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张龙现

从事球虫生物学研究

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姓名：张龙现
目前身份：
担任导师情况：
学位：
学术头衔：

博士生导师
职称：-
学科领域：

畜牧科学、动物医学
研究兴趣：从事球虫生物学研究

个人简介

张龙现，博士，教授，河南省特聘教授、河南农业大学博士研究生导师，河南农业大学学术委员会委员。兼任国家教育部高等教育本科教学指导委员会委员，国家农业部第六届兽药评审专家，国家自然科学基金同行评议专家、十三届和十四届二审专家。河南省优秀中青年骨干教师；郑州市优秀教师、河南省优秀教师，河南省学术与技术带头人（“河南省555人才”），河南省第六届教学名师。所讲授的《兽医寄生虫学》课程2005年被评为国家级精品课程，2013年入选国家精品资源共享课。主持并完成河南省杰出青年科学基金、国家自然科学基金主任专项基金、国家自然科学基金面上项目、河南省高校杰出科研人才创新工程项目，河南省高校创新人才培养计划等20多个科研课题。目前主持国家基金重点项目、国家基金重大国际合作项目、国家重大传染病专项子课题，国家卫生公益科研专项，国家科技支撑计划子课题，国家自然科学基金面上项目，河南省重大公益科研项目，河南省创新人才基金。自1989年以来长期从事球虫生物学研究，率先开展家兔肠道球虫活虫苗的免疫预防研究，证明加倍递增剂量免疫接种能够产生更为有效的免疫保护，体液免疫在兔肠道球虫免疫保护中不起决定性作用，并对家兔黄艾美耳球虫（Eimeria flavescens）的内生发育部位和药物治疗进行了系统研究。近15年来对人畜隐孢子虫开展研究，（1）发现人、多种家畜、野生动物和经济动物的隐孢子虫分子感染特征，阐明多种隐孢子虫虫种和宿主特异性的关系，发现了5个新基因型及一些新的宿主，发现绵羊主要感染隐孢子虫鹿基因型，猪感染基因型I和基因型II，奶牛以安氏隐孢子虫为优势种，禽类以贝氏隐孢子虫为优势种。河南地区人隐孢子虫主要存在3个亚型家族：Ia, Ib和 Id，鉴定出3个Ib亚型： IbA16G2, IbA19G2和IbA20G2。对河南地区人或动物的微小隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、和人隐孢子虫的遗传多样性开展研究，发现了一些新的基因亚型并对群体结构进行了初步研究。完成了鼠基因型新种命名的试验工作，新发现人兽共患兔基因型的流行病学特点和新亚型，首次详细阐述其流行病学特点和分子特征。（2）制备安氏隐孢子虫（C. andersoni）和微小隐孢子虫的单抗12个，这些单抗大多针对卵囊壁和子孢子表面抗原，其中一株单抗针对38kDa蛋白质。针对预测的微小隐孢子虫11个氨基酸转运子多肽位点，制备兔抗血清，对转运子在虫体内的分布开展研究，为进一步研究亚细胞定位、关键代谢酶解析奠定基础。成功建立贝氏隐孢子虫鸡胚培养模型、气管环培养模型，为虫体内生发育时空定位、蛋白免疫原性研究、药物筛选提供技术支撑。制备了贝氏隐孢子虫和安氏隐孢子虫的特异IgY抗体，该抗体可用于建立免疫学检测技术、免疫组化及初步治疗隐孢子虫病。建立了微小隐孢子虫、人隐孢子虫的仔猪、沙鼠、羔羊感染模型和传代模型以及火鸡隐孢子虫小鼠感染模型，并建立了多种隐孢子虫的体外感染模型。（3）阐明郑州和开封两地门诊和住院病人环孢子虫的流行病学规律，建立了环孢子虫的检测技术，证明在我国奶牛群中存在一种新的环孢子虫；发现在贾第虫基因型A中有8个AI和4个AII，在贾第虫基因型B中发现B1-B6新亚型。阐明河南养殖场猪弓形虫具有新的基因型并建立动物感染模型和细胞培养模型。。基于隐孢子虫超微结构观察提出裂殖子释放方式的多样性的观点。出版专著、译著、教材和科普著作20多部，发表论文、译文等近300篇，其中SCI论文43篇，影响因子合计125以上，申报发明专利和实用专利各4项。先后获得国家教育部和河南省科技进步贰等奖4项，三等奖4项。
目前兼任中国畜牧兽医学会高级会员，中国家畜寄生虫学会第七届常务理事兼秘书长，河南省畜牧兽医学会第八届理事会副理事长，中国原生动物学会理事，中国动物学会寄生虫专业委员会常务理事。国际原生动物学会会员，美国微生物学会会员。

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2012-12-28

【期刊论文】Multilocus Sequence Subtyping and Genetic Structure of Cryptosporidium muris and Cryptosporidium andersoni

