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2009年11月08日

【期刊论文】仿生髓核组织工程细胞支架的免疫原性研究

周跃, 李长青

第三军医大学学报,2005,27(9):837~840,-0001,():

摘要

目的探讨自行设计构建髓核组织工程支架材料的免疫原性。方法将75只SD大鼠随机分为3组:正常组、对照组及移植组。将自行设计构建的支架材料植入移植组大鼠皮下,以未植入支架组作为对照。分别于术后1、3、7、14、28、56、84d取支架及周围织,并分离血清。行组织学观察及RT-PCR检测IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10 mRNA表达,ELISA检测血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平。结果支架材料在大鼠体内表现为轻度的炎性反应,逐步为纤维肉芽组织取代。RT-PCR未检测到IFN-γ、IL-2 mRNA表达,IL-4、IL-10 mRINA表达增高,反映支架材料移植后促进T辅助细胞向Th2方向转化,抑制机体炎症发生。同时血清中未检测到抗Ⅱ型胶原抗体表达增高。结论 自行设计的髓核组织工程支架材料无明显免疫原性,可进行深入研究。

关键词: 支架髓核, 组织工程 免疫原性

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2007年09月21日

【期刊论文】诱导大鼠骨髓内皮祖细胞成内皮细胞的体外增殖规律的观察

崔磊, 于海莹, 尹烁, 刘伟, 曹谊林

中华实年外科杂志2004年6月第21卷第6期/Chin J Exp Surg, June 2004. Vol. 21. No. 6,-0001,():

摘要

目的 观察大鼠骨髓骨皮祖细胞(EPCs)体外诱导成内皮细胞的生长增殖规律。方法 密度梯度离心得到Wistar大鼠骨髓单个核细胞;以10μg/L血管内皮细胞生长因子(VEGF)和2μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外诱导,通过细胞形态、免疫荧光法观察内皮细胞表型;原代细胞克隆形成率、细胞计数和流式细胞式检测VEGFR-2、VE-钙黏蛋白(cadherin)阳性表达率观察体外增殖能力与表型。结果 诱导后细胞呈铺路石样形态。免疫荧光法发现诱导细胞表达小鼠VIII因子(vWF)、VEGFR-2、VE-cadherin和CD31。原代克隆形成率为6.66±0.75;细胞随代次增加增殖能力逐渐下降;VEGFR-2和VE-cadherin在P2与P5中的阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论 骨髓EPCs在体外可诱导成为内皮细胞,并可保持相对稳定的诱导阳性率。

关键词: 骨髓, 内皮细胞, 组织工程

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2007年09月21日

【期刊论文】体外诱导大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)成内皮细胞的实验研究

崔磊, 于海莹, 尹烁, 刘伟, 曹谊林

中华创伤骨科杂志2004年10月第6卷第10期/Chin J Orthop Trauma, October 2004. Vol. 6. No. 10,-0001,():

摘要

目的体外诱导大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)成内皮细胞,探索其作为血管组织工程内皮种子细胞的可行性。方法冲洗大鼠骨髓腔,通过密度梯度离心得到单个核细胞;按诱导(M199,20%FBS,VEGF 10ng/mL,bFGF2ng/mL)和未诱导(M199,20%FBS)分组培养骨髓单个核细胞,体外培养至第二代;免疫细胞荧光分别检测诱导组和未诱导组细胞VWF、VEGFR-2、VE-cadherin和PECAM-1的表达;流式细胞仪分别检测骨髓单个核细胞、诱导组细胞和未诱导组细胞VEGFR-2、VE-cadherin和PECAM-1表达率;诱导组细胞接种于胶原凝胶中三维培养,观察血管生成能力。结果诱导组原代细胞呈小梭形,5~7d时出现典型的线样结构,P2、P3细胞逐渐成内皮细胞典型铺路石样结构,未诱导细胞未见这两种典型结构;免疫细胞荧光发现,诱导组细胞有VWF、VEGFR-2、VE-cadherin和PECAM-1表达,未诱导组未见明显表达;流式细胞仪检测显示三种标记(VEGFR-2、VE-cadherin和PECAM-1)在原代时的比例均不到总细胞数5%,经两代培养后,诱导组中阳性细胞率高于35%,未诱导组阳性细胞率明显低于诱导组(p<0.01);三维培养状态下诱导组细胞集落在胶原内有“出芽式”生长。结论本实验建立了一套骨髓EPCs分离、诱导培养和表型检测的方法;以VEGF和bFGF为主要诱导因子的诱导体系,对骨髓FG1H 成内皮细胞的诱导阳性率达35%~40%,经诱导的内皮细胞有希望作为血管组织工程新的种子细胞来源。

