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2011年05月03日

【期刊论文】用微核试验评价生物羊膜遗传毒性的研究

谢克勤, 孙立魁, 施燕平, 黄经春

《中国医疗器械信息》,2008,14(11):31~33,-0001,():

摘要

目的:用微核试验评价生物羊膜引起遗传毒性的可能性。方法参照《GB/T16886.3-1997/ISO10993-3:1992》的方法及指导原则进行试验。结果:在研究过程中所有动物临床表现和体重变化都是正常的,生物羊膜浸提液与阴性对照嗜多染红细胞(PCEs)/红细胞(RBC)总数无显著性差异(P>0.05),没有出现遗传毒性的迹象。结论:生物羊膜用微核试验评价不会引起遗传毒性。

关键词: 微核试验, 遗传毒性, 生物羊膜 生物学评价

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2010年12月16日

【期刊论文】羊膜对体外培养的兔视网膜Mnller细胞表皮生长因子受体表达的影响

马景学, 郝玉华

,-0001,():

摘要

目的 研究羊膜对兔视网膜Mnller细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响及其机制。方法 取出生15 d新西兰白兔视网膜Miiller细胞进行原代培养及传代, 采用神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100进行细胞鉴定。0.25%胰蛋自酶、0.05%EDTA酶消化取第3代Mnller细胞, 实验组加0.5mL羊膜匀浆上清液继续培养12 h, 采用免疫组织化学法检测羊膜诱导和非诱导条件下兔视网膜Mnller细胞EGFR表达的变化并进行分析。 结果 培养的兔视网膜Mtiller细胞GFAP和s。100表达阳性, 透射电镜检查细胞质内可见8~10nm的中间丝。未经羊膜诱导的视网膜Mnller细胞EGFR有少量表达, 经羊膜诱导12h后, EGFR表达明显增多, 2组灰度值分别为571588.80-67.862。68和1000 352.00-98386.22, 差异有统计学意义(t=4.035, P<0.01)。结论 经羊膜诱导后可促进培养的兔视网膜Mnller细胞EGFR的表达。

关键词: 羊膜 视网膜胶质细胞, 表皮生长因子受体

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2010年12月16日

【期刊论文】羊膜匀浆治疗实验性孑L源性视网膜脱离

马景学, 郝玉华, 修贺明

中华眼底病杂志,2009,25(1):47~50,-0001,():

摘要

目的 观察和探讨羊膜匀浆在封闭视网膜裂孔中的作用及其机制。方法 40只新西兰白兔随机分为A、B、C、D 4组,其中A、C为治疗组,B、D为对照组,每组各10只兔。每只兔随机取1只眼进行实验。经扁平部玻璃体切割,视网膜造孔,人为造成视网膜脱离,气液交换。治疗组裂孔表面滴加0.1ml羊膜匀浆,而对照组滴加0.1 ml磷酸盐缓冲液(PBS);术毕视网膜复位,20%SFs眼内填充。A、B组于手术后14 d处死动物,C、D组于手术后28 d处死动物,进行光学显微镜、电子显微镜和免疫组织化学染色检查。结果 手术后14 d,A组视网膜复位6只眼,占60%,B组视网膜复位2只眼,占20%(P=0.021)。手术后28 d,C组视网膜复位8只眼,占80%,D组视网膜复位3只眼,占30%(P=0.046)。各组之间视网膜复位的比例比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组手术后出现轻度前节炎症反应,经局部应用糖皮质激素后炎症于3~5 d消退。光学显微镜检查结果显示,治疗组应用羊膜后在视网膜裂孔边缘有多层成纤维细胞样细胞增牛,与其下脉络膜和视网膜色素上皮细胞发生粘连。对照组视网膜裂孔边缘细胞增生明显减少,视网膜不能和脉络膜形成粘连。电子显微镜检查与光学显微镜检查结果一致。成纤维细胞样细胞免疫组织化学染色显示胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性,提示裂孑L边缘增生细胞主要是视网膜胶质细胞。 结论 羊膜匀浆有助于封闭视网膜裂孔,通过刺激裂孔边缘视网膜胶质细胞增生,促进视网膜脱离复位。

