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2006年11月22日

【期刊论文】成纤维细胞体外培养、冻存及复苏的实验研究

蔡景龙, 李惠斌, 潘博, 刘振中, 安纲

中国美容医学,2005,14(4):394~397,-0001,():

摘要

目的:探讨正常皮肤和瘢痕疙瘩组织成纤维细胞在体外培养情况下其生物学特性的差异,以及细胞冻存和复苏的方法及其应用价值。方法:对8例正常皮肤和8例瘢痕疙瘩组织标本分别进行体外成纤维细胞的原代培养、传代培养,观察培养的成纤维细胞形态,并作生长曲线比较细胞增殖情况。选取处于对数生长期的培养细胞梯度降温后置入液氮(-196℃)中保存4-6个月,进行细胞复苏培养,以2%台盼蓝确定细胞活力,并观察复苏的成纤维细胞形态不状况。结果:体外培养的正常皮肤和瘢痕疙瘩组织成纤维细胞形态和生长曲线基本相同,但瘢痕疙瘩原代成纤维细胞萌出生长较正常皮肤快,生长融合后成纤维细胞排列紊乱,极性消失,有明显的交叉重叠现象;体外培养的成纤维细胞,经冷冻、保存4-6个月后,复苏超过80%,细胞形态无明显示改变。结论:体外培养的正常皮肤和瘢痕疙瘩组织成纤维细胞形态与生长特性基本相同。瘢痕疙瘩成纤维细胞可成功冻存和复苏。

关键词: 瘢痕疙瘩, 成纤维细胞, 细胞培养 冻存, 复苏

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2007年09月21日

【期刊论文】脂肪干细胞HLA分子表达与体外抑制淋巴细胞增殖的实验研究

崔磊, 尹烁, 杨平, 刘波, 张英, 刘伟, 曹谊林

中华医学杂志2005年7月20日第85卷第27期/Natl Med J China , July20, 2005. Vol. 85. No. 27,-0001,():

摘要

目的 研究脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)表面免疫分子的表达以及体外调节淋巴细胞反应的功能,以期为组织工程提供同种异体种子细胞来源。方法 从临床脂肪抽吸术丢弃脂肪组织中分离获取脂肪干细胞( 共3 例),体外培养至第2 代,流式细胞仪检测免疫分子HLAI、HLAII 的表达。1 × 105 个/ 孔ADSC 细胞刺激异体淋巴细胞,观察细胞增殖情况。以植物血凝素(PHA,2 μg / ml)刺激淋巴细胞后,分别以(1 × 102 、1 × 103、1 × 104、1 × 105 )细胞/ 孔数量的异体脂肪干细胞加入反应体系中,观察淋巴细胞增殖情况;另一组在刺激同时加入白介素-2( IL-2,0. 5 ng /ml),检测脂肪干细胞抑制作用的逆转。分别以1 × 102-5 细胞/ 孔数量的“ 第三者”脂肪干细胞或经IFN-γ 作用后脂肪干细胞加入混合双向淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。结果脂肪干细胞表达HLA I 类分子,但未检测到HLAII 类分子阳性表达。人IFN-γ 刺激48 h 后,HLA I 表达未见明显增高,HLAII 类分子表达明显增高。异体或经IFN-γ 作用的脂肪干细胞均未能刺激淋巴细胞体外增殖。脂肪干细胞可明显抑制PHA 刺激的淋巴细胞增殖,IL-2 可逆转脂肪干细胞的抑制作用。脂肪干细胞可明显抑制双相混合淋巴细胞反应,抑制作用呈脂肪干细胞细胞数量依赖性;经IFN-γ 作用后抑制作用未见明显减弱。结论 ADSC 可在体外抑制淋巴细胞增殖反应,具有一定的调节淋巴细胞反应的能力,有可能成为组织工程或细胞治疗中同种异体细胞来源。

