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2009年04月27日

江丽芳，洪帮兴，胡玉山，方丹云，郭辉玉

中华微生物学和免疫学杂志，2004，24（3）：241～244，-0001，（）：

-1年11月30日

目的研究细菌23S rRNA基因序列的差异，为细菌鉴别诊断和相关研究提供科学依据。方法设计合适的通用引物、寻找恰当的扩增条件扩增常见细菌的23S rRNA基因片段。通过序列测定和运用生物信息学分析不同种属细菌23S rRNA基因的保守序列、变异规律及菌株间种系进化关系。结果扩增出常见引起食源性感染的16属（种）细菌23S rRNA基因片段。部分扩增产物进行了限制性酶切鉴定和序列测定。序列比较研究获得21个23S rRNA的通用保守序列，23S rRNA基因保守序列与变异区在种系间呈间隔分布，大量变异区呈“马赛克”式分布。种系间进化关系与16SrRNA分析结果一致。结论 23S rRNA基因序列的分布规律为进行细菌的鉴别诊断及基因芯片的研制提供了重要的理论和实验基础。

23S rRNA，同源性，遗传学

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2009年04月27日

【期刊论文】SARS冠状病毒M 基因的克隆及其表达*

江丽芳，晏辉钧，赵卫，方丹云，周经姣，龙北国，张文炳，郭辉玉，江丽芳**

中国病毒学，2005，20（1）：1～4，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

从SARS冠状病毒（GD322株）组织培养上清中提取RNA，进行RT PCR扩增其M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体pPICZ-B，电穿孔法将重组体整合入酵母菌P-pastoris，经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定，取Mut-菌用甲醇诱导表达，SDS-PAGE检测其表达产物。Mut-酵母转化菌经甲醇诱导可分泌表达约6kDa和42 kDa的蛋白质，与SARS恢复期病人血清的免疫印迹证实它们为特异的重组M 蛋白质，且获得的重组M蛋白质具有免疫反应性。

SARS冠状病毒， M基因，克隆，巴氏毕赤酵母，表达

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2009年04月27日

【期刊论文】SARS冠状病毒的分离培养与鉴定

江丽芳，赵卫，晏辉钧，方丹云，周经姣.龙北国，吴义芳.周俊梅，梁瑜，张文炳，吴强，郭辉玉

中国病毒学，2003，18（6）：544～547，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

采集急性期病人的咽拭子或漱口液，用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞，人胚肺二倍体细胞（髓L）和人胚肺（1iP）细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症（SARS）的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现，恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应，在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光；中和试验结果表明，恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用；电镜下可观察到冠状病毒样颗粒；RT-PCR 法可扩增到冠状病毒特异性基因片段，且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒（SARS-Coy）相应的基因序列相符，同源性达到100%。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒，这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。

传染性非典型肺炎， SARS冠状病毒(， SARS-CoV)，，分离培养与鉴定，序列分析

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2009年04月27日

【期刊论文】登革病毒2型NSI蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果观察

江丽芳，高阳，方丹云，周俊梅

中华微生物学和免疫学杂志，2003，23（10）：787～791，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的以登革病毒2型（dengue virus 2，DV2）结构蛋白（non-structru]protein 1，NSl）为靶基因，构建DV2-NSl的候选DNA疫苗；并探讨其在小鼠体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的作用。方法将登革病毒2型NSl/NS2a基因片段克隆至含AG强启动子的真核表达载体pCXN2上，构建成重组体pCXN2-NSI/NS2a。在体外将重组质粒转染Cos-7细胞，间接免疫荧光检测其在真核细胞中的表达。大量提取空质粒和重组质粒，进行动物免疫实验。结果重组质粒可在真核细胞中有效地表达NSI蛋白。免疫接种小鼠后可诱发机体产生针对NSI蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫。末次免疫前已有抗体产生，4周后达高峰。抗体依赖补体介导的溶细胞作用（antibody-dependent comple-ment-mediated cytolysis，ADCC）试验结果显示产生的抗体在体外具有特异的杀细胞作用。淋巴细胞增殖实验结果显示，实验组小鼠的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异有显著性。流式细胞计数仪（FAcS）检测DNA免疫鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞变化情况，与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比，CD4+、CD8+细胞水平有较大升高（P<0.01）。动物保护性实验结果显示，当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时，有66.6%的免疫鼠受到保护。结论NSI/NS2a基因重组质粒免疫小鼠可以诱发小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。这些结果为进一步研制登革病毒DNA疫苗提供了参考依据。

登革病毒2型， NSl蛋白，基因克隆， DNA免疫

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2009年04月27日

【期刊论文】登革病毒2型E蛋白基因真核表达和DNA免疫的研究

江丽芳，高阳，江丽芳**，方丹云，曾祥凤

中国病毒学，2003，18（3）：201～205，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

将编码登革病毒2型（DV2）氨基末端80%的E蛋白的DNA片段克隆到真核表达载体pCXN2AG强启动子下游，构建成DV2E重组真核表达质粒pCXN-E。间接免疫荧光显示其可在COS-7细胞中表达。ELISA法检测pCxN2-E DNA免疫BALB/c鼠血清中的E抗体变化和维持规律，结果显示三次免疫后2周已有抗体产生，l5周时仍维持较高的水平；血清空斑减数中和实验显示其中和滴度高于1∶640：流式细胞计数仪（FAcs）检测DNA免疫鼠CD4、CD8 T淋巴细胞变化情况，与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比，CD4淋巴细胞水平略有上升，CD8+细胞水平有较大升高（P<0.01）；动物保护性实验结果显示，当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时，其保护率为60%。以上结果表明：pCXN2-E在实验动物内表达出的DV2E蛋白可以诱导免疫动物的体液免疫和细胞免疫应答，尤其是MHC.I限制性杀伤性CD8 T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的。因此，DV2 E DNA免疫为登革病毒DNA疫苗的发展进行了有益的探索。

登革病毒2型(， DV2)，， E蛋白，基因克隆， DNA免疫

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