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朱振宇
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期刊论文
DAPK1基因开放读码序列的克隆、序列分析及诱导Raji细胞凋亡*
中国病理生理杂志，2004，20（1）：88～93，-0001，（）：
目的：探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK1）在肿瘤的形成、转移中所起作用，克隆DAPK1基因的开放读码序列（ORF）。方法：根据GenBank提供的核苷酸序列，自行设计引物，用RT-PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF；用质脂体将pcDNA311（+）-DAPK1转染到Raji细胞，Hoechst33258染色观察细胞凋亡，MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响。结果：DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T，测序鉴定；分析结果显示，从K562细胞成功扩增4300bp的DAPK1基因ORF有7处突变，其中6处是同义突变，1处是基因的单链核苷酸多态性；DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA311（+），转化到Raji细胞；转染48h后，可以检测到DAPK1的表达，并可以观察到细胞发生凋亡。结论：大片段的基因可以采用RT-PCR法直接克隆，采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞；成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF，过表达的DAPK1基因可以诱导Raji细胞凋亡。
【免责声明】以下全部内容由[朱振宇]上传于[2006年10月27日 22时39分24秒]，版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点，与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。
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