目的构建融合基因IFN-alb/CSPII的原核表达裁体并予以表达：方法采用聚合酶链反应（PCR）从人基因组DNA中扩增出IFN-alb基因，克隆入原核表达载体pGEX-4T-1，构建原核表达载体pGEX-4T-1/IFN-alb利用PCR法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出环子孢子蛋白II区（CSPⅡ）基因。克隆入原核表达裁体pGEX-4T-1构建原核表达载体pGEX-4T-1/CSPII用限制性内切酶BamHI和EcoRI将IFN-alb从原核重组质粒pGEX-4T-1/IFN-alb中切下，克隆入经相同酶切的原核重组质粒pGEX-4T-1/CSPII中，构建融合基因的原核表达裁休pGEX-4T-1/IFN-alb/CSPⅡ融合基因IFN-alb/CSPⅡ经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，在大肠埃希茵中进行初步表达：结果构建的原核表达载体pGEX-4T-1/IEN-albpGEX-4T-1/CSPII和pGEX-4T-1/IEN-alb/CSPII经PCR和酶切鉴定与预期结果一致、证实融合基因IFN-alb/CSPⅡ拼接成功并正确地克隆人原核表达载体。在大肠埃希菌中表达出融合蛋白IFN-alb/CSPII。该融合蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分忻与理论预测值相符：经蛋白质印迹法（Westernblotting）鉴定具有免疫原性：结论构建了融合基因IFN-alb/CSPII的原核表达裁体，并在大肠埃希菌中表达了融合蛋白IFN-alb/CSPⅡ。

目的获取日本血吸虫（si）精氨酸酶（ARG）新基因的DNA编码序列及其启动子序列。实验验证ARG基因编码序列的完整性。方法以日本血吸虫成虫DNA做模板，PCR扩增ARG基因编码区的DNA序列并测序；根据siARG基因已扩增的DNA序列设计2条巢式引物，用TaKaRaLATaqPCRCloninginritroKit，扩增siARG基因的启动子序列；对已扩增得到的序列进行TATA盒的寻找以分析启动子序列的位置，实验验证我们曾获取的sjARG新基因编码序列的完整性。结果扩增得到长约1OOObpARG基因DNA序列，siARG基因DNA序列内没有内含子，与cDNA序列完全一致。对启动子序列扩增后，得到一略大于250bp的序列，测序后分析发现其中有36bp与ARG基困DNA序列的5'端重叠。因此，将精氨酸酶基因的DNA序列又向前延伸了221bp，与前面得到的序列拼接后得到一条1486bp的总序列，将该序列在NCBI上进行ORF的寻找发现其最长的ORF达1164bp，起始密码子在第156位，终止密码子在第l319位。该起始密码子前32位为TATA盒的位置。因此，确定该SiARG基因全长cDNA编码序列长应为1164bp。结论成功扩增获得了日本血吸虫精氨酸酶基因编码区的DNA序列，其不含有内含子；并扩增得到了该基因的启动子序列，从而获得了siARG基因真正的全长cDNA序列，为进一步的功能鉴定奠定了基础。

构建日本血吸虫的翻译控制肿瘤蛋白（SjTCTP）基因的杆状病毒重组供体质粒pFASTA-TCTP，用该重组转移质粒转化含有杆状病毒表达载体以构建BacmidGFP-TCTP，感染昆虫细胞进行表达。方法将已克隆的sjTCTP基因与线性化的pFAslA进行连接为pFAsTA-TCTP，使pFASTA-TCTP与DH10BAC感受菌进行转座重组，利用抗性及蓝白斑筛选重组BacmidGFP-TCTP克隆，提取BacmidGFP-TCTP转染昆虫细胞Sf9获得有感染力的病毒，利用病毒感染sf9细胞进行蛋 白表达。通过荧光镜观察、RT-PCR、SDS-PAGE和western-Blotting检测表达情况。结果获得了重组sjTCTP的杆状病毒，细胞能表达出与sjTCTP单抗结合的、分子量为23kDa左右的融合有组氨酸标签的目的蛋白。结论SjTCTP能在昆虫细胞中获得良好表达，为其的分子生物学活性研究奠定了基础。

目的扩增日本血吸虫（Si）p50亲免素（IP）基因全长eDNA和DNA序列，进行原核克隆和研究其免疫学特性。方法从sj成虫RNA中RT。PCR扩增SjpSO亲免素基因完整的编码阅读框。从sj成虫基因组中扩增其DNA序列，对其eDNA序列和DNA序列进行比较分析。寻找内含子。将其eDNA序列克隆人pET30a（+）体中，原核表达并纯化表达产物，Western。blot比较重组蛋白与sj体内相应天然蛋白的免疫原性和免疫反应性，间接免疫荧光法对p50亲免素进行组织定位。结果Sjp50IP基因DNA序列与eDNA相比，有6个内含子；重组p50IP与sj体内的天然蛋白具有相同的免疫学特性，该蛋白位于sj成虫的被膜上。结论成功扩增得到了Sjp50IP基因的全长编码区的eDNA序列和DNA序列，其DNA序列中有6个内含子：重组Sjp50IP的免疫学特性支持将该基因作为疫苗进行进一步的研究。

目的筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因，并将所发现的华支睾吸虫溶血磷脂酶（csLysoPLAH）基因编码区克隆到原核表达质粒PGEX-4T-1和真核表达质粒pcDNA3上，为进一步研究其功能奠定基础。方法对华支睾吸虫cDNA文库进行随机筛选并测序，在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析，识别华支睾吸虫新基因，并应用Motif-san、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析。根据PGEX-4T-1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的sLysoPLAHcDNA编码序列设计引物，进行PcR扩增，扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3上。构建的PGEX-4T-1-csLysoPLAH、pcDNA3-csLysoPLAH重组表达质粒经PcR、双酶切及测序证实。结果发现sLysoPLAH基因，完整阅读框含708个碱基，编码235个氨基酸，理论分子质量为25.2628ku，理论pI为6.03。序列分析表明，csLysoPLAH编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性，csLysoPLAH具有磷脂酶/羧酸酯酶保守功能域和完整的脂酶保守功能域，并含有丝氨酸酯酶特征性的标签肽（即GxsxG）。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论发现华支睾吸虫溶血磷脂酶基因，并成功构建原核和真核重组表达质粒。