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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞的研究

黄绍良, SA Ya-lian, LI Hai-biao, HUANG Shao-liang

[J SUN Yan-sen Univ (Med sci). 2003, 24 (2): 97-99, 103],-0001,():

摘要

[目的]探索体外定向诱导人胚胎干细胞(hEs细胞)分化为表皮样干细胞的条件。为研究其定向分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础。[方法]将人胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜上皮面向上全铺或半铺布半孔底共培养4~5d。观察其形态变化井分别用β1整合素,CKl5及CKl9免疫组化检测人胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化。[结果]人胚胎干细胞与人羊膜共培养4~5d后,在人羊膜上皮面形成表皮样干细胞集落,表达高水平的表皮干细胞特异标记物β1整合素、CKl5和CKl9。在无羊膜覆盖处。细胞贴壁生长,形成单层表皮样细胞,细胞呈多边形。排列紧密。大部分细胞表达β1整合素。对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞。[结论]在体外人羊膜可定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞,并提示在羊膜上皮面的细胞克隆可能是表皮样干细胞,而贴壁生长的细胞可能大部分是表皮样瞬间放大细胞。

关键词: 人, 胚胎干细胞, 表皮干细胞, 分化, 羊膜, 免疫组织化学

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2006年01月11日

【期刊论文】 定向诱导小鼠ES细胞为肝脏细胞及其凝血因子Ⅷ, Ⅸ的表达*

黄绍良

中国科学C辑生命科学,2005,35(3):269-274,-0001,():

摘要

凝血因子vⅢIX缺陷导致血友病A和B的发生、肝细胞是产生凝血因子的器官,利用肝细胞进行替代治疗是纠正凝血因子缺陷的根本办法,但是其来源及利用存在难以克服的问题Es细胞具有体外培养时保持未分化状态和无限的增殖能力,具有在一定条件下可以分化发育成各个胚层细胞的潜能,利用Es细胞源性肝细胞作为供体细胞,解决了肝细胞来源困难、增殖能力差的难题体外分阶段定向诱导E14小鼠Es细胞分化为肝细胞,ICG摄取及PAs反应结果证实Es源性细胞具备肝细胞功能,在此基础上,利用RT-PCR法对诱导细胞初步进行了凝血因子VⅢIX表达分析,为进一步开展利用Es细胞纠正凝血因子缺乏奠定了研究基础。

关键词: 胚胎干细胞, 分化, 肝细胞, 凝血因子

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2006年01月10日

【期刊论文】用胚胎干细胞诱导的造血干/祖细胞重建小鼠造血功能研究

黄绍良, ZHOU Qi-feng, HE Zhi-xu, FENG Lian-qiang, HUANG Shao-liang, LI Shu-nong

热带医学杂志,2003,3(1):9~11,-0001,():

摘要

目的 胚胎干细胞体外诱导分化出CD34+造血干/祖细胞,然后将其注射人致死量照射小鼠体内,以研究其重建造血功能。方法胚胎干细胞自由分化形成胚胎体后,加人造血刺激因子混台液以诱导产生CD34+造血干/祖细胞,将这些造血干/祖细胞注射人经致死剂量照射的小鼠,观察小鼠存活率的改变,并取存活2个月的小鼠骨髓和脾脏,PCR检测嵌台体形成。结果 体外分化第13日CD34+造血干/祖细胞比倒可高达17.36%,将这些细胞注射人致死量照射小鼠后,可提高存活率达86.67%,存活小鼠的骨髓和脾脏均检测到供体来源的细胞。结论 胚胎干细胞体外分化获得CD34+造血干/祖细胞,且后者具有其相应的正常生物学功能。

关键词: 胚胎 干细胞, 造血干细胞

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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为造血干/祖细胞方法的初步研究*

黄绍良, HE Zhi-xu, HUANG Shao-liang, ZHOU Qi-feng, LI Shu-nong

中国病理生理杂志,2003,19(4):443-447,-0001,():

摘要

目的:探讨体外定向诱导胚胎干细胞(ESC)发育为造血干细胞(HSC)的方法。方法:将小、鼠E14胚胎干细胞在含于细胞生长因子(SCF)和血管内皮生长因子(VEGF)的甲基纤维素培养基上首先诱导发育为胚胎体(EB),再将EB置于均含SCF、VEGF、IL-3、IL-6及促红细胞生成素(EPO)的3各不同培养体系中定向分化为HSC,并观察HSC表面标志性抗原、造血集落形成及瑞氏-姬姆萨染色的结果。结果:经两阶段诱导ESC分化为HSC,发现在甲基纤维半固体培养体系中HSC发育缓慢,分化14d后CD34+/Sca-1+细胞数量最高为(31.5+-4.7)%;而在骨髓基质细胞饲养层上HSC发育缓慢较快,细胞数量较多,分化第10dCD34+/Sca-1+细胞数即达到峰值,为(47.8+-6.3)%;骨髓基质细胞饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系中HSC发育同样迅速,所产生的CD34+/Sca-1+细胞数量在3个体系中最高,为(53.6+-7.2)%。经瑞氏-姬姆萨染色证实上述细胞为早期造血细胞,均有形成各系造血细胞集落的能力。结论:使用骨髓基质饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系及SCF、VEGF、IL-3、IL-6及EPO等细胞因子,通过阶段诱导分化,可从小鼠ESC获得较高比例的HSC。

关键词: 胚胎干细胞, 造血干细胞, 骨髓细胞, 分化, 小鼠

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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导E14小鼠胚胎干细胞为肝细胞

黄绍良, HUANG Shao-liang, MIN Jun, GUO Zhong-min, WU Yan-feng, BAO Rong

中华肝脏病杂志,2004,12(12):714-717,-0001,():

摘要

目的 探索体外定向诱导胚胎细胞分化为肝细胞。方法 常规方法培养E14小鼠胚胎干细胞(ESC)后,进行悬滴-悬浮培养,形成胚胎体,再进分阶段定向诱导,在培养第q~12天、第12~18天以及第15~18天分别加入酸性成纤维细胞生长因子、肝细生长因子和制制瘤素M,利用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,逆转取聚合酶链反应(RT-PCR)法分析特异性基因nRNA的表达,并用吲垛氰绿(ICG)摄取和过碘酸雪夫反就(PAS)分析细胞的分化用或能。结果 存诱导培养的第13天,细胞出现肝细胞样改变。RT-PCR分析可见,在诱导的第6天和第12天分别可以检测到内胚层或卵黄曩分化标志基因——甲状腺素运载蛋白和α1抗胰蛋白酶的mRNA表达,第6天出现未成熟肝细胞标志基因——甲胎蛋白mRNA表达,第9天第15天和第18天分别开始出现成熟肝细胞的特异性标志基因——白蛋白、葡萄糖6磷酸酶、酪氨酸氨基转移酶mRNA表达。同时,ESC源性肝细胞表现为ICG摄取和RAS反应阳性、经过诱导,ICG阳性 细胞数约占85.1%。结论 ESC源性肝细胞具备肝细咆特性,ESC有可能成为肝细胞治疗的替代供体细胞。

关键词: 胚胎 干细胞, 肝细胞, 分化

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