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2005年02月25日

孙茂盛，谢天宏，李洪钊，张光明，冮宏映，孙强明*，丁云菲，马雁冰

生物技术，2004，14（1）：8～10，-0001，（）：

-1年11月30日

迄今所发现的唯一的戊型肝炎病毒（HEV）中和表位定位于开放读码框架2（ORF2）编码蛋白的第578和第607氨基酸（aa）之间的区域。将对应于此区域的基因片段通过一段柔性的甘氨酸铰链与乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HbsAg）基因的3'端相连，构建成HBV/HEV融合基因。该融合基因在毕赤酵母细胞内的表达产物为分子量约29 kDa的融合蛋白，具有组装成嵌合病毒样颗粒（VLP）的能力。此嵌合VLP具有与HBsAg VLP 相似的特性且保留了天然HBV/ HEV双重抗原性。对此嵌合VLP特性的初步研究提示其可能具有HBV/HEV 双价重组疫苗的潜在应用前景。

戊型肝炎病毒， ORF2，中和表位，表达

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2005年02月25日

【期刊论文】戊型肝炎病毒ORF2C端抗原片段的表达及其免疫学特性研究

孙茂盛，马雁冰，李鸿钧，唐浩，杜瑞娟，李春宏，张光明，谢天宏，戴长柏

中华微生物学和免疫学杂志，2000，20（5）：419～422，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的表达戊型肝炎病毒（hepatitis E virus， HEV）ORF2C端128个氨基酸残基的抗原片段ORF213，并进行其免疫学特性的研究。方法用pBV220载体进行抗原的非融合表达，包涵体经变性凝胶过滤层析及离子交换层析纯化后透析复性，以Western blot、ELISA、动物免疫与抗原捕获RT2 nPCR等方法研究其免疫学特性。结果获得了ORF213的高效表达，表达量占菌体总蛋白50%左右，纯化后纯度达98%以上，Western blot表明表达抗原可与戊肝患者阳性血清特异性结合；在HEV感染恒河猴实验中用于IgG抗体的检测，具有较好灵敏度与特异性；用其免疫豚鼠，抗体经ELISA法测定效价为1：8000；用制备的豚鼠抗血清捕获戊型肝炎病毒颗粒，经RT2nPCR扩增出特异性片段。结论ORF213抗原片段具有HEV抗体识别的抗原表位，能够刺激机体产生抗体，抗血清具有一定的识别与结合戊型肝炎病毒颗粒的能力。

戊型肝炎病毒，抗原,，毒，免疫学特性

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2005年02月25日

【期刊论文】戊型肝炎病毒DNA免疫的研究*

孙茂盛，吕冬梅，陈尔佳，谢天宏，庄俊英，刘勇，李春宏，孙茂盛*， *，戴长柏

中国病毒学，2001，16（2）：113-134，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

利用PCR方法获得1163bp的戊型肝炎（Hepatitis E Virus， HEV）开放读码框架（Open Reading Frame， ORF）ORF2之3’片段和369bp ORF3的完整片段，别克隆到真核表达载体pcDNA3中，构建两种含有HEV主要抗原表位的质粒DNA：pcE2和pcE3，分别或混合免疫Swiss小鼠三次（0时，第2周，第4周），观察其在小鼠体内诱发的体液免疫应答。EL ISA 检测结果表明，pcE2和pcE3在小鼠体内均可诱导出一定水平的HEV IgG抗体，且在第三次免疫接种两周后，100%的小鼠抗体阳转。与两种质粒单独免疫相比，两者同时注射的抗体水平较高。本研究为HEV DNA疫苗的研究打下一定基础。

DNA免疫，戊型肝炎病毒，体液免疫

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2005年02月25日

【期刊论文】人血纤维蛋白溶酶原K5环的基因合成、表达、纯化与活性鉴定

孙茂盛，袁力勇，马雁冰，刘勇，庄俊英，李春宏，宏映，戴长柏

中国生物化学与分子生物学报，2001，17（1）：14～17，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性，人工合成人血纤维蛋白溶酶原K5全基因，并在原核系统中以硫氧还蛋白融合蛋白的形式实现了高效表达L重组蛋白通过Ni2+金属螯合层析得到初步纯化，通过肠激酶切割去除了融合标签L应用鸡胚尿囊膜实验检测切割后的rhK5的生物学活性，发现与对照组相比，rhK5能明显地降低血管管径、血管总面积以及血管总面积与视野面积的比值，表明切割后的产物具有显著抑制新生血管生成的生物学活性L为进一步研究和开发抗血管生成药物奠定了基础L

人血纤维蛋白溶酶原,， K5环,，基因合成,，基因表达,，血管生成

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2005年02月25日

【期刊论文】人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

孙茂盛，别俊，孙强明，郑建平，孙雯佳

第一军医大学学报，2004，24（8）：913～916，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子。方法应用RT-PcR的方法得到survivin的cDNA，并构建成pBV220-survivin原核表达质粒，将其导入E.coli B121（G01d）中，诱导表达survivin蛋白。通过DEAE sepbaroseFastFlow离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白。用Western blotting检测表达产物。结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致，表达质粒在E.coli B121（Gold）中得到高效表达，表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30%以上表达产物以包涵体的形式存在。通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白，其纯度达到95%以上。wester blotting证明表达产物具有特异性。结论获得了较高纯度的survivin蛋白，为进一步深入研究该蛋白的细胞调亡调控功能提供了工具。

sunvlvm，克隆，基因表达，纯化

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