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2006年07月07日

【期刊论文】表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839对鼻咽癌细胞系的作用

管忠震, 王树森, 姜文奇, 林桐榆, 张力

《癌症》,2004,23(5):540-544,-0001,():

摘要

背景与目的:ZD1839是一种罟琳类化合物,它是一种口服的选择性的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,已被美国食品药品管理局批准用于治疗晚期非小细胞肺14。鼻ON是一种存在表皮生长因子受体表达的上皮源性的恶性肿瘤,ZD1839对其作用如何还末见有报道。本实验通过休外研究初步探讨ZD1839在鼻咽癌治疗中的可能价位。方法:以人鼻咽癌细胞系CNEI,CNE2,SUNE1作为研究对象采用NVIT法检测ZD1839对这些细胞株的抑制作用,同时检测LD1839-7顺铂或5-氟脉嗜pit(5-FU)联合应用对CNE2的作用情况.Rorgi法分析联合用药效果,并用流式细胞仪侧定细胞周期分布和研亡比率。结果:ZD1839能够抑制CNEI,CNE2,SUNEI细胞的增殖,并且这种作用呈剂址依赖性,ZD1839抑制CNEI,CNE2,SUNEI细胞增m的IC。值分别是39wnni/L,5.6w-I/和5.5p.mu111-ZD1839能增强顺铂及5-FU;抗CNE2作用Rorgi修正公式所得Q值分别是L19-0.02和1.1210.10,ZD1839浓度为。1.95,3_9,7.9,15.6,31.25;-1/1时,CNE2细胞G:/G期的比值分别是(46.8±1.7)%,(48.8±1.6)%,(51.3±1.3)%.(54.0±11.3)%(61.5±12.2)00、(71-2±11.4)%,S期的比位分别是(375±1.3)%、35.6)%、(3.8±2.1)%、(34,3±2.7)90、(27.2±2.9)%(27.6±2.4)%,G2/M期的比值分别是(15.7±0.4)%,(15.3±0.1)%,(169±0,9)%、(11.7±4.4)%、(11.3±0.7)%、(1.13±0.8)%。201839浓度为0,1.95,3.9,7.8,15.6,31.25,62.5SmoVl.1付CNE2细胞的凋亡比串分别为(1.6±0,3)%、G.7±0.3)%、(2.3±0.4)%、(13±0.4)k、(3.9±0.8)%、(8.0±l。l)%和(14.3±2.3)%。结论:ZD1839能够抑制鼻咽癌细胞系的增殖,并且能够增强顺铂及5-FU对鼻咽癌细胞系的抑制作用,ZD1839能够诱什CNF2细胞停滞于G期较高浓度的ZD1839可能诱导CN82细胞凋亡。

关键词: 鼻咽肿瘤, 表皮生长因子受体, ZD1839, 细胞增殖, 细胞周期

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2006年04月14日

【期刊论文】人脑胶质瘤细胞株MGR2放射抗拒性的诱导

陈忠平, CHENG Jin-Jian, HU Zhen, XIA Yun-Fei, CHEN Zhong Ping

《癌症》2006,25(1):45-50,-0001,():

摘要

背景与目的:放射治疗是脑胶质瘤重要辅助治疗手段之一,但脑胶质瘤放射敏感性存在很大差异。本研究通过对放射相对敏感的人脑胶质瘤细胞株进行放射诱导得到具有稳定放射抗拒性的后代细胞,从而为研究胶质瘤放射抗拒机制提供具有可比性的成对细胞。方法:选取对x射线相对敏感的人脑胶质瘤细胞株MGR2 L2 Gy照射下的存活分数(survival fraction of 2 Gv SF)为0.180+0.05进行间歇性大剂量x射线照射(每次2Gv,共3次,而后每次5Gy,共2次),每次照射后的细胞继续培养,待5~8周存活的细胞状态稳定后进行下一次照射。整个照射及培养过程历时11个月.最终得到的后代细胞命名为MGR2R(MGR2radlation inductlon)。采用MTT法检测MGR2和MGR2R细胞生长的倍增时间,平板集落形成法和线性二次模型(L-0模型)拟合MGR2和MGR2R细胞的存活曲线并计算相关放射生物学参数和SF2值。血清饥饿细胞周期同步化方法检测MGR2~MGR2R的细胞周期变化。结果:MGR2的倍增时间;3.6天.MGR2R的生长速度减慢.倍增时间为4.0天。MGR2和MGR2R的d值分别为0.447和0,089(t=4.524,P=0.011)。B值分别,0.177T和0.141(t=1.562,P0.193),SB值,0.208和0.478(t=6.062,P=0.040).MGR2R的放射抗拒性增加。细胞周期同步化后MGR2的细胞周期分布为G.期54.8%,S期30.9%,G期14.3%,去同步化后G。期35.9%,S期5l.2%,G2期12.8%,MGR2R正常生长时存在G:期阻滞(81.7%),同步化后G1期55.7%,S期27.8%,G2期16.6%,去同步化后分别为G.期56.4%,S期26.7%,岛期16.9%,MGR2R存在G1期阻滞,去同步化后两者细胞周期改变不同。结论:人脑胶质瘤细胞株MGR2经间歇性大剂量x射线多次照射后得到的后代细胞MGR2R具有稳定放射抗拒性。MGR2R生长速度减慢,倍增时间延长,同时存在G1和G2期阻滞,可能与其放射抗拒性的产生有关。