关键词: 干细胞;HLA 抗原;淋巴细胞培养试验, 混合

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2006年11月15日

【期刊论文】猕猴骨髓基质干细胞体外培养及其生物学特性的研究

刘小林, 胡军, 朱家恺, 邓宇斌, 向剑平, 王建云, 邹一丰

中华显微外科杂志,2004,27(2):113~117,-0001,():

摘要

目的通过体外分离、培养猕猴骨髓基质干细胞(BMSCs),研究其生物学特性、表面标志和遗传学性能,为BMSCs用作组织工程化神经种子细胞提供研究基础。方法通过密度梯度离心分离猕猴BMSCs,体外培养、扩增,用倒置相差显微镜进行形态学的观察,通过绘制生长曲线、计算克隆形成率来研究细胞的活力和增殖能力,流式细胞仪检测表面标志,核型分析反应遗传学性能。结果密度梯度离心的方法能获得较纯的猕猴BMSCs,第7代以前的细胞有较强的活力和增殖能力,具有与人的BMSCs相似的形态和表面标志,体外培养第10代细胞仍稳定为二倍体核型。结论用本实验方法能较容易地获得大量的猕猴BMSCs,具有与人的BMSCs相似的形状和表面标志,第3-6代的细胞可满足以猕猴为动物模型的组织工程化神经种子细胞的研究要求。

关键词: 猕猴, 骨髓基质干细胞, 细胞培养

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2005年01月28日

【期刊论文】雪旺细胞种于医用组织引导再生胶原膜构建自体人工神经的实验研究

陈峥嵘, 程飚

中华手外科杂志,2001,17(3):176-178,-0001,():

摘要

目的 设计并构建一种新型的神经引导导管。方法 将兔雪旺细胞种到用成粘蛋白多孔医用组织引导的再生胶原膜支架培养2周后,用倒置显微镜、扫描电镜观察雪旺细胞吸附、生长迁移情况;以雪旺细胞胶原膜管的形式植入体内,观察它诱导神经再生的能力。结果 成年兔雪旺细胞在医用组织引导再生胶原膜上生长良好,并均匀分布于支架表面,且基质分泌旺盛。体内模型发现神经已通过移植物长入远端,胶原膜已吸收。结论 雪旺细胞可以在多聚医用组织引导再生胶原膜上得到扩增,种有雪旺细胞的医用组织引导再生胶原膜导管可以形成一个诱导神经轴突再生的微环境,形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性,为组织工程方法修复长段神经缺损提供了研究基础。

关键词: 许旺氏细胞, 细胞培养 组织工程, 神经,, 人工

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2005年01月25日

【期刊论文】大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究

冷希圣, 冷希圣*, 翁山耕, 李涛, 魏玉华, 彭吉润, 杜如昱

解剖学报,2003,34(3): 269~274,-0001,():

摘要

目的 建立并鉴定肝星状细胞(HSC)细胞系。方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法分离培养大鼠的HSC;通过体外长期传代培养后建立1株细胞系,应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测定、细胞生长曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT-PCR检测、聚硅酮膜培养法观测HSC的收缩等方法对其生物学特性进行研究。结果 HSC细胞系已传了78代,保持着肌成纤维样细胞的形态学特点。细胞倍增时间为3615h;细胞的染色体众数42条,为正常大鼠体细胞的染色体表型;双层软琼脂培养未见细胞克隆形成;免疫细胞化学检测表明,细胞系表达Desmin、GFAP、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、iNOS、ICAM-1、TGF-α;RT-PCR检测表明,该细胞系表达TGF-β、ICAM-1;聚硅酮膜培养法显示,HSC 细胞系能在ET-1作用下产生收缩反应。结论 HSC细胞系符合建系标准,是1株新建立的大鼠肝星状细胞系,命名为rHSC-99,可作为肝硬化、门静脉高压症实验研究的模型。

关键词: 大鼠肝星状细胞系, 细胞系, 细胞培养 大鼠

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