关键词: 骨髓, 内皮祖细胞, 内皮细胞, 组织工程

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2006年11月15日

【期刊论文】用去细胞同种异体神经构建猕猴组织工程化神经的实验研究

刘小林, 许扬滨, 胡军, 江长青, 杨光诗, 朱家恺

中华显微外科杂志,2005,28(2):136~139,-0001,():

摘要

目的评价用自体源骨髓问充质干细胞(MSCs)或许旺细胞(SCs)作种子细胞,与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴尺神经4cm缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用4种移植物桥接猕猴4cm尺神经缺损。A组:种植自体MSCs的去细胞同种异体神经;B组:种植自体SCs的去细胞同种异体神经;C组:去细胞同种异体神经;D组:自体神经移植、通过功能学、神经电生理学及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果A、B组术后6个月能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组相比无统计学意义(P>0.05);但A、B、C、D组分别与C组相比,差异有统计学意义(P>0.05)?结论用自体源SCs或MSCs作种子细胞,与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴4cm尺神经缺损,均能取得与自体神经移植相近的效果。

关键词: 组织工程 外周神经, 神经移植物, 化学萃取, 猕猴

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2006年11月15日

【期刊论文】去细胞组织工程化神经支架的制备与形态学研究

刘小林, 朱庆棠, 朱家恺, 赖英荣, 江长青, 杨光诗, 胡军

中华显微外科杂志,2004,27(1):35~38,-0001,():

摘要

目的探讨如何去除人类长段粗大神经中的细胞。为构建人类组织工程化神经提供具有仿生结构的支架方法取4段长10cm、直径6mm人的胫神经,其中3段用3%三硝基甲苯和4%脱氧胆酸钠分别萃取1、2和3次,在萃取神经和未萃取神经的中段取材,行HE染色、砂罗铬花青染色和S-100免疫组化染色,在光镜和电镜下观察神经萃取前后形态学的变化结果用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取后,胫神经内的细胞消失,I纤维性支架结构与未经萃取的神经相仿,电镜下可见萃取后的神经由空的神经基底膜管和管之间的胶原纤维构成。随着萃取次数的增加,神经内残留的S-100蛋白显著减少,但反复萃取后神经的支架结构受破坏。结论用硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取2次可去除人体长段、粗大神经的细咆而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构,可能是制备具有仿生结构的人类组织工程化神经支架较为理想的方法。

关键词: 外周神经, 组织工程 人类, 化学萃取

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2006年11月15日

【期刊论文】猕猴组织工程化周围神经移植物的实验研究

刘小林, 江长青, 胡军, 向剑平, 朱家恺

中华手外科杂志,2005,21(6):372~374,-0001,():

摘要

目的评价利用化学萃取法获得的神经支架制备猕猴组织工程化周围神经移植物修复40尺神经缺损的效果。方法共使用成年猕猴9只,随机取其中的6只,培养自体雪旺细胞,应用已经制备好的去细胞神经为支架材料构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经的40mm缺损。实验分实验组,空白组,正常对照组3组。术后5个月通过形态学,肌电检测和免疫组织化学方法观察。结果3组均未发现猕猴双手有糜烂或溃疡形成,猕猴小鱼际肌群的饱满度和弹性于术前无明显差别。实验组与正常对照组间小鱼际肌群的运动动作电位潜伏期.最大振幅及再生神经纤维的数目差异均无统计学意义(P>0.05)。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论用自体源雪旺细胞微注入去细胞同种异体神经支架构建的组织工程化神经移植物修复猕猴40ram的尺神经缺损,可取得与自体神经移植相似的效果。

