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2006年11月01日

【期刊论文】C57BL/6J×129/J杂交小鼠ES细胞系的建株

余新炳, ZHANG Jia-qing, YU Wei-hua, ZHANG Xiu-ming, PENG Yan-wen, LI Wei-qiang, CHEN Rui, YU Xin-bing, LI Shu-nong, XIANG Peng△

chinese Journal of Pathophysiology 2006, 22(1): 7-11,-0001,():

摘要

目的:建立C57BL/6J×129/J杂交小鼠ES细胞系。方法:收集3.5d.P.c.的囊胚,培养在预先铺有小鼠成纤维细胞(MEFs)的高糖DMEM培养液中。3-4d后,挑出内细胞团(ICM),消化后重新种到新鲜的有MEFS培养液中。等到有典型的ES样集落长出,即传代以得到永久ES细胞系。通过分析碱性磷酸酶活性,SSEA-1,Oct-4的表达和形成畸胎瘤的能力来鉴定ES细胞的多向分化能力。结果:获得的两个C57BL/6J×129/J杂交小鼠ES细胞系绝大多数细胞具有正常的核型(40,XY),碱性磷酸酶染色阳性,SSEA-l,Oct-4表达阳性,ES细胞注入SCID鼠后可获得来自3个胚层的组织。结论:建立了两株具有长期自我更新能力和多向分化潜能的C57BL/6J×129/J杂交小鼠ES细胞系。

关键词: 小鼠, 胚胎干细胞, 杂交

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2006年01月10日

【期刊论文】用胚胎干细胞诱导的造血干/祖细胞重建小鼠造血功能研究

黄绍良, ZHOU Qi-feng, HE Zhi-xu, FENG Lian-qiang, HUANG Shao-liang, LI Shu-nong

热带医学杂志,2003,3(1):9~11,-0001,():

摘要

目的 胚胎干细胞体外诱导分化出CD34+造血干/祖细胞,然后将其注射人致死量照射小鼠体内,以研究其重建造血功能。方法胚胎干细胞自由分化形成胚胎体后,加人造血刺激因子混台液以诱导产生CD34+造血干/祖细胞,将这些造血干/祖细胞注射人经致死剂量照射的小鼠,观察小鼠存活率的改变,并取存活2个月的小鼠骨髓和脾脏,PCR检测嵌台体形成。结果 体外分化第13日CD34+造血干/祖细胞比倒可高达17.36%,将这些细胞注射人致死量照射小鼠后,可提高存活率达86.67%,存活小鼠的骨髓和脾脏均检测到供体来源的细胞。结论 胚胎干细胞体外分化获得CD34+造血干/祖细胞,且后者具有其相应的正常生物学功能。

关键词: 胚胎 干细胞, 造血干细胞

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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为造血干/祖细胞方法的初步研究*

黄绍良, HE Zhi-xu, HUANG Shao-liang, ZHOU Qi-feng, LI Shu-nong

中国病理生理杂志,2003,19(4):443-447,-0001,():

摘要

目的:探讨体外定向诱导胚胎干细胞(ESC)发育为造血干细胞(HSC)的方法。方法:将小、鼠E14胚胎干细胞在含于细胞生长因子(SCF)和血管内皮生长因子(VEGF)的甲基纤维素培养基上首先诱导发育为胚胎体(EB),再将EB置于均含SCF、VEGF、IL-3、IL-6及促红细胞生成素(EPO)的3各不同培养体系中定向分化为HSC,并观察HSC表面标志性抗原、造血集落形成及瑞氏-姬姆萨染色的结果。结果:经两阶段诱导ESC分化为HSC,发现在甲基纤维半固体培养体系中HSC发育缓慢,分化14d后CD34+/Sca-1+细胞数量最高为(31.5+-4.7)%;而在骨髓基质细胞饲养层上HSC发育缓慢较快,细胞数量较多,分化第10dCD34+/Sca-1+细胞数即达到峰值,为(47.8+-6.3)%;骨髓基质细胞饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系中HSC发育同样迅速,所产生的CD34+/Sca-1+细胞数量在3个体系中最高,为(53.6+-7.2)%。经瑞氏-姬姆萨染色证实上述细胞为早期造血细胞,均有形成各系造血细胞集落的能力。结论:使用骨髓基质饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系及SCF、VEGF、IL-3、IL-6及EPO等细胞因子,通过阶段诱导分化,可从小鼠ESC获得较高比例的HSC。

关键词: 胚胎干细胞, 造血干细胞, 骨髓细胞, 分化, 小鼠

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