利用重组大肠杆菌Ⅱ21中的谷胱甘肽合成酶系和面包酵母WSH2J7中的ATP生物合成酶系，构建了一个以葡萄糖为能源的种间耦合ATP再生系统。经过通透性处理的酵母细胞几乎不能消耗葡萄糖。在反应体系中添加1mmol/LAMP和0105mmol/LNADH，即可启动酵母的酵解途径。提高耦合系统中的葡萄糖浓度，可促进GSH的合成。当葡萄糖浓度为400mmol/L时，系统内GSH浓度达到1014mmol/L（312g/L）。Mg2+缺乏时，耦合系统和外加ATP的非耦合系统均不能合成谷胱甘肽。耦合系统中Mg2+与ATP 形成螯合物，可能是导致耦合系统中GSH产量较低的原因。在耦合系统中补加Mg2+，反应6h时GSH浓度达到1413mmol/L（414g/L）。

以甲酚红作指示剂，在加有酪氨酸的固态培养基上，根据甲酚红由黄变红所形成的变色圈的大小筛选酪氨酸酚解酶高产突变株是一种平板快速筛选方法。弗氏柠檬酸细菌ATCC8090菌株经紫外线和亚硝基胍诱变处理后，经该法筛选得到突变株C37230，该菌株产酪氨酸酚解酶达125U/g干菌体，较出发菌株提高232%。连续5代传代试验表明，突变株C37230 产酶稳定。

以基因组DNA为模板，利用PCR技术从弗氏柠檬酸细菌（Citrobacter freundii）中扩增得到含有酪氨酸酚解酶基因的DNA片段，定向连接到质粒pUC118上，得到重组质粒pTPL，将此重组质粒转化到受体菌E. coli XL-1-BlueMRF中，通过蓝白斑鉴定挑出阳性菌株。从此阳性菌株中提取质粒pTPL并将此质粒转入到E. coli JM109中，用E. coli JM109（pTPL）制备高活性的酪氨酸酚解酶。对质粒稳定性的研究表明，E. coli JM109（pTPL）在无选择压力下37 ℃连续培养50代以上，质粒丢失率仅有15%，说明质粒基本稳定。

通过对合成体系各组分对产物形成的影响的研究，分别求得了底物邻苯二酚、丙酮酸及乙酸氨的表观米氏常数、表观底物抑制常数和最适底物浓度，并得出合成左旋多巴的最适反应体系为：1%丙酮酸，1.2%邻苯二酚，2%乙酸铵，0.1%EDTA，0.2%亚硫酸钠，用氨水调pH至8.0。加入从与合成体系等体积培养液中收获的重组大肠杆菌细胞，于15℃反应16h，L-DOPA 的产量为15.36g/L。

A fi-N-acetylglucosaminidase gene (nag84A) was cloned from Clostridium paraputr$cum M-21 in Escherichia coli. The nag84A gene consists of an open reading frame of 4647 bp encoding 1549 amino acids, with a deduced molecular weight of 174,311, which have a catalytic domain belonging to family 84 of the glycoside hydrolases. Nag84A was purified from a recombinant E. coli and characterized. Although Nag84A exhibited high homology to the hyaluronidase from Clostridium perfringens, it did not degrade hyluronic acid. The enzyme hydrolyzed chitooligomers such as di-, tri-, tetra-, penta- and hexa-N-acetylchitohexaose, and synthetic substrates such as 4-methylumbelliferyl N-acetyl fi-D-glucosaminide (4-MU-(GlcNAc)], but did not hydrolyze 4-MU-fl-D-glucoside,4-MU-a-D-glucoside, 4-MU-a-D-GlcNAc, 4-MU-a-D-galactoside, 4-MU-fl-D-xyloside, PNPP-D-galactoside, and PNP-a-D-xyloside. The enzyme was optimally active at 5O℃ and pH 6.5, and the apparent K, and Vm,, values for 4-MU-(GlcNAc) were 8.5pM and 1.39 ymol/min/mg of protein, respectively. SDS-PAGE, zymogram, and immunological analyses suggested that Nag84A was inducible by ball-milled chitin. Since Nag84A has a high molecular weight with a family 84 catalytic domain with high homology to hyaluronidases but no hyaluronidase activity, the enzyme is a novel j3-N-acetylglucosaminidase different from others reported having low molecular weights and belonging to family 3 and family 18.