张龙现， Rongjun Wang， Fuchun Jian， Longxian Zhang， Changshen Ning， Aiqin Liu， Jinfeng Zhao， Yaoyu Feng， Meng Qi， Helei Wang， Chaochao Lv， Guanghui hao， Lihua Xiao

PLoS ONE 7(8): e43782，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

Cryptosporidium andersoni， Cryptosporidium muris， genotype

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2012-12-28

【期刊论文】Characteristics of Cryptosporidium transmission in pre-weaned dairy cattle in Henan, China

张龙现， . Rongjun Wang， Helei Wang， Yanru Sun， Longxian Zhang， Fuchun Jian， Meng Qi， Changshen Ning， and Lihua Xiao

Journal of Clinical Microbiology, 49(3): 1077-1082，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

cryptosporidium， cattle

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2012-12-28

【期刊论文】Molecular Identification of a Rare Subtype of Cryptosporidium hominis in Infants in China

张龙现， . Huili Zhu，， Jinfeng Zhao， Rongjun Wang， Longxian Zhang.

PLoS ONE，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

Cryptosporidium

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2007-05-22

【期刊论文】PCR-RFL P 鉴定隐孢子虫种类研究

张龙现，，蒋金书，刘群，宁长申，赵金凤，刘红英

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 2004, 35 (5), 555-559，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为快速、准确鉴别人畜隐孢子虫种类,建立了巢式PCR扩增隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域, 扩增片段测序结果表明:安徽牛源分离株(Cryptosporidium muris) 781 bp;北京鸡源分离株(C. baley i)776 bp;北京牛源分离株(C. muris)781 bp;河南牛源分离株(C. muris)725 bp;长春牛源分离株(C. muris)776 bp;宁夏鸡源分离株(C. bailey i)725 bp,该片段位于18S rRNA 全序列271～1103 bp之间。使用S sp I 限制性内切酶消化发现C. muris 产生418～420 bp和305～363 bp两个片段,C. bailey i产生544～545 bp和185～231 bp两个片段。所检测的6个分离株可以显著区分为C. muri和C. bailey i两个种,所建立的PCR-RFL P可以有效鉴别隐孢子虫种类。

隐孢子虫， PCR， RFLP

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2007-05-22

【期刊论文】Epidemiological evidences from China assume that psychiatric-related diseases may be associated with Toxoplasma gondii infection

张龙现， Sha Zhu， Mao-Feng Guo， Qing-Chuan Feng， Jian-Ming Fan & Long-Xian Zhang

Neuroendocrinology Letters Volume 28, No. 2, 2007，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

In recent years, the effect of Toxoplasma gondii infection on psychiatric-related aspects has been increasingly recognized. T. gondii has a high affinity for brain tissue where tachyzoites may form tissue cysts and persist life long. In recent years, 15 serological surveys about T. gondii infection and psychiatric diseases have been carried out in different areas in China. Studies showed that the prevalence of antibodies against T. gondii in psychotic patients was much higher than in normal persons; statistically differences were significant. Studies also reported that raising cats or enjoying the habit of eating raw or under cooked meet were potential risk factors for the infection of T. gondii. The epidemiological and serological evidence support the hypothesis that some psychiatric diseases such as schizophrenia or mental retardation might be linked to T. gondii infection.

toxoplasmosis， antibody， psychiatric-related disease

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2007-05-22

【期刊论文】鹌鹑源火鸡隐孢子虫生物学特性研究

张龙现，孙铭飞，宁长申，菅复春，赵金凤，王荣军，刘红英

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 2006, 37 (5)< 485-491，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

利用鹌鹑源火鸡隐孢子虫( Cryptosporidium meleagridis)分别感染雏鸡、雏鸭、雏鸵鸟和小白鼠研究其致病性。结果能成功感染雏鸡、雏鸭和小白鼠,但不能感染雏鸵鸟。2个感染组雏鸡主要在感染后第3天引起雏鸡强烈的腹泻症状,但非免疫抑制组比免疫抑制组症状稍轻,此外,免疫抑制组的鸡出现了多个排卵囊高峰;感染相同剂量的2个试验组雏鸭的排卵囊显露期均较雏鸡短,非免疫抑制组雏鸭的排卵囊规律呈一过性,2组雏鸭均未出现明显的临床症状;免疫抑制组小白鼠出现多个排卵囊高峰,显露期持续24 d,正常组小白鼠的排卵囊规律呈一过性。根据肠黏膜涂片,抗酸染色观察发现主要虫体寄生于雏鸭的回肠;通过病理组织学切片和电镜观察发现虫体主要寄生于雏鸡的回肠和小白鼠的十二指肠,但均主要引起肠绒毛的大量脱落,黏膜上皮细胞肿胀,炎性细胞浸润。试验证明鸭为鹌鹑源Cmeleagridis的新宿主,但敏感性较低;鹌鹑源Cmeleagridis不感染非洲雏鸵鸟。发现鹌鹑源Cmeleagridis在鹌鹑、鸡和鸭体内寄生部位与小鼠体内寄生部位有明显差异。

