目的　研究短双歧杆菌（Bifidobacterium breve） α-D-半乳糖苷酶的纯化及性质。方法　采用硫酸铵分级沉淀及柱层析法纯化酶蛋白，垂直板状SDS2PAGE 和native gradient PAGE 检查蛋白纯度。结果　native gradient PAGE 电泳后活性染色确定无细胞粗酶液中含有一种α-D-半乳糖苷酶，纯化后的酶蛋白是一个相对分子质量（Mr） 约为156×103 的双亚基蛋白质，等电点pH为5.3，最适反应温度为37℃，在40℃以下稳定，70℃时失去所有的酶活性。最适反应pH 为5.5～6.5，酶在pH5.5～9.5 范围内稳定。Hg+、Cu2 +、Ag+ （各1mmol/L） 和PCMB （0.01mmol/L） 强烈抑制酶活性，Co2 +、Mg2 +、Ca2 +、Mn2 +、Zn2 + （各1mmol/L） 、EDTA 和DTT（0.01mmol/L） 对酶活性没有抑制。酶专一性水解α-D-半乳糖苷键。酶对p2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷、m2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷和o2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷的Km分别为0.168mmol/L、1.07mmol/L 和0.456mmol/L， Vmax 分别为4.55μmol/ min、0.378μmol/ min 和0.614μmol/ min。结论　B. breve 的α-D-半乳糖苷酶与少数国外报道的其他双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶有相似之处，也有不同点。其Mr 不同，在60℃之内的热稳定性明显较好。