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毛忠贵

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期刊论文

极耐热性阿拉伯糖苷酶基因的表达、纯化及酶学性质研究

毛忠贵薛业敏邵蔚蓝*

微生物学报,2004,44(2):220~225,-0001,():

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摘要/描述

采用PCR从海栖热袍菌(Thermotoga maritima)克隆出编码极耐热稳定性阿拉伯糖苷酶基因,以pET-20b为表达质粒,与其C 末端6个组氨酸标签序列融合,在大肠杆菌中得到高效表达。基因表达产物通过热处理和亲和层析柱纯化后,酶纯度达电泳均一。纯化重组酶稳定性检测表明,阿拉伯糖苷酶活性最适作用温度和最适作用pH分别为90~95℃和pH5.0~5.5,在pH4.2~8.2之间酶活力稳定,95℃的半衰期为4h;SDS2PAGE测得酶的分子量为56.57kD,与理论推算值相吻合。在所测定的底物中,阿拉伯糖苷酶仅对对硝基苯-阿拉伯呋喃糖苷(pNPAF)有专一性水解作用,其动力学参数Km值为0.18mmolPL,Vmax为139μmolPmin•mg。

【免责声明】以下全部内容由[毛忠贵]上传于[2009年01月19日 10时49分45秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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