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2005年09月28日

【期刊论文】碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及表达

周刚, 张启旭, 陆佳韵, 刘芝华

中国修复重建外科杂志,2004,18(5):435~439,-0001,():

摘要

目的构建人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast grow th facto r,bFGF)真核表达质粒,研究其在体内外的表达。方法通过基因克隆技术,构建并大量制备pcDNA 3.1/myc-His(-)C-bFGF真核表达体系,RT-PCR和细胞免疫组织化学方法检测体外瞬时表达情况;直流电脉冲介导重组质粒pcDNA 3.1/myc-His(-)C-bFGF和pCD2-血管内皮细胞生长因子121(vascularendo thelial growth factor, VEGF121)在兔颈部肌肉瓣内转移并表达, 测定其促血管生成的生物学效应。结果构建的pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF真核表达体系成功转染体外培养HeLa细胞,目的基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达。pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF和pCD2-VEGF121重组质粒分别转染在体肌瓣,获得外源基因高水平表达。转基因肌肉发生血管增生、血流增强的生物学效应。结论构建了人bFGF真核表达质粒,并可在体内外顺利表达,为进一步组织移植或组织工程基因治疗研究奠定了基础。

关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 基因克隆, 基因表达

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