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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导E14小鼠胚胎干细胞为肝细胞

黄绍良, HUANG Shao-liang, MIN Jun, GUO Zhong-min, WU Yan-feng, BAO Rong

中华肝脏病杂志,2004,12(12):714-717,-0001,():

摘要

目的 探索体外定向诱导胚胎细胞分化为肝细胞。方法 常规方法培养E14小鼠胚胎干细胞(ESC)后,进行悬滴-悬浮培养,形成胚胎体,再进分阶段定向诱导,在培养第q~12天、第12~18天以及第15~18天分别加入酸性成纤维细胞生长因子、肝细生长因子和制制瘤素M,利用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,逆转取聚合酶链反应(RT-PCR)法分析特异性基因nRNA的表达,并用吲垛氰绿(ICG)摄取和过碘酸雪夫反就(PAS)分析细胞的分化用或能。结果 存诱导培养的第13天,细胞出现肝细胞样改变。RT-PCR分析可见,在诱导的第6天和第12天分别可以检测到内胚层或卵黄曩分化标志基因——甲状腺素运载蛋白和α1抗胰蛋白酶的mRNA表达,第6天出现未成熟肝细胞标志基因——甲胎蛋白mRNA表达,第9天第15天和第18天分别开始出现成熟肝细胞的特异性标志基因——白蛋白、葡萄糖6磷酸酶、酪氨酸氨基转移酶mRNA表达。同时,ESC源性肝细胞表现为ICG摄取和RAS反应阳性、经过诱导,ICG阳性 细胞数约占85.1%。结论 ESC源性肝细胞具备肝细咆特性,ESC有可能成为肝细胞治疗的替代供体细胞。

关键词: 胚胎 干细胞, 肝细胞, 分化

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