以野生型大肠杆菌E. coliⅡ为宿主细胞，转化带有编码谷胱甘肽合成酶系的基因gshⅠ和gshⅡ的质粒pGH501，获得了一株谷胱甘肽合成活性、质粒稳定性和传代稳定性俱佳，并且能够重复使用的重组大肠杆菌E. coli Ⅱ21。该菌株经过甲苯处理后，能够在胞外积累4g/L左右的谷胱甘肽（GSH）。在合成反应体系中，提高L2谷氨酸浓度可促进GSH合成，但L2半胱氨酸浓度增大到20mmol/L后会抑制GSH的合成。根据GSH合成反应中能量辅因子的变化情况，提出E. coliⅡ21细胞控制的GSH合成反应机理：由谷胱甘肽合成酶（GSH2Ⅱ）控制的第二步反应的能量供体是ADP而非ATP，该反应是整个GSH合成反应的限速步骤，高浓度ADP可能会抑制GSH2 Ⅱ的活性。在GSH合成反应体系中添加100mmol/L的L2丝氨酸-硼酸钾混合物，可以有效地防止GSH的进一步降解，反应3h后，GSH产量达到2310mmol/L（约711g/L）。

在黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）的限氮浸没式培养中，研究了不同条件对选择性合成木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）的作用。LiP只在很窄的氮源浓度范围内（0.8～1.8mmol/L）才能测到，而MnP在较宽浓度范围内（0.4～1.8mmol/L）表现出较高的酶活水平.培养基中缺乏Mn2+不能合成MnP，但可以得到活力较高的LiP。[Mn2+]在0.06～0.84mmol/L时可获得LiP。添加微量Mn2+即可获得较高活力的MnP，此后增加Mn2+对MnP的活力影响不大，直至浓度为3.36mmol/L才表现出明显的抑制作用。通纯氧可使LiP活力提高50%，但对MnP影响不大。

在黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）限氮浸没式培养中，获得了含木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）、只含LiP或MnP以及无LiP和MnP 的4种培养物，考察了LiP，MnP及菌球在染料脱色过程中的作用。结果表明，4 种培养物对6种染料都有明显的脱色效果，甲基橙、橙I、次甲基蓝脱色率在90%左右，刚果红、直接湖蓝脱色率在80%左右，结晶紫脱色率在60%左右。无酶情况下染料的脱色主要是菌球的吸附，有酶情况下染料的脱色主要是酶的降解。菌球在脱色过程中除了吸附染料外，还起到提供H2O2和藜芦醇的作用，促进了染料的降解。

Abstract A b-N-acetylglucosaminidase gene (nag3A) from Clostridium paraputrificum M-21 was cloned in Escherichia coli. The nag3A gene consists of an open reading frame of 1,239-bp, encoding 413 amino acids with a deduced molecular weight of 45,531 Da. Nag3A is a single domain enzyme containing a family 3 glycoside hydrolase catalytic domain. Nag3A was purified from recombinant E. coli and characterized. The enzyme hydrolyzed chitooligomers such as di-N-acetylchitobiose, tri-N-acetylchitotriose, tetra-N-acetylchitotetraose, penta-N-acetylchitopentaose, hexa-N-acetylchitohexaose, ballmilled chitin, and synthetic substrates such as 4-methylumbelliferyl N-acetyl b-d-glucosaminide [4-MU-(Glc-NAc)], but had no activity at all against p-nitrophenyl-bd-glucoside, p-nitrophenyl-b-d-xyloside, or p-nitrophenyl-b-d-galactosamine. The enzyme was optimally active at 50℃ and pH 7.0, and the apparent Km and Vmax values for 4-MU-(GlcNAc) were 7.9μM and 21.8μmol min-1mg protein-1, respectively. SDS-PAGE, zymogram, and immunological analyses suggested that this enzyme is induced by ball-milled chitin.

研究了不同浓度电子传递链抑制剂（鱼藤酮和抗霉索A）和F. F. ATPase抑制剂（寡霉索）对光滑球拟酵母胞内ATP水平、葡萄糖消耗速度、糖酵解途径关键酶的影响在培养液中添加10m；儿鱼藤酮和抗霉索A，相对于对照组，胞内ATP分别下降了43%和27.7%，使糖酵解关键酶磷酸果糖激酶fPFK）的活性分别提高340%和230%，从而导致葡萄糖消耗速度增加360%和240%，丙酮酸生成速度提高了17%和8.5%改变胞内ATP水平并不影响糖酵解途径其他关键酶HK、PK活性微量的寡霉索（0.05mg/L）可使胞内ATP含量下降64.3%，当培养液中寡霉索浓度达到0.4mg/L时，细胞不能继续生长，葡萄糖消耗速度和丙酮酸的生成速度却随着寡霉索浓度（小于06mg/L1的增加而增加表明氧化磷酸化途径中，ATPase决定着ATP的生成降低胞内ATP含量能显著提高PFK活性（γ2=0.9971），葡萄糖消耗速度（γ2=0.9967）以及丙酮酸生产速度（γ2=0.965），葡萄糖消耗速度的增加是糖酵解途径中关键酶PFK活性（γ2=01958）和PK活性（γ2=0.8706）增加所导致的这一结果有利于揭示真核微生物细胞中氧化磷酸化与中心代谢途径（酵解）的关系。