌体总蛋白的29.8%.

关键词: a干扰素, 原核表达, Western - blotting

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2007年05月28日

【期刊论文】IL-2与猪细小病毒VP2 基因双表达载体的构建及免疫原性的研究

崔保安, 魏战勇, 王学斌, 黄克和, 金喜新, 董振杰, 郑兰兰

生物工程学报2006年5月第22卷第3期/Chinese Journal of Biotechnology May., 2006, Vol. 22, No. 3,-0001,():

摘要

将白细胞介素-2基因和猪细小病毒VP2基因主要抗原区克隆至pCI-neo真核表达栽体中,构建了pClneo-IL2 -VP2重组质粒,用脂质体将其转染到PK-15细胞中,利用免疫荧光方法检测在体外表达情况。并以小鼠为动物模型,将pClneo-IL2 -VP2重组质粒、对照组pCI-neo和猪细小病毒活疫苗通过肌肉注射进行免疫,检测免疫小鼠的淋巴细胞转化功能,特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示,pClneo-IL2 -VP2在体外能够诱导PK-15细胞表达VP2蛋白,小鼠注射pClneo-IL2 -VP2质粒1周后能够诱导机体产生抗体,4周时达到峰值,与活疫苗对照组产生的抗体滴度、诱导T淋巴细胞增殖和诱导强的细胞毒性基本一致。试验表明,构建的pClneo-IL2 -VP2能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。

关键词: 细小病毒, VP2基因, IL-2, 基因疫苗

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2007年05月22日

【期刊论文】猪源隐孢子虫对仔猪致病性研究

张龙现, 闫文朝, 石团员, 宁长申, 梁宏德, 刘光辉, 邵兆霞

畜牧兽医学报, 2006, 37 (7), 700-704/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,-0001,():

摘要

为确定我国猪源隐孢子虫的危害性,采用光镜、扫描电镜和透射电镜等技术研究了猪源隐孢子虫sucp株对5日龄仔猪的致病性。结果:感染仔猪出现水样腹泻和脱水,粪便中混有肠黏膜碎片,潜伏期为3~5 d ,排卵囊持续期33~43 d ,虫体寄生于盲肠、结肠和直肠,并且盲肠和结肠杯状细胞增生,有炎性细胞浸润,结肠和直肠黏膜微绒毛萎缩、倒伏和脱落。结果表明sucp株对新生仔猪有一定致病性。

关键词: 隐孢子虫, 致病性, 超微结构

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