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2011年06月10日

【期刊论文】添加剂促进变性还原溶菌酶复性的作用*

董晓燕, 黄艳, 孙彦

天津大学学报,2004,37(7):643-646,-0001,():

-1年11月30日

摘要

研究了多种添加剂促进变性还原溶菌酶复性的作用。考察了添加剂浓度及变性剂盐酸胍浓度对复性收率的影响。结果表明,精氨酸、乙酰胺、丙酮、硫脲及甘油均能有效促进变性溶菌酶复性,并且存在最佳的添加剂浓度使变性溶菌酶的复性收率最大。在促进复性中,乙酰胺等结构类似物与盐酸胍具有相同作用,因此,在降低复性液中盐酸胍浓度的同时,适当提高乙酰胺浓度即可获得较高的复性收率。当盐酸胍浓度为0.2mol/L时,复性收率达到90%时的乙酰胺浓度为2mol/L,但降低盐酸胍浓度至0.06mol/L时,达到相同变性收率的乙酰胺浓度需要4mol/L。甘油与盐酸胍存在着协同作用,在一定浓度的盐酸胍存在下,添加适量的甘油能获得较高的复性收率。

溶菌酶, 复性, 稀释剂, 变性

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2011年06月10日

【期刊论文】流加操作与稀释添加耦合辅助高浓度变性蛋白质复性动力学

董晓燕, 史广泉, 李琳, 孙彦

化工学报,2004,55(8):1313-1318,-0001,():

-1年11月30日

摘要

研究了流加操作与稀释添加耦合辅助高浓度变性还原溶菌酶的复性,建立了相关的过程动力学模型。利用三态复性的过程模型对实验数据进行了拟合,获得了较好的拟合效果。利用模型分析了复性过程的动力学特性,结果表明,两者耦合可在较低的盐酸胍浓度( mol·L-1)存在下使较高浓度的(5mg·ml-1)变性溶菌酶获得80%以上的复性收率;并且发现添加剂乙酰胺的辅助复性作用与盐酸胍相同,降低盐酸胍浓度,适当提高乙酰胺浓度即可使聚集体生成速率常数最小,酶的复性收率最大;但甘油与盐酸胍具有协同作用,只有在适当的盐酸胍浓度下添加甘油才可获得理想的复性效果。

复性, 流加操作, 添加剂, 乙酰胺, 甘油, 盐酸胍, 溶菌酶

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2011年06月10日

【期刊论文】水溶性醇类对溶菌酶空间结构和折叠过程的影响

董晓燕, 王玮, 白姝, 孙彦

化工学报,2006,57(1):74-78,-0001,():

-1年11月30日

摘要

利用多角度激光光散射仪和圆二色谱仪研究小分子水溶性一元醇和多元醇对溶菌酶分子的稳定性以及对变性溶菌酶的空间构象和折叠复性的影响。发现在一元醇和二元醇溶液中溶菌酶分子的稳定性均随着醇浓度的增大而提高,而变性酶分子在醇溶液中形成过多的α螺旋和β折叠等二级结构不利于酶的折叠复性;只有较低浓度的多元醇和甲醇有辅助变性溶菌酶复性的作用,其中10%甲醇、20%甘油和30%乙二醇有利于促进酶的复性。

醇, 溶菌酶, 复性, 分子相互作用, 空间结构

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2011年06月10日

【期刊论文】多肽亲配基的固相合成及其亲和作用

董晓燕, 曹俊, 俞海青,

天津大学学报,2006,39(1):29-33,-0001,():

-1年11月30日

摘要

为了促使多肽亲和配基在实际分离研究中得到广泛应用,利用Fmoc固相合成法对从噬菌体展示肽库中筛选得到的与胰岛素具有高特异性亲和的七肽片段(HWWWPAS)进行了合成。在合成中发现,肽段序列中脯氨酸的存在会严重影响合成结果。云除脯氨酸后,目标产物的收率从0%提高到11.6%;同时,七肽序列中丙氨酸的存在也会影响合成效果。若将丙氨酸除去,合成收率会明显提高(达到76%),特别是将丙氨酸更换为谷氨酸产物的收率和线度可达到70%以上。利用固定化六肽片段(HWWWES)进行亲和吸附实验的结果表明,改造后的六肽配基与原先的七肽配基具有相似的亲和吸附效果。

多肽亲和配基, Fmoc固相合成, 氨基酸序列, 亲和吸附

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2005年11月04日

【期刊论文】Size exclusion chromatography with an artificial chaperone system enhanced lysozyme renaturation

董晓燕, Xiao-Yan Dong, Ying Wang, Jin-Hui Shi, Yan Sun*

Enzyme and Microbial Technology 30(2002)792-797,-0001,():

-1年11月30日

摘要

Protein renaturation is of importance in the recovery of inclusion-body protein produced by recombinant microbial cells. It has been recognized that the artificial chaperone system, Cetyltrimethylammonium bromide and β-cyclodextrin, are effective in enhancing protein renaturation. Using chicken egg white lysozyme as a model protein, this work studied protein renaturation by size exclusion chromatography (SEC) incorporating with the artificial chaperone system. At first, a cooperative effect of the artificial chaperones and guanidinium chloride (GdmCl) on the protein renaturation was confirmed, and it was concluded that the artificial chaperone system promoted the renaturation of lysozyme (1.05mg/ml) in the presence of 1mol/liter GdmCl. Using the SEC (29.5×2.6cm I.D., packed with Sephacryl S-100h gel) incorporating with the artificial chaperones, higher renaturation yield was obtained at high flow rate (0.8-2.2ml/min). In contrast, using the SEC without the artificial chaperones, very low flow rate (i.e.<0.4ml/min) should be used to receive a comparable renaturation yield. Thus, use of the SEC incorporating with the artificial chaperone system would greatly benefit in reaching a high refolding productivity.

Size exclusion chromatography, Artificial chaperone, Lysozyme, Oxidative renaturation

合作学者

  • 董晓燕 邀请

    天津大学,天津

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