目的：用酵母双杂交技术筛选白细胞中与NSA5TP1结合蛋白的编码基因。方法：用多聚酶链反应（PCR）法扩增NS5ATP1基因，连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落，增菌后提出质粒，转化入大肠杆菌（DH5a），提出质粒并测序进行生物信息学分析。结果：成功隆出NS5ATP1基因并在酵母细胞中表达，配合后选出在四缺（SD/-Trp-Leu-Ade-His）培养基及铺有X-a-半乳糖（X-a-gal）的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落10个，其中2个人HLA-B27；2个人亚砷酸盐转移子（arsA）；1个人单倍型E22i线粒体；1个人pyrin（MEFV）；1个人肌动蛋白素1（cofilin 1）；1个人染色体15；1个来自RP11-353N14克隆人的DNA基因，位于染色体17；1个新基因。结论：成功克隆出NS5ATP1的结合蛋白，为进一步研究HCV的作用提供了新线索。

目的 探讨慢性HBV感染中Th1/Th2应答特征及其与乙肝病毒（HBV）侵犯外周血单个核细胞（PBMC）的关系。研究对象为60例慢性HBV感染者。ELISA法检测患者PBMC体外植物血凝素（PHAP）刺激培养上清液中Th1类细胞因子（IL-2,IFN-γ）和Th2类细胞因子（IL-4, IL-10），套式多聚酶链反应（n-PCR）检测PBMC中HBVDNA。统计学处理采用t检验、方差分析和卡方检验。66.67%（40/60）的慢性HBV感染者PBMC中检出HBVDNA，其中9例血清HBVDNA阴性；慢性HBV感染者PBMC分泌Th1类细胞因子量明显低于正常对照，P<0.01（pg/mL,IL-2:54.40±17.92vs74.53±17.73），Th2类细胞因子显著高于对照组，P<0.01（pg/mL,IL-4:98.23±23.27vs29.57±11.36,IL.10:pg/mL,56.77±19.02vs25.30±8.87）；PBMC中HBVDNA阳性组与阴性组比较，IL-2水平相对高，P<0.01（pg/mL,64.40±23.73vs40.40±15.89），而IL-10相对低，P<0.05（pg/mL,53.85±18.54vs64.60±19.11），且见PBMC中HBVDNA阳性血清ALT异常发生率（47.5%,19/40）显著高于阴性组（15.0%,3/20），P<0.05。结论 慢性HBV感染时，HBV侵犯PBMC为常见事件，血清HBVDNA消失后PBMC中仍可有HBV存在；Th2优势应答为慢性HBV感染的主要Th1/Th2应答，与感染慢性化有关；HBV侵犯PBMC可改变Th1/Th2应答，在Th2优势应答前提下，Th1应答相对升高,Th2应答相对降低，与肝细胞损伤加重有关。

目的：对新基因NS5A-TP4转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析，探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能。方法：应用生物信息学（bioinformatics）技术，分析我室通过抑制性消减杂交技术筛选得到的新基因NS5A-TP4的全长编码序列，并NS5A-TP4构建基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5A-TP4. 应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5A-TP4转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测。结果：确定基因NS5A-TP4由762 nt组成，编码253 aa的蛋白。基因表达谱芯片所检测的1152条目的基因均为GenBank中登录的基因，NS5A-TP4表达质粒转染的细胞有18条差异表达基因其中12条基因表达增强，6条基因表达降低。这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、生长调节密切相关。结论：基因表达谱芯片技术可为初步探索新基因的功能提供重要的资料。本实验结果为进一步阐明NS5A-TP4生物学功能及HCV-NS5A的致病机制提供了理论依据。

探讨HcV复制水平与肝病进展的关系。方法：用竞争性逆转录聚合酶链反应（cRT—PCR）定量检测27例慢性丙肝患者（cHc）血清HcV RNA。结果：CHc患者血清HcV RNA水平变化范围10一106copies/50ul serum。13例慢性迁延性肝炎（cPH）患者血清HCV RNA平均水平(5.068±1.04，Log10copies/50ul serum)明显低于10例慢性活动性肝炎患者（cAH）（5.79±0.25）和4例肝硬化（cir）患者（5.83±0.75），P值均<0.05。血清HcV RNA水平同ALT水平间呈正相关（r=0.4997，P值<O.05）。结论：表明丙肝病毒感染后病毒血症水平低，HcV复制水平与肝损伤相关，在慢性感染中HCV仍活跃复制，并与肝病进展相关。

Twenty patients with chronic hepatitis C were investigated during the treatment with in- terferon to explore the changes of antibodies to HCV (anti-HCV). Anti-HCV was tested with recom- binant immunoblot assay (RIBA) by using three antigens (C22, C33c, and C100-3) encoded by dif- ferent regions of HCV genome. The changes of Individual antl-HCV and ALT were compared with the change of HCV RNA. The results showed that persistent disappearance of serum HCV RNA was closely related to the changes of anti-C33c (P<0.01) and anti-C100-3 (P<0.005), but there was no relation between ersistent ALT normaiity and HCV viremia clearance (P>0.05). In conclu-sion, monitoring anti-C33c and anti-C100-3 could Indicate the changes of HCV viremia. The normal-ization of ALT after interferon treatment did not indicate disappearance of HCV viremia. Key words hepatitis C;