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李冠, 葛屹松, 赵晓琴
新疆大学学报(自然科学报),2003,20(1)55~58,-0001,():
-1年11月30日
选用新疆优良甜瓜未成熟子叶切块作为外植体,经吐组织培养获得再生植株。“MS为基本培养基,取3H龄子叶块外植件,选用MS+6-BA0-2.5mg/l。诱导丛生芽·最高诱导率可达89%。在整个再生体系建立讨程巾,6-BA的浓度逐渐降低。在生根培养培养基中,附加活性炭和硝酸银有利于根的诱导。在甜瓜高教再生体系基础上,用根癌农杆菌介导法将几丁质酶基囡和p-l,3。葡聚糖酶基因导入新疆甜瓜巾。经卡那霉索的抗性筛选,获得转化的再生植株,用PCR反应、点杂交及SDS-PAGF等手段,进一步研究丁再生植株的基因整合与表达情况。经PCR扩增反应和琼脂糖电泳检测,在转化植株中扩增出了特异片段,点杂交检测转化植株有阳性反应。SDS-PAGE分析表明,转化植株比对照在35。SKD处有一条明显的蛋白质谱带。其分子量与几丁质酶基因表达产物分子量相符,初步确定该基因在转化植株内得到正常表达.
甜瓜, 真菌病抗性, P-1,, 3-葡聚糖酶, 几丁质酶
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李冠, 马剑
植物生理通讯,1995.31(2):112~114,-0001,():
-1年11月30日
从瓜类瘦霉菌液体培养液中分离到一种对新疆甜瓜幼苗有明显致姜效应的毒素,用DEAE-52柱纯化得到两个组分,其中组分I的蛋白后含量低干组分I。而糖含量则高干组分I.组分I的致萎效应大于组分]。
毒素 新疆甜瓜 瓜类疫霉菌
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李冠, 赵惠新, , 李冠* 马东建, 王贤磊
,-0001,():
-1年11月30日
近年来甜瓜枯萎病蔓延迅速,危害严重,分离克隆甜瓜抗病基因,利用转基因技术改良甜瓜抗病品性是一种从根本上解决甜瓜枯萎病危害的新途径。根据已知Fom-2基因序列设计特异引物,采用RT - PCR技术从新疆甜瓜抗瘸性品种黄邑子中扩增出580bp的cDNA片段,序列分析表明它与已发表Fom-2基因具有高度同源性基因片段,命名为X-Fom-2。以X-Fom-2为探针对新疆甜瓜黄旦子、伽什瓜、红心脆、金丽-2号进行Southem blot和NoIthem blot,结果表明,X-Fom-2以多拷贝形式存在。X-Fom-2在抗病品种黄旦子、金丽2号有表达且在病原菌诱导后增强,而在感病品种伽什瓜、红心脆中没有表达。
甜瓜, 枯萎病, Fom-2基因, 基因克隆, 表达分析
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【期刊论文】影响根癌农杆菌介导甜瓜转化NP-1基因的外部因子研究
李冠, 张勇, 周小云, 何江, 李冠*
生物技术,2004,14(4):9~11,-0001,():
-1年11月30日
The cotyledons of Xinjiang cantaloupes were transfonned with strain of Agrobaarium tumefaciens LBA4404, harboring expresaon vector pBIC-35sNPl. By selection of regenerated plantlets with Kanamycin resistance and PCR assay, putative transgenic plantlets were bebeved to being obtained. In this research. the influence factors of cantaloupe transformation were discussed, the preferable protocol is 3 days cotyledon culture and re-suspended bacterium. OD600 0.6, with liquid MS before transformation.lnoculation and co-culture duration were 8~12min, 3d.And KmlOOmg/L, Amp 500mfl/L supplied to development media (MS+ BA l.Omg/L+IBA 0.2mg/L) is proper. During transfonnation, 0.2mg/L man- nitol treatment is effective (effiency increased 6.6%) but As is not so. Ihis transformation metIlod could be routinely used for the introduction of
农杆菌, 甜瓜, 遗传转化, 外部因子
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