关键词: 视网膜脱离/, 治疗, 视网膜脱离/, 外科学, 羊膜 动物实验

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2009年11月09日

【期刊论文】羊膜负载骨髓间充质干细胞与表皮细胞对放创性皮肤损伤促愈合研究

粟永萍, 闫国和, 艾国平, 屈纪富, 冉新泽, 程天民, 庞学利, 肖红

中国修复重建外科杂志,2004,29(6):497~501,-0001,():

摘要

肤缺损圆形创面(3.67cm)各3个,共48个创面。将经处理的人羊膜(human amniotic mambrane, HAM)分别负载自体骨髓间充质干细胞(mesenchvmal stem cells,MSCs)和表皮细胞,移植到其左侧24个创面作为实验组(A组);以单纯无种植细胞的HAM敷盖其右侧前16个创面(B组);以单纯油纱布敷盖其右侧后8个创面(C组)。B、C作为对照组。观察移植后1~3周内各组创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况,并进行创面组织HE染色及vWF免疫组织化学检测。用图像分析法测算各组各时间点创面平均面积(CIT12),并计算其愈合百分率。结果C组于伤后99--23天愈合,B组于伤后19~21天愈合;A组于伤后15~17天愈合,较B、C组分别提前6~7天和5~6天,愈合质量好。移植15—17天,A组与B、C组创面平均残留面积及愈合面积百分率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。A组创面的新生上皮已完全覆盖整个创面,肉芽组织生长旺盛,肉芽组织中vWF、成纤维细胞相毛细血管含量丰富,可见胶原沉积;B、C组创面仍见许多炎性细胞浸润,肉芽组织中vWF、成纤维细胞和毛细血管含量少,胶原沉积不明显。 结论HAM负载自体MSCs和表皮细胞植入对放创性全厚皮肤缺损创面有较好的促愈合作用,愈合质量较高。

关键词: 骨髓间充质干细胞 表皮细胞 人羊膜 放创性皮肤损伤 创面愈合

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2009年04月23日

【期刊论文】羊膜在小梁切除术中应用的临床研究

刘杏, 王岚, 黄祥坤

中山大学学报(医学科学版),2004,25(5):462~466,-0001,():

摘要

【目的】探讨羊膜在青光眼滤过手术中应用的降压效果及安全性。【方法】将各类型青光眼38例44只眼分为3组,A组为巩膜瓣下羊膜移植术(AMT)组(20只眼);B组为巩膜瓣下联合应用丝裂霉素组(12只眼);C组为对照组(12只眼),行单纯小梁切除术。观察手术前、术后第1、2、3、7、14、21天、第1、3、6个月各组的视力、眼压、滤过泡类型和充血程度、前房深度、眼底情况及并发症,用前房激光蛋白细胞检测仪(LFCM)测量术前和术后第1、3、7天和1个月的前房蛋白含量,进行统计学分析。【结果】3组术后平均眼压均控制在21mmHg以下,术后7~14d眼压最低:3组各观察点之间比较P值均大于0.05,差异无显著性。44只眼中40只眼为Ⅱ型滤过泡,4只眼为包裹性囊状滤过泡。羊膜组滤过泡术后2d较扁平,第3天起隆起呈弥散的Ⅱ型泡;羊膜组早期滤过泡充血较轻,与其它两组比较差异有显著性(P<0.05)。羊膜组前房蛋白含量术前、术后第1天、第30天均高于其他两组,差异有显著性(P<0.05)。【结论】羊膜运用于青光眼滤过手术中可以有效地降低眼压,减轻炎症反应,并发症较少。羊膜移植术后前房房水蛋白含量增加,可能与羊膜本身蛋白溶解有关。

