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2005年04月29日

焦新安，， Hirano Takashi ， Gu Xin-xing

细胞与分子免疫学杂志，2004，20（3）：366～369，-0001，（）：

-1年11月30日

目的：动态测定卡他性莫拉氏菌（Moraxella catarrhalis, M. cat）脱毒脂寡糖（dLOS）蛋白质结合疫苗诱导的抗体分泌细胞的应答状态。方法：以M. cat dLOS蛋白质结合疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠。应用酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测免疫小鼠不同免疫诱导部位和免疫效应部位，包括：鼻相关淋巴组织（NALT）、脾脏、颈部淋巴结、鼻内容物、肺脏和派伊尔氏结的特异性抗体分泌细胞，并同时测定血清、鼻冲洗液、肺泡灌洗液、唾液及粪便提取液中特异性IgA、IgG和IgM的水平。结果：M. cat dLOS蛋白质结合疫苗免疫小鼠的NALT、脾脏、颈部淋巴结、鼻内容物、肺脏和派伊尔氏结中，均测出分泌LOS特异抗体的抗体分泌细胞，以鼻内容物中IgA分泌细胞的数目最多，其次是在NALT和肺脏中，这与特异性抗体测定的结果相一致。结论：M. cat dLOS蛋白质结合疫苗经滴鼻免疫，能刺激产生LOS特异的黏膜和全身抗体分泌细胞的应答。ELISPOT试验具有快速、灵敏、特异的优点，为动态分析单个抗体分泌细胞应答规律提供了新方法。

抗体分泌细胞， ELISPOT，卡他性莫拉氏菌

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2005年04月29日

【期刊论文】应用噬菌体肽库技术定位沙门氏菌鞭毛蛋白上属特异性共同抗原表位

焦新安，刘文博，高崧，张扬，潘志明，王芳，张如宽，刘秀梵

畜牧兽医学报，2003, 34 (2), 183-187 ，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针，应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆，最终进行定位。经三轮筛选后，用斑点印迹法检测，得到良好的富集效果。通过免疫筛选法从第三轮筛选物中挑取了24个阳性克隆，再以斑点印迹、竞净ELISA进一步鉴定阳性克隆，证实已获得了沙门氏菌鞭毛属特异性共同抗原的模拟表位。测得的序列为SRRSFTTTE，将其与沙门氏菌共毛蛋白氨基酸序列相比较，同源性较小，但在不同血清型沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列的I区高度保守序列为RAXXT，且这种序列排列的几率为1/205，因此推断该单抗所针对的表位在该区段上。此外，以阳性克隆免疫Balb/c小鼠，并制备高免血清进行间接荧光检测和竞争ELISA鉴定，结果表明其具有优良的免疫原性和高度的特异性，这亦为模拟表位疫苗的研究提供了新思路。

沙门氏菌，鞭毛蛋白，属共同抗原表位，模拟表位，噬菌体肽库，表位定位

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2005年04月29日

【期刊论文】应用ELISPOT试验测定重组卡介苗诱导的T细胞应答

焦新安，焦新安*，， Richard Lo-man， Edith D'eriaud， Brigitte Gicquel， Nathalie Winter， Claude Leclerc，刘秀梵

中国预防兽医学报，2001，23 （1）：46～49，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

应用免疫磁性分离技术去除免疫小鼠脾脏细胞中CD4+或CD8+T细胞后，在酶联免疫斑点试验中证实表达大肠杆菌MalE蛋白的重组卡介苗（Rbcg·MalE）诱导的T细胞应答是CD4+T细胞依赖的。对MalE、PPD特异T细胞应答的动态分析结果表明，Rbcg·MalE、BCG诱导的特异CD4+T细胞应答存在Th1/Th2平衡转换现象，即起始阶段为Th1应答，一段时间后出现Th2应答，并逐步形成Th1/Th2混合应答。这些结果，为分析杆菌T细胞应答规律提供了新的认识，同时，亦表明BCG是优良的外源搞原表达与运送载体。

ELISPOT，重组BCG， Th1/， Th2应答

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2005年04月29日

【期刊论文】利用噬菌体展示肽库筛选和鉴定沙门氏菌O9抗原的模拟表位*

焦新安，张扬**，焦新安***刘文博，潘志明，高崧，张如宽，刘秀梵

中国人兽共患病杂志，2003，19 （1）：60～63，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体（3-47-O）作为分子探针，从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位，从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果经过三轮的亲和筛选，得到了两个能与O9单抗反应的强阳性单克隆扩增物gm62和gm68，其序列分别为SHHVRGGGG和YQKWYLPKS。竞争SLISA实验表明，1010转导单位噬菌体gm68对肠炎沙门氏菌与3-47-O结合的抑制率达到65%，而噬菌体gm62的抑制率仅为20%且gm68可以诱导产生针对沙门氏菌O9的抗体，而gm62则不能。结论实验结果显示九肽YQKWYLPKS是具有免疫原性的O9抗原模拟表位。

沙门氏菌， O9抗原，模拟表位，噬菌体展示肽库

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2005年04月29日

【期刊论文】鸡白痢沙门氏菌耐药性的监测研究

焦新安，潘志明，刘文博，高崧，倪振亚，张扬，刘学贤，张如宽，刘秀梵

畜牧兽医学报，2002，33（4）：377-383，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

采用WHO推荐的Kiby-Bauer法对我国部分地区1962～1999年间346株鸡白痢沙门氏菌进行了药物敏感性测定。结果表明，在近40年时间里，鸡白痢沙门氏菌苄青霉素、壮观霉素、复方磺胺、磺胺异恶唑、甲氧苄代嘧啶、羧苄青霉素、四环素、链毒素、青霉素的耐药率显著增强（P<0.01）。菌株的多重耐药明显增加。60年代以二耐菌株为主（37.0%），70年代四耐、子耐菌株居多（60.5%），80年代五耐、六耐、七耐菌株占大多数（80.2%），90年代仅七耐以上菌株就达83.7%。不同年代菌株显示出不尽相同的耐药谱，且呈现出不断增宽的趋势。通过流行病学调查发现，60年代到90年代，鸡白痢沙门氏蓖对青霉素、链毒素、磺胺类药物、四环素、卡那霉素、氯霉素、庆大霉素等药的的耐药性大多呈现出显著增强的变化趋势，这充分说明细菌耐药性的形成和发展与搞菌药物长期反复使用有着极为密切的关系。研究对于指导临诊合理用药及控制疾病流行具有重要的现实意义。

鸡白痢沙门氏菌，耐药性，变化趋势，监测，流行病学调查

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