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2006年11月15日

【期刊论文】用去细胞同种异体神经构建猕猴组织工程化神经的实验研究

刘小林, 许扬滨, 胡军, 江长青, 杨光诗, 朱家恺

中华显微外科杂志,2005,28(2):136~139,-0001,():

摘要

目的评价用自体源骨髓问充质干细胞(MSCs)或许旺细胞(SCs)作种子细胞,与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴尺神经4cm缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用4种移植物桥接猕猴4cm尺神经缺损。A组:种植自体MSCs的去细胞同种异体神经;B组:种植自体SCs的去细胞同种异体神经;C组:去细胞同种异体神经;D组:自体神经移植、通过功能学、神经电生理学及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果A、B组术后6个月能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组相比无统计学意义(P>0.05);但A、B、C、D组分别与C组相比,差异有统计学意义(P>0.05)?结论用自体源SCs或MSCs作种子细胞,与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴4cm尺神经缺损,均能取得与自体神经移植相近的效果。

关键词: 组织工程 外周神经, 神经移植物, 化学萃取, 猕猴

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2006年11月15日

【期刊论文】去细胞组织工程化神经支架的制备与形态学研究

刘小林, 朱庆棠, 朱家恺, 赖英荣, 江长青, 杨光诗, 胡军

中华显微外科杂志,2004,27(1):35~38,-0001,():

摘要

目的探讨如何去除人类长段粗大神经中的细胞。为构建人类组织工程化神经提供具有仿生结构的支架方法取4段长10cm、直径6mm人的胫神经,其中3段用3%三硝基甲苯和4%脱氧胆酸钠分别萃取1、2和3次,在萃取神经和未萃取神经的中段取材,行HE染色、砂罗铬花青染色和S-100免疫组化染色,在光镜和电镜下观察神经萃取前后形态学的变化结果用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取后,胫神经内的细胞消失,I纤维性支架结构与未经萃取的神经相仿,电镜下可见萃取后的神经由空的神经基底膜管和管之间的胶原纤维构成。随着萃取次数的增加,神经内残留的S-100蛋白显著减少,但反复萃取后神经的支架结构受破坏。结论用硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取2次可去除人体长段、粗大神经的细咆而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构,可能是制备具有仿生结构的人类组织工程化神经支架较为理想的方法。

关键词: 外周神经, 组织工程 人类, 化学萃取

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2006年11月15日

【期刊论文】猕猴组织工程化周围神经移植物的实验研究

刘小林, 江长青, 胡军, 向剑平, 朱家恺

中华手外科杂志,2005,21(6):372~374,-0001,():

摘要

目的评价利用化学萃取法获得的神经支架制备猕猴组织工程化周围神经移植物修复40尺神经缺损的效果。方法共使用成年猕猴9只,随机取其中的6只,培养自体雪旺细胞,应用已经制备好的去细胞神经为支架材料构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经的40mm缺损。实验分实验组,空白组,正常对照组3组。术后5个月通过形态学,肌电检测和免疫组织化学方法观察。结果3组均未发现猕猴双手有糜烂或溃疡形成,猕猴小鱼际肌群的饱满度和弹性于术前无明显差别。实验组与正常对照组间小鱼际肌群的运动动作电位潜伏期.最大振幅及再生神经纤维的数目差异均无统计学意义(P>0.05)。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论用自体源雪旺细胞微注入去细胞同种异体神经支架构建的组织工程化神经移植物修复猕猴40ram的尺神经缺损,可取得与自体神经移植相似的效果。

关键词: 周围神经, 组织工程 猴, 化学萃取外

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2006年11月15日

【期刊论文】猕猴骨髓问充质干细胞与去细胞神经优化人工神经的体外构建

刘小林, 杨光诗, 许扬滨, 朱家恺, 朱庆棠

中华显微外科杂志,2005,28(1):35~38,-0001,():

摘要

目的探讨猕猴骨髓间充质干细胞作为种子细胞与去细胞同种异体神经作为支架,体外构建人工神经的研究。方法采用密度梯度离心的方法分离并培养猕猴骨髓间充质干细胞,利用相差显微镜观察细胞生长情况并描绘其生长曲线;取猕猴3段4cm的周围神经,其中2段用4%triton-X-100及4%脱氧胆酸钠液分别萃取1次和2次,在新鲜神经和萃取神经中段取材,组织学检测及电镜学观察萃取前后的形态学变化;采用显微注射的方法把猕猴骨髓间充质干细胞种植到萃取两次的异体神经内,HE染色观察细胞在支架内的生长情况。结果猕猴骨髓间充质干细胞自我增殖能力强;萃取1次的异体神经细胞及髓鞘结构仍部分存留,而萃取2次的其细胞及髓鞘结构消失;HE染色可见细胞在萃取2次的异体神经内可爬行生长。结论猕猴骨髓间充质干细胞与化学萃取的去细胞同种异体神经适合体外构建人工神经。

关键词: 骨髓间充质干细胞, 组织工程 去细胞神经, 猕猴

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2006年11月15日

【期刊论文】构建猕猴组织工程化周围神经的实验研究

刘小林, 胡军, 朱庆棠, 许扬滨, 朱家恺

中华创伤骨科杂志,2005,7(12):1152~1156,-0001,():