关键词: 青光眼, 小梁切除术, 羊膜移植术

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2009年04月20日

【期刊论文】羊膜移植术和羊膜联合角膜缘上皮移植术治疗复杂性翼状胬肉

席兴华, 姜德咏, 唐罗生, 秦波

,-0001,():

摘要

目的: 比较羊膜移植术与羊膜联合自体角膜缘上皮移植术治疗各种复杂性翼状胬肉的疗效。方法: 对42例(48眼)复发性翼状胬肉和假性胬肉并睑球粘连患者分别行羊膜移植术(20例,22眼)和羊膜联合自体角膜缘上皮移植术(22例26眼);术后随访6~12(平均8.5)个月。结果: 术后2周,羊膜联合自体角膜缘上皮移植术组,除2眼外角膜创面完全上皮化,达到无瘢痕性愈和;而羊膜移植术组有8眼角膜创面未完全修复(P<0.05)。随访1年,羊膜联合自体角膜缘上皮移植术组未见无排斥反应发生和胬肉复发,而羊膜移植术组有3眼出现不同程度胬肉复发。结论: 羊膜联合自体角膜缘上皮移植术较单纯羊膜移植术治疗复发性或假性翼状胬肉,能更有效地抑制结膜下纤维增生、重建角膜缘屏障、促进角膜创面修复,从而提高治疗效果,降低复发率。

关键词: 翼状胬肉, 羊膜移植, 角膜缘上皮移植

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2009年04月20日

【期刊论文】板层角膜联合羊膜移植治疗早期严重角结膜碱性化学伤

席兴华, 曾燕娜, 唐罗生, 秦波, 姜德咏

中南大学学报(医学版),2004,29(6):704~706,-0001,():

摘要

目的:观察板层角膜联合新鲜羊膜移植治疗各种早期严重角、结膜碱性化学伤的临床疗效。方法:对23例(23眼)因各种碱性化学物质所致,Roper-Hall分级Ⅱ度以上,病程在2周内的早期严重角、结膜化学伤患者,施行板层角膜联合羊膜移植术,并结合皮质激素等治疗,术后随访6~12(平均8.3)月。结果:23眼中角膜植片透明7眼,半透明10眼,混浊6眼;有2眼术后发生排斥反应,经1%环孢素A和皮质激素治疗后角膜水肿消退,但植片混浊。术后视力≥0.3者3眼,0.25~0.1者5眼,0.01~0.1者9眼,指数以下者6眼。无1眼因角膜溶解穿孔而摘除眼球者。结论:对严重角、结膜碱性化学伤眼早期进行板层角膜联合羊膜移植,可有效地清除坏死的角、结膜组织和炎症细胞,减少和防止并发症发生,改善患者的预后。

关键词: 角膜, 羊膜 移植, 眼化学伤

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2007年11月26日

【期刊论文】神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达

陈东, Lou

中国临床康复2006-07-10出版第10卷第25期/Chinese Journal of Clinical Rehabilitation July 10, 2006, Vol. 10, No. 25,-0001,():

摘要

背景:有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。 目的:检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达? 设计:重复测量设计。 单位:吉林大学第二临床医学院,吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。 材料:实验于2004-10/2005-10在吉林大学基础学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12~14d的Wistar大鼠1只,将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、免抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体(武汉博士德公司);大鼠抗大鼠Musashi抗体(日本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠)。 方法:取孕12~14d的Wistar大鼠胎盘,剥离羊膜获得上皮细胞,在37℃、体积分数为0.05的CO2环境下,胰蛋白酶消化5min,加入DMEM/F12培养液,以5×109L-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后,细胞以1×108L-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中,用质量浓度为40g/L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。 主要观察指标:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况。 结果:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察:羊膜上皮细胞培养24h后,细胞扁平呈成纤维细胞样。3~5d后,胞体饱满,核大而圆,核仁清晰,突起发达,并互相连成网状。②神经组织细胞培养特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况:培养4d后免疫细胞化学染色结果可见,羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇乙酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。 结论:羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性,可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。