关键词: 周围神经, 组织工程 猴, 化学萃取外

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2006年11月15日

【期刊论文】猕猴骨髓问充质干细胞与去细胞神经优化人工神经的体外构建

刘小林, 杨光诗, 许扬滨, 朱家恺, 朱庆棠

中华显微外科杂志,2005,28(1):35~38,-0001,():

摘要

目的探讨猕猴骨髓间充质干细胞作为种子细胞与去细胞同种异体神经作为支架,体外构建人工神经的研究。方法采用密度梯度离心的方法分离并培养猕猴骨髓间充质干细胞,利用相差显微镜观察细胞生长情况并描绘其生长曲线;取猕猴3段4cm的周围神经,其中2段用4%triton-X-100及4%脱氧胆酸钠液分别萃取1次和2次,在新鲜神经和萃取神经中段取材,组织学检测及电镜学观察萃取前后的形态学变化;采用显微注射的方法把猕猴骨髓间充质干细胞种植到萃取两次的异体神经内,HE染色观察细胞在支架内的生长情况。结果猕猴骨髓间充质干细胞自我增殖能力强;萃取1次的异体神经细胞及髓鞘结构仍部分存留,而萃取2次的其细胞及髓鞘结构消失;HE染色可见细胞在萃取2次的异体神经内可爬行生长。结论猕猴骨髓间充质干细胞与化学萃取的去细胞同种异体神经适合体外构建人工神经。

关键词: 骨髓间充质干细胞, 组织工程 去细胞神经, 猕猴

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2006年11月15日

【期刊论文】构建猕猴组织工程化周围神经的实验研究

刘小林, 胡军, 朱庆棠, 许扬滨, 朱家恺

中华创伤骨科杂志,2005,7(12):1152~1156,-0001,():

摘要

目的评价组织工程化周围神经修复猕猴4cm尺神经缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用6种移植物桥接4cm尺神经缺损。A组:自体BMSCs+去细胞同种异体神经支架;B组:自体SCs+去细胞同种异体神经支架;c组:自体BMSCs+PLGA支架导管;D组:去细胞同种异体神经支架;E组:PLGA支架导管;F组:自体神经。通过功能学。神经电生理学及组织学研究评价各自的实验效果。结果A、B、c三种组织工程化神经实验组,术后6个月神经电生理和组织学检查,能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组(F组)相比差异无显著性意义(P>0.05),但分别大于未加细胞的支架组(D、E组),差异有显著意义(P<0.05)。结论用自体源scs或BMSCs作种子细胞与去细胞同种异体神经支架,或自体源BMSCs与PLGA支架导管构建不同的组织工程化周围神经,修复猕猴4cm尺神经缺损均取得较好的效果。

关键词: 组织工程 周围神经, 神经移植, 猕猴

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2006年11月15日

【期刊论文】可降解材料对外周神经的毒性作用研究

刘小林, 朱庆棠, 朱家恺, 程钢, 黎志明, 许扬滨

中华显微外科杂志,2003,26(2):127~129,-0001,():

摘要

目的研究聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖等可降解材料对正常外周神经有无毒性作用,为研制组织工程化神经筛选相容性好的支架材料。方法取l5只SD大鼠,随机分成3组,打开坐骨神经外膜后,分别将聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖植入神经束之间。术后7周取材,观察坐骨神经组织结构的变化以及材料在神经组织内引起的异物反应。结果各组的神经干内均有纤维结缔组织轻度增生,但神经束的形态结构无明显变化;各种材料周围均有纤维假膜形成,假膜内有淋巴细胞和巨噬细胞浸润,而包裹壳聚糖的假膜最厚,细胞浸润最明显。结论聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖对外周神经均无毒性,可作为组织工程化神经的支架材料,但壳聚糖引起的异物反应较聚乳酸和聚羟基乙 酸明显。

关键词: 生物材料, 生物相容性, 外周神经, 组织工程,, 壳聚糖

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2006年11月15日

【期刊论文】聚乳酸微丝在外周神经内的降解性研究

刘小林, 朱庆棠, 朱家恺, 许扬滨, 闫玉华

中华显微外科杂志,2003,20(1):33~35,-0001,():

