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富路

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期刊论文

纤溶酶原激活物抑制剂-1反义RNA对主动脉内皮细胞部分功能的影响

富路梅宇李晖

中华老年医学杂志2001年10月第20卷第5期/Chin J Geriatr, Oct., 2001, Vol. 20, No. 5,-0001,():

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摘要/描述

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1 (plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)反义RNA对离体培养的主动脉内皮细胞(endothelial cell,EC) PA-I表达的作用及对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。 方法 聚合酶链反应(PCR)扩增PAI-第2外显子,将PCR产物纯化克隆后连入真核细胞表达载体pcDNA3.1(一),构建PAI-反义RNA重组质粒。将pcDNA3.1-反义PAI-1重组质粒转染EC中。通过免疫组化、免疫印迹法(Westemblot)、双抗体夹心法(ELISA)检测细胞中PAI-1表达的改变,通过免疫荧光技术观察细胞中PAI-1表达量的变化对VEGF的影响。结果转染后第3天,细胞中PAI-l含量为0.017 ng/ml,细胞浆内代表VEGF的绿色荧光最弱,表明VEGF的表达也减少;第5天,PAI-含量为0.093 ng/ ml,细胞浆内绿色荧光物质略增加;第7天,PAI-1含量为0. 143 ng/ ml,接近正常值,VECF的荧光染色接近于正常水平。 结论反义PAI-l RNA能有效阻断EC中PAI-1的蛋白合成,同时抑制细胞中VEGF的表达。

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