α-L-Rhamnosidases play important roles in the metabolism of plant cell walls, glycosides and bacterial biofilms. This enzyme is also used industrially for debittering citrus fruits by releasing rhamnose from the plant flavonoid naringin. Bacillus sp. GL1 α-l-rhamnosidase (RhaB) is a member of glycoside hydrolase (GH) family 78. Native and selenomethionine-derivative enzymes were crystallized at 293 K by hanging-drop vapour diffusion with polyethylene glycol 8000 as a precipitant. This is the first report of the crystallization of a family GH78 enzyme.

分离到一株假单胞菌（Pseudomonassp.）P3，该菌能够以对硝基苯酚为唯一碳源和氮源进行生长。在有外加氮源的条件下，P3降解对硝基苯酚并在培养液中积累亚硝酸根。P3有比较广泛的底物适应性，对多种芳香族化合物都有降解能力。不同金属离子对P3降解对硝基苯酚有不同的作用。葡萄糖的存在对P3降解对硝基苯酚无明显促进作用，而微量酵母粉可以大大促进P3对硝基苯酚的降解。以P3为受体菌，通过接合转移的手段将甲基对硫磷水解酶基因mpd克隆至P3菌中，获得了表达甲基对硫磷水解酶活性的基因工程菌PM，PM能够以甲基对硫磷为唯一碳源进行生长。工程菌PM具有较高的甲基对硫磷降解活性及稳定性。

用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶编码基因，构建了重组表达质粒pET29a-mpd，将其转化至EscherichiacoliBL21（DE3）中，经IPTG诱导表达，得到C2末端含有6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶，用Ni2NTA亲和层析纯化得到具有活性的甲基对硫磷水解酶。测定了环境因素对酶活性的影响及酶动力学参数。甲基对硫磷水解酶水解甲基对硫磷时，最适pH8.6～8.8，最佳反应温度15℃；Mn2+、Zn2+、Cu2+可使酶活性增加15%～20%，Ca2+、Mg2+微弱地促进酶的作用，Ni2+对酶活性几乎无影响；1mmolPLEDTA•Na2+几乎不影响酶的活性，而10mmolPLEDTA•Na2+对甲基对硫磷水解酶有较强的抑制作用。甲基对硫磷水解酶水解乙基对硫磷时，最适pH816。25℃时，该酶对甲基对硫磷的米氏常数Km为（68.6±511）μmolPL，kcat为（45±6）S-1；对乙基对硫磷的米氏常数Km为（59.5±6.0）μmolPL，kcat为（8±1）S-1。kcatPKm表明甲基对硫磷水解酶对甲基对硫磷的催化效率更高。

以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板，利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列，测序分析后提交GenBank，登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHI和PstI酶切位点，将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK，插入片段置于该载体中mpd基因的上游，并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751（pP15MK），在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下，mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达，表达产物结合在细胞膜上；发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL，是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。

通过热变性、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex-A50阴离子交换层析和CM Sephamse Fast Flow阳离子交换层析等一系列步骤从有机磷农药降解菌Plesiomonas sp. M6中获得了甲基对硫磷水解酶(Methvl parathion hydrolase, MPH, EC 3.1.8.3)的电泳纯。酶谱显示和SDS-PAGE电泳表明纯化的酶只有一条条带，其分子量约为33kD。该酶热稳定性比较高，55℃、15min处理后酶活保持稳定，最适反应pH为9.0，最适反应温度在10℃左右。动力学分析表明其对甲基对硫磷的米氏常数(Km)为2.14mmol/L，最大反应速度(Vmax)为14.08μmol/L. min，转换数(kcat)为2863s-1。