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2005年03月08日

杨慧，段德义，吴杰军，赵春礼，蔡青，徐群渊

神经解剖学杂志，2004，20（3）：215～219，-0001，（）：

-1年11月30日

为了通过逆转录病毒载体ex vivo途径高效表达TH和GDNF基因。本实验构建有TH和GDNF基因的重组逆转录病毒载体pLHCX/TH和pLNCX2/GDN F，分别转染包装细胞PA317和PT67中；经筛选、RT-PCR、免疫组化等鉴定得到产毒细胞PA 317/TH和PT67/GDNF。培养COS-7细胞，以两种产毒细胞的上清分别感染COS-7细胞，筛选后，免疫组化、原位杂交检测基因的表达量，将基因改造的细胞移植到大鼠纹状体内，免疫组化检测体内移植的TH、GDNF基因的表达。结果表明：TH和GDNF基因可在靶细胞表达，且筛选后基因表达阳性细胞显著增加；TH阳性率达50%，GDNF阳性率达70%。在体内实验中，可以观察到这两种外源基因可同时在大鼠脑内移植区表达。以上结果提示，TH和GDNF基因改造细胞，可通过ex vivo 途径在脑内移植区高效表达。这一实验结果将对Park inson病复合性基因治疗提供依据。

基因治疗，逆转录病毒，酪氨酸羟化酶，胶质源性神经营养因子

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2005年03月08日

【期刊论文】脑型和味型代谢性谷氨酸受体的不同功能

杨慧， *，徐群渊， Roper S， Chandhari N

解剖学报，2002，33（1）：1～5，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的利用脑型及味型mGluR4在体内外的表达，检测两种受体结构功能上的差异，从而证实它们在信号转导功能上的不同。方法将克隆得到的脑型及味型mGluR4分别通过脂质体介导转染CHO 细胞。在L-MSG和L-AP4 的作用下，检测两种受体的功能。利用Western Blot及原位杂交技术，分别检测它们在体内外的表达。结果转染脑型及味型mGluR4的CHO细胞，表达两种不同分子量的免疫活性蛋白，其中脑型分子量约为120kD而味型约为68kD。在L-MSG和L-AP4作用下，味型mGluR4对刺激物反应的浓度远高于脑型mGluR4。对大鼠脑组织及舌味蕾的原位杂交证明，mGluR4 在小脑颗粒细胞有很高的表达，而在味蕾细胞表达率较低，阳性细胞仅占味蕾细胞的5%。结论味组织中的mGluR4 与脑组织中mGluR4在结构和功能上有明显不同。味型mGluR4特异性表达于味蕾细胞，在高于脑内的浓度下，结合细胞外的谷氨酸，通过降低cAMP的浓度引发味觉信号转导。是谷氨酸味觉的特异性受体。

味型mGluR4，脑型mGluR4，味觉，谷氨酸L-AP4

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2005年03月08日

【期刊论文】骨髓基质细胞的分离、鉴定以及TH基因的转染与表达

杨慧，鲁玲玲，苏玉金，赵春礼，邹西峰，侯少平，徐群渊，杨慧*

生物化学与生物物理学报，2003，35（4）：536～541，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的是探索骨髓基质细胞的分离培养、鉴定及其接受并表达TH基因的能力。实验中通过密度梯度离心法成功地从成年SD大鼠骨髓中分离获得了骨髓基质干细胞，并用流式细胞仪对其进行鉴定，纯度可达75%。进一步采用复制缺陷型腺相关病毒载体介导的基因转染方法, 将之改造成为携带lacZ与TH基因的工程细胞，经X-gal 染色和TH免疫组化检测，转染效率为（74.6±19.4）%。实验结果表明骨髓基质细胞易于接受并表达外源基因，有望作为运载细胞应用于帕金森病的基因治疗。

骨髓基质细胞，帕金森病，腺相关病毒载体， TH基因

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2005年03月08日

【期刊论文】人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ基因的克隆与表达

杨慧，苏玉金，江小华，姜重建，张宇新，杨秋慧，徐群渊

解剖学报，2003，34（4）：349～352，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的研究人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ（GCH Ⅰ）基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法从人胚胎肝脏中提取总RNA，以RT－PCR法扩增GCH ⅠcDNA，克隆于PGEM－T－easy载体中，测序正确后+G18再构建真核表达载体，转染猴肾成纤维细胞系COS7，原位杂交检测其表达。结果 RT-PCR扩增出904bp的cDNA，并成功构建真核表达载体pCI-neo-GCH Ⅰ，原位杂交证实其在COS7表达阳性率为70%～80%。结论 GCH Ⅰ有望用于帕金森病的基因治疗。

三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ， RT-PCR，原位杂交，人胚肝脏

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2005年03月08日

【期刊论文】α-synuclein2pEGFP真核表达载体的构建及其在SH2SY5Y细胞中的表达①

杨慧，张宇新，赵焕英，苏月，苏玉金，赵春礼，徐群渊

神经解剖学杂志，2003，19（3）：124～128，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为了构建α-synuclein-pEGFP真核表达载体，检测其在SH-SY5Y细胞内的表达，本研究应用下述方法：PCR扩增α- synuclein基因并消除终止密码子；PCR产物连入pGEM T-easy载体，经测序确认无误后，亚克隆入pEGFP-N1，构建α-synucle-in-pEGFP真核表达载体；LipofectAMINE法转染SH-SY5Y细胞；荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP，原位杂交和免疫荧光细胞化学法检测α-synucleinmRNA及其蛋白表达。结果显示，该载体转染SH-SY5Y细胞后，可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物。结论：α-synuclein-pEGFP真核表达载体构建成功，并可在细胞内表达。本工作为今后动态观察研究α-synu-clein致Parkinson病多巴胺能神经细胞损伤机制奠定基础。

α-synuclein，绿色荧光蛋白，原位杂交，荧光免疫细胞化学

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