火鸡隐孢子虫，鹌鹑，交叉感染，电镜，生物特性

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2007-05-22

【期刊论文】鹌鹑源火鸡隐孢子虫在小白鼠和雏鸡体内内生发育阶段的超微结构比较

张龙现，孙铭飞，宁长申，菅复春，邵兆霞，梁楠，王进产，王荣军

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 2006, 37 (7), 693-699，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

用鹌鹑源火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis)卵囊分别感染昆明系小白鼠和固始雏鸡,用透射电镜和扫描电镜观察比较了C1meleagridis 在两种试验动物体内的内生发育虫体超微结构和致病性的差异。利用扫描电镜观察发现,鹌鹑源火鸡隐孢子虫(C1meleagridis)在小白鼠和雏鸡体内的寄生部位有较大差异,在小白鼠体内寄生于十二指肠,但在雏鸡体内主要寄生于回肠; C1meleagridis 深嵌于小白鼠肠微绒毛丛内,微绒毛较为完整;但在雏鸡回肠,C1meleagridis 似黏附在肠黏膜表面,微绒毛脱落明显,对雏鸡致病性明显比对小白鼠的致病性强。利用透射电镜在两种试验动物的样品中均观察到不同发育阶段的滋养体、裂殖体和大配子体以及正在孢子化的卵囊。滋养体和裂殖体在发育过程中可明显见到粗面内质网结构,裂殖生殖中期阶段粗面内质网尤其发达;小白鼠体内的C1meleagridis 虫体与肠黏膜接触处形成一凹陷,寄生部位较深,而在雏鸡体内无此现象。此外,利用透射和扫描电镜均观察到虫体寄生部位周围微绒毛密度高而且也比其它部位长。形成这些差异的原因有待于进一步探讨。

火鸡隐孢子虫，小白鼠，雏鸡，超微结构，内生发育

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2007-05-22

【期刊论文】贝氏隐孢子虫不同感染剂量对樱桃谷鸭的致病性

张龙现，臧为民，宁长申，孙铭飞，邵兆霞，刘红英，王进产

中国兽医学报2006年7月第26卷第4期/Chin J Vet Sci July 2006, Vol. 26, No. 4，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为了确定贝氏隐孢子虫对鸭的致病性,本试验分为2×105、4×105、8×105、16×105、32×105、64×105个卵囊剂量组,实验感染2日龄樱桃谷品种雏鸭。从感染鸭的排卵囊情况、临床症状、组织病理学变化、病理形态学变化比较了不同剂量组的致病情况。结果表明,贝氏隐孢子虫主要引起呼吸困难症状,气管炎和法氏囊炎病变。其致病性与剂量有明显的相关性。贝氏隐孢子虫有较强致病性,而且病程较长,但其致死率较低。

贝氏隐孢子虫，樱桃谷鸭，致病性，扫描电镜

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2007-05-22

【期刊论文】贝氏隐孢子虫对丝毛乌骨鸡的致病性试验

张龙现，宁长申，高葆真，唐锐茂，许兆孟，赵金凤

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 1999, 30 (5), 474-479，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

2日龄丝毛乌骨鸡经口接种贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)卵囊2×106个/只,潜隐期4d,排卵囊开放期18d,排卵囊高峰期为感染后(PID) 7～ 14d。呼吸道症状出现于PID10,死亡率为13.3%(2/15)。扫描电镜观察发现气管纤毛脱落,寄生有各阶段发育虫体及杆形细菌和渗出的红细胞;法氏囊也寄生有大量虫体,粘膜上皮细胞肥大,微绒毛脱落,PID20在法氏囊粘膜表面见有许多虫体逸出后留下的带虫空泡。试验证明丝毛乌骨鸡为贝氏隐孢子虫的新宿主。使用扫描电镜系统观察了贝氏隐孢子虫感染引起的组织形态学病理变化。

丝毛乌骨鸡，贝氏隐孢子虫，扫描电镜

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2007-05-22

【期刊论文】贝氏隐孢子虫内生发育虫体的扫描电镜观察

张龙现，宁长申，高葆真，郎利敏，吴宁鹏，刘忠虎，宋建国，赵金凤，唐锐茂

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 2000, 31 (4), 341-348，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