摘要

目的评价组织工程化周围神经修复猕猴4cm尺神经缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用6种移植物桥接4cm尺神经缺损。A组:自体BMSCs+去细胞同种异体神经支架;B组:自体SCs+去细胞同种异体神经支架;c组:自体BMSCs+PLGA支架导管;D组:去细胞同种异体神经支架;E组:PLGA支架导管;F组:自体神经。通过功能学。神经电生理学及组织学研究评价各自的实验效果。结果A、B、c三种组织工程化神经实验组,术后6个月神经电生理和组织学检查,能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组(F组)相比差异无显著性意义(P>0.05),但分别大于未加细胞的支架组(D、E组),差异有显著意义(P<0.05)。结论用自体源scs或BMSCs作种子细胞与去细胞同种异体神经支架,或自体源BMSCs与PLGA支架导管构建不同的组织工程化周围神经,修复猕猴4cm尺神经缺损均取得较好的效果。

关键词: 组织工程 周围神经, 神经移植, 猕猴

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2006年11月15日

【期刊论文】可降解材料对外周神经的毒性作用研究

刘小林, 朱庆棠, 朱家恺, 程钢, 黎志明, 许扬滨

中华显微外科杂志,2003,26(2):127~129,-0001,():

摘要

目的研究聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖等可降解材料对正常外周神经有无毒性作用,为研制组织工程化神经筛选相容性好的支架材料。方法取l5只SD大鼠,随机分成3组,打开坐骨神经外膜后,分别将聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖植入神经束之间。术后7周取材,观察坐骨神经组织结构的变化以及材料在神经组织内引起的异物反应。结果各组的神经干内均有纤维结缔组织轻度增生,但神经束的形态结构无明显变化;各种材料周围均有纤维假膜形成,假膜内有淋巴细胞和巨噬细胞浸润,而包裹壳聚糖的假膜最厚,细胞浸润最明显。结论聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖对外周神经均无毒性,可作为组织工程化神经的支架材料,但壳聚糖引起的异物反应较聚乳酸和聚羟基乙 酸明显。

关键词: 生物材料, 生物相容性, 外周神经, 组织工程,, 壳聚糖

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2006年11月15日

【期刊论文】聚乳酸微丝在外周神经内的降解性研究

刘小林, 朱庆棠, 朱家恺, 许扬滨, 闫玉华

中华显微外科杂志,2003,20(1):33~35,-0001,():

摘要

目的研究聚乳酸微丝在神经干内的降解特点以及在降解过程中对外周神经的影响,探讨其是否适合作为组织工程化外周神经的支架。方法在20只sD大鼠两侧的坐骨神经内分别植入聚乳酸微丝(实验侧)和Vicryl微丝(对照侧),于术后1、4、8和l2周观察微丝的形态和神经组织结构的变化以及植入部位的组织和细胞反应。结果聚乳酸微丝植入神经干后在表面和内部同时发生崩裂,至12周时已大部分降解;在降解过程中始终伴随着巨噬细胞活跃的吞噬活动;两种微丝植入神经干后均引起类似的轻度异物炎性反应;在聚乳酸微丝的降解过程中,神经束和神经纤维的组织结构没有明显变化。结论聚乳酸微丝在外周神经内的降解时间超过12周;微丝在降解时引起的轻度非特异性炎性反应对神经组织没有不良影响。

关键词: 聚乳酸, 降解, 外周神经, 组织工程

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2006年01月11日

【期刊论文】人间充质干细胞体外扩增及生物学特征的研究

黄绍良, ZHOU Dun-hua, HUANG Shao-liang, WU Yan-feng, WEI Jing, CHEN Ge-yu, LI Yang, Bao Rong

中华儿科杂志,2003,41(8):607-610,-0001,():

摘要

目的 探讨成人骨髓,胎儿骨髓和人脐血3种不同的人类间充质干细胞(MSC)体外扩增及其生物学特性。方法 观察3种来源的MSC的生长、增殖和表面标志的表达,从面评价MSC的纯化、增殖能力及其免役学特性。结果 (1)3种不同来源的人MSC的细胞形态、集落数、集落大小均无关差异;但成人骨髓MSC在集落形成及集落交错融合时间上均早于胎儿骨髓和脐血MSC;(2)3种来源的人MSC传代培养增殖速度无差异,但脐血和胎儿MSC融合后无接触抑制,而成人骨髓MSC存在接触抑制;(3)来源于骨髓单个核细胞(MSC)8×10 6或脐血MSC25×10 6的MSC,经体外扩增3代5代或10代后,细胞数分别为10 7,10 8和010个;(4)MSC易纯化,P2代细胞均为一性为90%,P3代细胞均一性为95%,P5代细胞均一性达到99%;(5)不同来源的MSC表面重要志:CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达均为阳性,其造血细胞表面标志:CD11a、CD14、CD33、CD34、CD28、CD45、CD117表达均为阴性,与移植免疫排斥发生密切相关的表面标志:HLA-DR、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)CD40和CK40L均为阴性。3种不同来源的人MSC表面标志,差异无显著性。(6)两种不同培养体系对人MSC的纯化扩增及生物学特性无影响。结论 (1)不同来源的人MSC生物学特性无明显差异;(2)人MSC在体外易扩增纯化,增殖能力强,符合临床组织工程的需要;(3)人MSC不表达造血细胞及其与移植免疫排斥发生密切相关的表面标志,有可以突破HLA屏障,广泛应用于临床。

关键词: 干细胞, 细胞分裂, 细胞分化, 免疫表型分型, 组织工程

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