关键词: 脑肿瘤, 胶质细胞瘤, 放射抗拒性, 细胞周期

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2005年03月16日

【期刊论文】永生化人晶状体上皮细胞细胞周期调控相关基因表达的检测

曾骏文, 吴明星, 李绍珍, 高劲松, 刘奕志

中华眼科杂志,2002,38(6):367-372,-0001,():

摘要

目的 探讨人类晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)周期调控中的细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白激酶(cyclin dependent kinase 2,CDK2)和细胞周期蛋白激酶抑制因子(cyclindependent2kinase inhibitor,CKI) p21基因的表达,阐明HLEC增殖和晶状体后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)的分子机制。方法 体外培养永生化HLEC系HLE-B3,用二步过量胸苷阻断法进行细胞周期同步化;流式细胞仪检测细胞周期;收集不同时相的细胞提取总RNA。用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测细胞周期蛋白E、CDK2和p21的mRNA表达;分别用免疫组织化学染色和Western blot法检测细胞周期蛋白E和CDK2及p21的蛋白表达。结果 流式细胞仪检测:HLE-B3细胞周期处于G1期,占33.5%;S期,占46.1%;G2期,占20.4%;处于S期及G2期细胞的比例约占总数的66.5%。RT-PCR检测:可见不同周期时相的HLE-B3细胞(细胞周期蛋白E和CDK2)mRNA的表达,但在不同步化的细胞时相中未检测出细胞周期蛋白E的表达。而在同步化的S期细胞中有少许p21mRNA表达。免疫组织化学染色未检测出细胞周期蛋白E阳性细胞,仅可检测出少部分p21阳性细胞。Western blot法检测结果:CDK2阳性表达以S期细胞明显,G1期和G2期略低于S期表达。不同步化细胞也有CDK2的表达。提示细胞周期蛋白E、CDK2与p21的mRNA蛋白表达不平衡。结论体外培养HLE-B3细胞周期过程中存在细胞周期蛋白E、CDK2和p21的表达,且存在表达不平衡。细胞周期蛋白E、CDK和CKI间的表达不平衡有可能是其体外增殖细胞周期分子机制之一。

关键词: 晶体, 上皮细胞, 细胞培养, 细胞周期蛋白E, 细胞周期蛋白质依赖激酶类

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2005年03月16日

【期刊论文】外源性细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因对人晶状体上皮细胞周期的影响

曾骏文, 吴明星, 李绍珍, 刘奕志

中华眼科杂志,2003,39(4):209-214,-0001,():

摘要

目的 研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因转染对人晶状体上皮细胞(lensepithelial cells,LEC)周期调控的影响,在基因水平探讨防治后发性白内障的可能性。方法 构建含人p21基因真核表达的载体质粒pcDNA3/p21,采用基因转染技术将质粒DNA转染至永生性人LEC系HLE2B3,使用流式细胞仪观察细胞生长和周期的变化,并采用逆转录聚合酶链式反应方法检测p21mRNA的表达;分别采用免疫组化和免疫印迹(western blotting,WB)方法检测p21蛋白的表达。结果 体外构建的载体质粒pcDNA3/p21经酶切鉴定含有人p21基因全长cDNA片段。基因转染后细胞HLE-B3,经传代培养,48h后出现缓慢生长且部分细胞漂浮死亡的现象,G1期细胞明显增多。与对照细胞比较,转染后细胞的p21mRNA表达明显增多;p21蛋白表达明显增强,在经筛选的阳性克隆细胞中WB方法可检测到相对分子质量为21000的阳性蛋白带。结论 外源性p21基因可在人LEC系HLE2B3中过度表达,并对细胞周期调控产生抑制作用。基因转染抑制LEC增殖可能成为防治后发性白内障的新途径。

关键词: 细胞周期 细胞周期蛋白类, 转染, 上皮细胞, 晶体

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