贝氏隐孢子虫内生发育各阶段虫体寄生于气管和法氏囊的微绒毛丛中,鸭对贝氏隐孢子虫的易感性低于鸡和丝毛乌骨鸡。滋养体呈球形,平均直径1.3μm;type Ⅰ裂殖体,平均直径2.4μm～310μm,内含8个裂殖子,呈逆时针旋涡状或呈桔瓣状排列;type Ⅱ裂殖体内含4个裂殖子,两种类型裂殖体的裂殖子之间填充着颗粒状残体并包围着一个大的球形残体。成熟裂殖子逸出的方式分为4种类型。裂殖子大小为310 ×016μm ,呈香蕉形。大配子体呈球形直径313μm～412μm,小配子体直径为3μm～316μm。小配子呈子弹状,大小为112μm ×013μm ,并观察到成熟小配子的释放方式。带虫空泡可分为无球形残体和有球形残体两类,根据观察结果推测带虫空泡基部的梳状结构不具备营养器官的功能,营养器官应为带虫空泡的底部。

贝氏隐孢子虫，内生发育，扫描电镜

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2007-05-22

【期刊论文】PCR-RFL P 鉴定隐孢子虫种类研究

张龙现，，蒋金书，刘群，宁长申，赵金凤，刘红英

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 2004, 35 (5), 555-559，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

隐孢子虫， PCR， RFLP

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2007-05-22

【期刊论文】Epidemiological evidences from China assume that psychiatric-related diseases may be associated with Toxoplasma gondii infection

张龙现， Sha Zhu， Mao-Feng Guo， Qing-Chuan Feng， Jian-Ming Fan & Long-Xian Zhang

Neuroendocrinology Letters Volume 28, No. 2, 2007，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

toxoplasmosis， antibody， psychiatric-related disease

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2007-05-22

【期刊论文】鹌鹑源火鸡隐孢子虫在小白鼠和雏鸡体内内生发育阶段的超微结构比较

张龙现，孙铭飞，宁长申，菅复春，邵兆霞，梁楠，王进产，王荣军

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 2006, 37 (7), 693-699，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

火鸡隐孢子虫，小白鼠，雏鸡，超微结构，内生发育

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2007-05-22

【期刊论文】鹌鹑源火鸡隐孢子虫生物学特性研究

张龙现，孙铭飞，宁长申，菅复春，赵金凤，王荣军，刘红英

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 2006, 37 (5)< 485-491，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

火鸡隐孢子虫，鹌鹑，交叉感染，电镜，生物特性

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2007-05-22

【期刊论文】贝氏隐孢子虫不同感染剂量对樱桃谷鸭的致病性

张龙现，臧为民，宁长申，孙铭飞，邵兆霞，刘红英，王进产

中国兽医学报2006年7月第26卷第4期/Chin J Vet Sci July 2006, Vol. 26, No. 4，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

贝氏隐孢子虫，樱桃谷鸭，致病性，扫描电镜

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2007-05-22

【期刊论文】人兽共患隐孢子虫种类和基因型

张龙现，朱惠丽，宁长申，党海亮，李家诚

，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

隐孢子虫（Cryptosporidiosis）目前已经成为一种重要的肠道病原体，备受关注。该病原具有广泛的宿主类型，可寄生于禽类、哺乳类、爬行类和两栖类等240多种的人和动物。人类最常见的症状是腹泻，该病已被列为引起人类最常见的6种腹泻疾病之一。据统计, 国外发展中国家和发达国家腹泻病人的隐孢子虫感染率分别为4 %～20 %和0﹒6 %～20 % , 我国腹泻病人的隐孢子虫感染率为1﹒4%～13.3%，儿童的感染率显著高于成年人，隐孢子虫的传播主要是粪—口途经或间接通过污染的环境、食物和水传播。目前，人兽共患隐孢子虫共有8个种和1个基因型，即人隐孢子虫（C. hominis）、小球隐孢子虫（C. parvum）、犬隐孢子虫（C. canis）、猫隐孢子虫（C. felis）、火鸡隐孢子虫（C. meleagridis）、小鼠隐孢子虫（C. muris）、猪隐孢子虫（C.suis）、安氏隐孢子虫（C. andersoni），还有小球隐孢子虫（C. parvum）的鹿基因型。本文分别叙述了各个种类及基因型的生物学特征和分子学特征，为进一步研究虫株的分布、进化特征, 以及隐孢子虫人兽之间的传播途径提供了坚实的理论基础。

隐孢子虫，传播途径，种类，基因型

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2007-05-22

【期刊论文】巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

张龙现，，蒋金书，刘群，宁长申，朱引洁，吴绍强

畜牧兽医学报/Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica 2003, 34 (5), 509-514，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR( Primary-PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested-PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325 bp和820 bp。优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验。建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2186×103个/ml和≤2186个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化,其起始PCR和巢式PCR 粪便中卵囊最低检测值分别为2186×107个/g和≤2186个/g。有望发展为试剂盒。

隐孢子虫卵囊，巢式PCR