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郭佑民

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期刊论文

穿膜肽标记异硫氰酸荧光素及钆喷替酸葡甲胺行MR分子显像的探讨

郭佑民刘敏杨军乐郭晓娟徐敏段小艺  

中华放射学杂志,2006,40(2):139~143,-0001,():

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摘要/描述

目的 选择穿膜肽的基本序列之一,构建目的多肽序列标记异硫氰酸荧光素( F ITC)及钆喷替酸葡甲胺(Gd2DTPA),探讨穿膜肽携带F ITC及Gd2DTPA跨膜转运性能及MR分子显像的价值。方法 在穿膜肽9 聚精氨酸[ arginine(9)] 基础上, 构建新目的多肽序列CPP13 :LAGRRRRRRRRRK,固相合成多肽后标记F ITC (记为CPP132F ITC)和Gd2DTPA (记为CPP132DTPA2Gd);分别取CPP132F ITC和F ITC溶于无血清Dulbecco最低必须培养液(DMEM)培养基中,待HEPG2细胞及鼠骨髓干细胞爬片上生长至80%~90%汇合时,取2只30mm2 皿,弃去培养皿中培养液,一皿中加入CPP132F ITC /DMEM溶液,另一皿中加入FITC/DMEM溶液,37℃ CO2孵箱中抚育10、30、60min时依次取出1片, 磷酸平衡盐溶液(PBS)冲洗爬片后置于倒置荧光显微镜上观察细胞内出现荧光素分布的时间和部位。CPP132DTPA2Gd作用肝癌细胞株HEPG2 后,MRI研究CPP132DTPA2Gd在细胞内转运性能及MR I的特点,将PP132DTPA2Gd 溶于无血清DMEM培养基中,浓度为3mg/ml。待HEPG2细胞在100mm2培养皿中长至80%~90%汇合时,取3只皿分别加入CPP132DTPA-Gd的DMEM溶液、DTPA2Gd /DMEM溶液和DMEM溶液,孵育30min后弃去培养液,以011M PBS反复冲洗,胰酶消化,加入-ml1%琼脂糖/PBS溶液混匀,装入2ml离心管中,将3管固定于装有150ml 1%琼脂糖/PBS溶液的微量加样枪头盒中,待凝固后测定MR信号。结果 固相合成多肽成功,测定分子量为1792178,与理论值接近。纯度达到95%以上;标记荧光素后,倒置荧光显微镜观察细胞摄取显示10min时肝癌细胞株HEPG2和鼠骨髓干细胞胞质与细胞核内均出现荧光分布;CPP13标记的Gd2DTPA,作用细胞30min后MR I显示CPP132DTPA2Gd作用HEPG2细胞组呈短T1、短T2信号。3层面内3组细胞感兴趣区T1 信号强度(Ii)与琼脂糖T1 信号强度(Io)的比值及统计学分析如下:(1)号管3层面内Ii1/Io(为CPP2DTPA2Gd作用cell组管内信号值与管外烧杯内琼脂糖背景信号值的比值)分别为:2184、2160、2148;(2)号管3层面内Ii2/Io(为Gd2DTPA作用cell组管内信号值与管外烧杯内琼脂糖背景信号值的比值)分别为1115、1111、1112; (3)号管3层面内Ii3/Io(为空白cell对照组管内信号值与管外烧杯内琼脂糖背景信号值的比值)分别为1113、1111、1111。两两组间F检验: (1)与(2):F(1,2)=201188(P<01001);(1)与(3): F(1,3)=206137(P<01001);(2)与(3):F(2,3)=01529(P=01507)。说明T1WI信号强度与Gd2DTPA作用组及与单纯细胞组信号强度比较差异有统计学意义; HEPG2 细胞不摄取Gd2DTPA, 30min时信号强度与单纯细胞组信号强度间差异无统计学意义。结论 在穿膜肽基本序列基础上成功地重新构建的多肽能够携带荧光素和MR对比剂,并有效地跨膜转运进入细胞,为MR分子显像提供了1种新的重要手段。

【免责声明】以下全部内容由[郭佑民]上传于[2006年09月09日 00时32分38秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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