目的 应用噬菌体展示技术构建钠泵抑制物单链抗体库。方法 用OUA-OVA（ouabain-ovalbumin）免疫小鼠，取脾脏，分离淋巴细胞，提取mRNA，逆转录成cDNA 第一链，用简并引物经PCR 分别扩增轻、重链抗体库，经重叠延伸PCR 由Linker 将轻、重链拼接成ScFv（单链抗体），用RS 引物以ScFv 为模板进行第2 次PCR，同时在5’及3’端分别加上SfiI， NotI 酶切位点。经SfiI， NotI 酶切后，在T4 连接酶的作用下将ScFv 与Pcantab 5E噬菌粒连接，电转化进入TG1 大肠杆菌，挑取12个单菌落提取质粒用EcoR I 和Hind Ⅲ进行酶切签定，后经M13KO7 辅助噬菌体拯救，离心收集上清即为全套ScFv 基因的噬菌体表面展示文库。结果 以OUA-OVA 免疫小鼠，检测血清中抗体效价可达（1:2×106），用通用引物分别扩增出轻、重链片段的大小为325bp×1011 的转化效率转染TG1 细胞，EcoR I和Hind Ⅲ酶切后，12个单菌落所提噬菌粒DNA中有10 个切出了约为1.2×108. 经M13KO7超感染后，测噬斑滴度为9×1014pfu·L-1。结论 成功地构建了钠泵抑制物噬菌体单链抗体库。