关键词: 羊膜 上皮细胞, 免疫细胞化学, 染色法, 组织细胞, 大鼠

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2007年11月26日

【期刊论文】羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病大鼠的实验研究

陈东, 朱梅, 孟晓婷, 陈爱军

中国老年学杂志2006年2月第26卷,-0001,():

摘要

目的 探讨羊膜上皮细胞纹状内移植对帕金森病(PD)大鼠的治疗作用。方法 采用RT-PCR方法检测人羊膜上皮细胞株FL表达脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子-3(NT-3)mRNA;Hoechest33342标记后微移植方法将其移入PD大鼠模型纹状体内,免疫荧光技术检测移植细胞表达BDNF、NT-3状况。结果 羊膜上皮细胞能够表达BDNF、NT-3,植入纹状体内能够存活,并在第2周内明显改善PD大鼠的行为学症状。结论 羊膜上皮细胞可作为表达神经营养因子治疗PD的移植细胞。

关键词: 细胞移植, 神经营养因子, 帕金森病, 羊膜上皮细胞

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2007年11月26日

【期刊论文】羊膜上皮细胞促进共培养神经干细胞存活及分化

陈东, 孟晓婷, 刘佳梅, 路来金

吉林大学学报(医学版)2004年3月第30卷第2期/Journal of Jilin University (Medicine Edition) March., 2004, Vol. 30, No.2,-0001,():

摘要

目的:探讨羊膜上皮细胞是否能在体外促进胚胎脑神经干细胞的存活及分化。方法:Neurosphere法分离、克隆E12~14d Wistar大鼠脑组织的神经干细胞。同时从羊膜中分离羊膜上皮细胞。将神经干细胞与羊膜上皮细胞在不同条件下共培养,通过免疫组织化学法对羊膜上皮细胞及神经干细胞的分化进行检测。结果:羊膜上皮细胞表达神经干细胞及神经元、神经胶质细胞表面抗原;与羊膜上皮细胞共培养的神经干细胞克隆的分化细胞总数、分化为神经元的百分率及神经元初级突起长度明显高于对照组。结论:羊膜上皮细胞与神经干细胞具有一定的同源性;羊膜上皮细胞能促进体外培养的神经干细胞的分化,且主要向神经元分化,并促进神经元初级突起的生长。提示羊膜上皮细胞为神经干细胞提供促进其分化及存活适宜的微环境。

关键词: 神经干细胞, 羊膜 上皮细胞, 细胞分化

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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞的研究

黄绍良, SA Ya-lian, LI Hai-biao, HUANG Shao-liang

[J SUN Yan-sen Univ (Med sci). 2003, 24 (2): 97-99, 103],-0001,():

摘要

[目的]探索体外定向诱导人胚胎干细胞(hEs细胞)分化为表皮样干细胞的条件。为研究其定向分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础。[方法]将人胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜上皮面向上全铺或半铺布半孔底共培养4~5d。观察其形态变化井分别用β1整合素,CKl5及CKl9免疫组化检测人胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化。[结果]人胚胎干细胞与人羊膜共培养4~5d后,在人羊膜上皮面形成表皮样干细胞集落,表达高水平的表皮干细胞特异标记物β1整合素、CKl5和CKl9。在无羊膜覆盖处。细胞贴壁生长,形成单层表皮样细胞,细胞呈多边形。排列紧密。大部分细胞表达β1整合素。对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞。[结论]在体外人羊膜可定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞,并提示在羊膜上皮面的细胞克隆可能是表皮样干细胞,而贴壁生长的细胞可能大部分是表皮样瞬间放大细胞。

关键词: 人, 胚胎干细胞, 表皮干细胞, 分化, 羊膜 免疫组织化学

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