目的检测及克隆小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因，构建真核表达载体。方法设计寡核苷酸探针，应用原位分子杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因的mRNA表达，RT-PCR法从A20细胞总RNA中获取mCD99L2基因含编码区全长cDNA．克隆AT载体，筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定；设计含酶切位点的PCR引物，PCR获取含mCD99L2基因编码区片段，用限制性内切酶EcoR I和Xhol双酶切取所需目的片段，利用分子克隆技术与pcDNA3.1/MycHis C(+)质粒重组，对产生的重组子进行PCR双酶切鉴定，并经过测序证实。结果原位杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因mRNA呈阳性表达；RT-PCR法成功获得mCD99L2基因编码区全长cDNA序列，DNA序列测序结呆与GenBank提供的已知序列(NM_138309)比较，结果完全一致；重组质粒pcDNA3.1-mCD99L2中的插入片段经DNA测序后与GenBank中mD99L2基因相应序列比较．100%同源。结论小鼠B淋巴瘤A20细胞株存在mCD99L2基因，采用RT-PCR和T-A技术克隆了A20细胞的mCD99L2基因，成功构建了pcDNA3.1-mCD99L2真核表达载体，为下一步探索mCD99L2基因在小鼠B淋巴瘤A20细胞株中的功能奠定了实验基础。