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2009年04月19日

【期刊论文】人腹膜间皮细胞的培养及特征

刘伏友, 段绍斌, 龙志高, 肖平, 陈星, 潘乾, 罗季安, 彭佑铭

湖南医科大学学报,2001,26(4):321~324,-0001,():

摘要

目的:建立人腹膜司皮细胞(HPMC)培养模型,检测HPMC细胞外基质蛋白及白细胞介素(IL-8)的表达。方法:采用胰蛋白酶-EDIA消化法,从人的腹膜组织中分离HPMC。采用形态学和链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(即SP法),对培养细胞进行鉴定。采用SP法检测HPMC纤维连接蛋白(FN)、胶原Ⅲ和胶原V及转化生长因子(TGF)β1表达。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HPMC IL-8 mRNA和FN mRNA的表达。结果:光镜示细胞融合后呈多边形,超微结构下可见丰富的微绒毛和内质网,免疫组化染色结果示HPMC可表达角蛋白,波形蛋白,胶原Ⅲ,FN,TGFβ1蛋白,Ⅷ因子、胶原V表达阴性。人腹膜司皮细胞亦表达FN mRNA和IL-8 mRNA。结论:HPMC培养模型的建立,可为进一步研究腹膜纤维化的防治及IL-8在腹膜透析中的作用提供理论依据。

关键词: 司皮细胞, 基质, 转化生长因子β1 白细胞介素-8, 细胞培养

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2010年01月03日

【期刊论文】人肾小管上皮细胞转分化过程中血管内皮细胞生长因子及其受体表达的变化

谭小月, 周秋根, 郑法雷#, 文煜冰, 段林, 李艳

中国医学科学院学报,27(3):325-331,-0001,():

摘要

目的:探讨转化生长因子B1(TGFl31)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化。方法用不同浓度的TGFBl诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和VEGF mRNA表达,酶联免疫分析(ELISA)检测上清中的VEGF,免疫印迹检测细胞裂解物中的VEGF及其受体。结果(1)HK-2细胞在TGFl31(5、8 ng/m1)刺激后,α-SMA免疫染色均为阳性,以8ng/ml时最强;TGFβ1呈剂量和时司依赖诱导β-SMA mRNA表达(P<0.001)。(2)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF从基因到蛋白水平呈双相改变:0.1和1ng/mlTGFβ1刺激后VEGF mRNA和蛋白表达强度均高于对照组(P<0.001);而3、5和8ng/ml TGFβ1刺激后表达强度则低于对照组(P<0.001)。8ng/ml TGFβ1刺激较短时司(12和24h),VEGFmRNA和蛋白表达强度高于对照组(P<0.001);而刺激较长时司(36、48和72h),mRNA和蛋白表达强度均低于对照组(P<0.001)。(3)TGFβl诱导HK-2细胞转分化过程中,以浓度和时间依赖性方式诱导VEGF受体表达增强(P<0.001)。结论TGFβl诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF受体表达增强,而VEGF表达出现双相变化,高浓度的TGFBl刺激可引起VEGF表达下调。

关键词: 肾小管上皮细胞转分化, 转化生长因子β1 血管内皮细胞生长因子

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