摘要

目的研究聚乳酸微丝在神经干内的降解特点以及在降解过程中对外周神经的影响,探讨其是否适合作为组织工程化外周神经的支架。方法在20只sD大鼠两侧的坐骨神经内分别植入聚乳酸微丝(实验侧)和Vicryl微丝(对照侧),于术后1、4、8和l2周观察微丝的形态和神经组织结构的变化以及植入部位的组织和细胞反应。结果聚乳酸微丝植入神经干后在表面和内部同时发生崩裂,至12周时已大部分降解;在降解过程中始终伴随着巨噬细胞活跃的吞噬活动;两种微丝植入神经干后均引起类似的轻度异物炎性反应;在聚乳酸微丝的降解过程中,神经束和神经纤维的组织结构没有明显变化。结论聚乳酸微丝在外周神经内的降解时间超过12周;微丝在降解时引起的轻度非特异性炎性反应对神经组织没有不良影响。

关键词: 聚乳酸, 降解, 外周神经, 组织工程

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2005年08月15日

【期刊论文】管状膨体聚四氟乙烯用于组织工程支架材料的动物实验研究

李健宁, 张洁, 李东

中国美容医学,2004,13(6):650~651,-0001,():

摘要

目的:研究膨体聚四氟乙烯(ePTFE)植入动物体内后与机体的关系。方法:管状膨体聚四氟乙烯两端闭合,内充DMEM培养液,埋入家兔皮下,观察宿主生命情况,于术后1、2、4、6周取出标本,行大体及光镜下观察。结果:家兔在植入膨体聚四氟乙烯材料及DMEM培养液后存活情况良好,DMEM培养液在1周时即已完全无色透明;4周时膨体聚四氟乙烯与周围组织有粘连,6周时粘连紧密;光镜下观察,各时间点材料间隙均可见着色,1周时可见少量淋巴细胞浸润,无血管及组织细胞。材料内壁未见细胞附着。结论:植入膨体聚四氟乙烯材料及少量DMEM培养液对宿主动物存活无影响;管内外液体可相互交通,管状膨体聚四氟乙烯可作为组织工程化尿道的支架材料

关键词: ePTFE, 组织工程 支架材料

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2005年08月15日

【期刊论文】膨体聚四氟乙烯用于组织工程支架材料的实验研究

李健宁, 张洁, 李东

中国美容医学,2003,15(5):456~458,-0001,():

摘要

目的:研究膨体聚四氟乙烯材料作为组织工程用细胞外支架的可能性。方法:将进口膨体聚四氟乙烯人工血管植入动物体内及与动物膀胱粘膜上皮细胞在体外共培养,组织学观察机体对材料的反应及联合培养物的情况,并在扫描电镜下观察联合培养物内表面的情况。结果:人工血管植入体内后,3天组织液即可渗透管壁,6天炎细胞可穿过管壁;可见膀胱粘膜上皮细胞在人工血管内壁生长。结论:膨体聚四氟乙烯在表面处理后可以作为组织工程细胞外支架材料。

关键词: 膨体聚四氟乙烯, 组织工程 支架材料

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2005年01月28日

【期刊论文】雪旺细胞种于医用组织引导再生胶原膜构建自体人工神经的实验研究

陈峥嵘, 程飚

中华手外科杂志,2001,17(3):176-178,-0001,():

摘要

目的 设计并构建一种新型的神经引导导管。方法 将兔雪旺细胞种到用成粘蛋白多孔医用组织引导的再生胶原膜支架培养2周后,用倒置显微镜、扫描电镜观察雪旺细胞吸附、生长迁移情况;以雪旺细胞胶原膜管的形式植入体内,观察它诱导神经再生的能力。结果 成年兔雪旺细胞在医用组织引导再生胶原膜上生长良好,并均匀分布于支架表面,且基质分泌旺盛。体内模型发现神经已通过移植物长入远端,胶原膜已吸收。结论 雪旺细胞可以在多聚医用组织引导再生胶原膜上得到扩增,种有雪旺细胞的医用组织引导再生胶原膜导管可以形成一个诱导神经轴突再生的微环境,形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性,为组织工程方法修复长段神经缺损提供了研究基础。

关键词: 许旺氏细胞, 细胞培养, 组织工程 神经,, 人工

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