目的 检测福氏志贺菌喹诺酮类耐药临床分离株DNA旋转酶gyrA和拓扑异构酶ⅣparC基因的突变情况，探讨GyrA和ParC氨基酸改变与喹诺酮类耐药的相关性。方法 根据药敏实验结果选取47株福氏志贺菌临床分离菌，对其gyrA、parC喹诺酮耐药决定区（QRDR）进行聚合酶链反应（PCR）扩增和测序分析，并采用SAS（V8.2）软件分析GyrA和ParC改变和喹诺酮类耐药性的关联程度。结果 44株喹诺酮类耐药菌在gyrA、parC基因QRDR均发生有义突变，gyrA83位密码子突变（TCG→TTG）最为常见，存在于43株耐药菌。混合模型分析结果显示GyrA83位、ParC80位氨基酸改变与萘啶酸的耐药性密切相关（P<0.01，R2=0.999），GyrA83、87位氨基酸改变与环丙沙星的耐药性密切相关（P<0.05，R2=0.872）。结论 GyrASer83→Leu突变是导致福氏志贺菌临床株对喹诺酮类耐药的关键突变，此单位点突变即可介导福氏志贺菌对萘啶酸的耐药，但对环丙沙星耐药需同时存在GyrA和/或ParC多个位点突变或其他耐药机制。

目的 构建汉坦病毒浙37（Z37）株包膜糖蛋白基因G1、G2真核表达质粒，并在真核细胞中表达。方法 根据Z37M基因序列设计6条引物，分别以质粒pGEMZ37、pCUMZ37为模板，通过聚合酶链反应（PCR）获得G1及G2片段。将G1、G2片段经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后插入至真核表达载体pcDNA3.1（+），经酶切鉴定，并测序证实。以磷酸钙沉淀法分别将重组质粒转染COS27细胞，用间接免疫荧光法（IFA）检测瞬时表达的蛋白。结果 获得分别含有编码汉坦病毒（HV）Z37株包膜糖蛋白G1、G2基因的重组质粒pcDNA3.12G1、pcDNA3.12G2；在转染的COS27细胞内，用IFA可检测到细胞内有特异性荧光。结论 成功地构建了HVZ37株包膜糖蛋白G1、G2基因真核表达载体，并可在COS27细胞中瞬时表达。

目的 研究鸭IFN-γ（DuIFN-γ）在感染及控制病毒过程中的作用和机制。方法 基于βarlln的高度保守序列设计引物，通过RT-PCR方法获得了β-actin的郭分cDNA为看家基因，然后构建DuIFN-γ靶片段的竞争性内参照，建立检测DuIFN-γ基因转录的半定量竞争性RT-PCR方法。结果 建立了检测DuIFN-γ基因转录的半定量竞争性RT-PCR方法，并检测了在PHA刺激下鸭外周血单核细胞IFN-γmRNA动态变化，结果表明PHA刺激24～36h，DuIFN-γmRNA转录量最高。以此方法对用DHBvpresDNA或与IFN-γDNA共免疫DHBv感染鸭进行了测定，结果表明IFN-γ表达质粒作为DNA免疫佐剂。可以增强宿主IFN-γ的应答。结论 IFN-γ表达质粒为DNA疫苗的有效佐剂。DuJFN-γ基因转录的半定量竞争性RT-PCR方法为研究鸭IFN-γ在DHBv感染及清除中的作用和机制奠定了基础。

目的 研究中药复方ZL-1在鸭己型肝炎病毒（DHBV）持续性感染模型中抗嗜肝DNA病毒的作用。方法 应用中药复方ZL-1治疗实验感染鸭，口服给药，剂量500mg•kg-1•d-1，分2次服用，连续4周。采用斑点分子杂交和southem印迹杂交检测治疗后感染鸭血清和肝脏中病毒的动态变化。同时以拉米夫定及安慰剂作为对照组。结果 复方药物ZL-l治疗后血清中DHBvDNA均数从3.6×1010拷贝/ml下降至0.9×1010拷贝/ml（P<001），抑制病毒率为75%，但尚不能清除病毒血症，肝组织中总DHBvDNA和DHmv超螺旋型DNA量无明显减少，停药观察2周，病毒复制反弹不明显。拉米夫定治疗后可显著降低病毒血症（P<0.01），抑制病毒率达99%，同时肝组织中总DHBVDNA和DHBV超螺旋型DNA量减少，但停药观察2周，病毒复制反弹明显。安慰剂组（口服生理盐水）治疗前后病毒水平的差异无显著性（P>0.05）。结论 复方药物ZL-1治疗4周可使感染鸭病毒血症降低。但不能清除病毒血症，肝脏中病毒复制水平也无显著下降。

目的：研究乙肝病毒核心抗原（HBcAg）DNA疫苗诱导的细胞免疫应答。方法：用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA（简称pHBc144）100μg免疫C57BL/6小鼠，用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠体内抗原特异性CD8+T细胞的动态变化。结果：pHBc144免疫后抗原特异性CD8+细胞逐渐增多，在初次免疫的第14天出现第一个免疫应答高峰，此后抗原特异性CD8+细胞数量逐渐下降进入免疫记忆期并在1年内维持在稳定水平。加强免疫后在第10天抗原特异性CD8+T细胞数量达到高峰，约是初次免疫应答高峰的2倍，此后抗原特异性CD8+T细胞数量逐渐下降，但下降的速度比初次免疫应答减缓。结论：pHBc144DNA疫苗可诱导有效的细胞免疫应答。