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何光华

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期刊论文

分离植物目的基因全长cDNA 和启动子的新方法——快速定位转录起始位点(RITIS)

何光华冯丽任茂智*罗洪发何光华*

分子植物育种学报,2006,4(1):23~28,-0001,():

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摘要/描述

启动子是调控外源基因在植物体内表达的“开关”。随着植物转基因技术的广泛应用,无论是基础研究还是应用研究,人们希望能够充分利用启动子来准确控制外源基因在植物体内的表达,使目的基因的“开”和“关”、表达的“多”和“少”、在“何地”和“何时”表达等,能够听从人的指挥,以实现植物育种的分子设计。因此,快速分离和鉴定植物体内各种特异启动子已经成为植物基因工程研究的热点和难点。本文在互补末端连接反向PCR(CELI-PCR)技术基础上建立起一种快速分离目的基因全长cDNA 和启动子序列的新方法。该方法利用CELI-PCR 进行染色体连续步移,获取足够长的目的基因及其上游基因组DNA 序列,再根据转录起始位点是目的基因转录本和启动子的分界点,其下游转录本中的外显子可通过RT-PCR 扩增,而上游启动子序列则不能被RT-PCR 扩增这一特点,借助RT-PCR 进行cDNA 连续步移,直到获得全长cDNA,确定启动子基因5' 非翻译区的位置,进而精确定位转录起始位点。从而获取目的基因准确的启动子序列和全长cDNA 序列。因此,建立在CELI-PCR 基础上的RITIS 技术,可绕过繁琐的构建cDNA 库和5'-RACE 等方法快速分离目的基因全长cDNA 和启动子序列。

【免责声明】以下全部内容由[何光华]上传于[2010年05月21日 14时38分24秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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