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王嘉福, SupatATTATHOM
,-0001,():
-1年11月30日
重组质粒psC66d(Cry IAb601)转化大肠杆菌DH5a后,接种TCB培养基,经SDSPAGE电泳和电镜分析,晶胞蛋白基因在大肠杆菌细胞中得到高效表达,表达产物分子量约130KD,在细菌细胞中形成卵圆形包涵体。比较了重组菌株在不同培养基中的生长及晶胞蛋白的表达水平,结果说明重组茵株在IB及2×YT培养基中的生长及表达均较低,在TcB培养基中细菌生长良好,晶胞蛋白高效表达,表达量可达细菌总蛋白的63.4%,较出发菌株GH9601增加17.8倍。测定了纯化的晶胞蛋白对4种鳞翅目昆虫的杀虫活性。
苏芸金杆茵, 重组DNA, 杀虫晶胞蛋白, 表达
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【期刊论文】贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin基因的克隆及原核表达水
王嘉福, 代新兰., 冉雪琴, 王嘉福.**
China Poultru Vol.30 No.72008,-0001,():
-1年11月30日
采用特异性引物自贵州黑羽乌骨鸡胃部组织克隆了Ghrelin的基因,基因全长12330bp,含有4个外显子,3个内含子。采用RT—PcR技术,获得了Ghrelin cDNA版式段(563bp),Il序列分析推测,通过可变剪切可产生两mRNA,cDNA编码区与基因组中的编码区完全一致。黑羽乌骨鸡Ghrelin基因与已知鸡种比较有13~18个碱基不同,相似性为99.1~99/3%,但其氨基酸序列完全一样,表明禽类 Ghrelin。多肽高度保守。将其 Ghrehn编码区亚克隆到原II核表达载44kpTYBll中,经序列测定碱基序列正确,获得重组质:pTYBll/G。在IPTG的诱导下,重组质粒在大肠杆菌ER2566中获得表达。当ODm=0.5,IPTG浓度1mmol/L,诱导5小l时的表达量最高,融合蛋白占细胞总蛋白40%。采用几质结合的预装柱对表达产物进行l纯化,产率约为5 mg/L培养液。
乌骨鸡, Ghrelin基因, 原核表达
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