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2006年11月03日

【期刊论文】体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经干细胞的实验研究*

葛坚, 陶靖, 葛坚△, 黄冰, 王智崇, 郭彦, 余克明, 陈慧怡, 陈系古

中国病理生理杂志,2003,19 (3): 289-292,-0001,():

摘要

目的:探讨体外诱导小鼠胚胎干细胞(ESCs)分化为神经干细胞(NSCs)的可能性。方法:ESCs经胚胎体阶段,以视黄酸及视网膜müller细胞诱导,在NSCs选择性培养基中筛选培养扩增7d,观察形态变化,采用RT-PCR法检测nestin、glutaminase、Brn-3基因表达及免疫细胞化学法检测nestin等NSCs特异性标志物,并对其扩增及分化能力进行观察。结果:ESCs经初级诱导,NSCs选择性培养基筛选培养7d后,形成大量神经球样结构,可扩增传代。绝大部分神经球样结构呈nestin抗原阳性,整合BrdU,表达nestin、glutaminase、Brn-3基因,且可分化为神经元及神经胶质样细胞。结论:视黄酸及müller细胞诱导的ESCs,经选择性培养基筛选培养可获得NSCs,有望为青光眼等神经变性疾病提供新的治疗途径。

关键词: 胚胎干细胞, 神经再生, 小鼠

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2006年11月02日

【期刊论文】蛋白激酶Cα 在小鼠胚胎干细胞定向分化中对发育基因表达的调控作用

葛坚, 高前应, 王智崇, 陈慧怡, 黄丹平, 袁钊辉

中华眼科杂志,2005,41(2):123~127,-0001,():

摘要

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对小鼠胚胎干细胞(ESCs)定向诱导分化中发育基因(pax26、slit22、netrin21)表达的影响。方法ES2BALB/c细胞株用无白血病抑制因子(mLIF)的ESCs培养液培养4d,形成胚胎体(EBs),再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿,经5×10-7mol/L视黄酸(RA)诱导后,用神经细胞特异性抗原NSE和NF2200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后1、3、5、7及14d用逆转录聚合酶链反应(RT2PCR)方法测定细胞的PKCα和发育基因的mRNA表达情况,并观察了PKC激活剂佛波酯(PMA)和PKC抑制剂D2鞘氨醇对它们表达的影响。结果 免疫组化发现在诱导后第3d大多数细胞NSE和NF2200染色阳性,RT2PCR证实诱导后1dPKCα、pax26和netrin21的mRNA表达急剧下降,3~7d逐渐升高,至14d恢复至正常水平,而slit22在诱导前后均无明显表达。PMA可使PKCα、pax26、netrin21的mRNA水平在诱导后细胞中的表达明显增强,而D2鞘氨醇的作用相反,使它们的表达显著降低,而对slit22无明显影响。结论发育基因pax26和netrin21在ESCs定向分化为神经样细胞中有重要的调控作用,可能是通过PKCα信号通路起作用。

关键词: 胚胎;  干细胞;  蛋白激酶C;  细胞分化;  基因表达调控, 发育期;  小鼠

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2006年11月02日

【期刊论文】SD 大鼠视网膜神经细胞培养上清液对胚胎干细胞体外分化的诱导作用

葛坚, 杨智宽, 郭彦, 王智崇, 刘海泉

中华眼底病杂志,2002,18(2):134~136,-0001,():

摘要

目的探讨视网膜神经细胞培养的上清液对胚胎干细胞(embryonicstemcells,ES)体外分化的诱导作用。方法收集SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液,抽滤后按2:3比例与DMEM培养液混合,用该混合液进行ES细胞的诱导分化,每天倒置相差显微镜观察ES细胞的生长及分化情况,对诱导分化后的细胞进行神经丝蛋白(nellcofilamentprotein,NFP)免疫组织化学检查。结果加入了视网膜神经细胞培养上清液的ES细胞生长出类似神经细胞突起样结构,NFP免疫组织化学染色阳性。结论SD大鼠视网膜神经细胞培养的上清液具有诱导ES细胞向神经细胞分化的作用。

关键词: 胚胎诱导,  细胞分化,  神经元,  干细胞,  动物实验替代试验

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2005年07月22日

【期刊论文】角膜基质诱导胚胎干细胞定向分化的初步实验研究

王智崇, 陈家祺, 葛坚, 黄冰

,-0001,():

摘要

目的:探索角膜基质接触诱导ES细胞定向分化的可能性。方法:分别在去上皮的新西兰白兔表层角膜缘基质上、晶状体上皮细胞饲养层上培养ES-D3细胞,形成复层细胞后,行活体移植,用扫描电镜和光镜观察。结果:1.ES细胞在新鲜表层角膜缘基质上增殖缓慢,2~3周形成较大细胞集落,光镜下细胞形态单一,体积较正常ES细胞大,电镜下细胞核已演变为细长形,移植到裸鼠皮下2周形成细胞复层,电镜下可见微绒毛,而角膜基质非上皮面的ES细胞仍保持其小细胞状态不变。2.晶状体上皮细胞与ES细胞共培养只能延缓其分化时间,不能诱导其定向分化,复层细胞移植后的棉衣组化显示:AE5阳性表达。结论:表层角膜缘基质具有诱导ES细胞定向分化的潜能,体外培养条件下可能不发生晶状体诱导的第三级胚胎诱导。

关键词: 胚胎干细胞 角膜缘干细胞 胚胎诱导 基质 定向分化

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