李华钟
工业微生物菌种选育与改良;微生物制药。
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- 姓名:李华钟
- 目前身份:
- 担任导师情况:
- 学位:
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学术头衔:
博士生导师
- 职称:-
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学科领域:
物理海洋学
- 研究兴趣:工业微生物菌种选育与改良;微生物制药。
李华钟,男,1958年11月出生,1982年毕业于山东大学微生物学专业,获理学学士学位;1990年获无锡轻工业学院发酵工程工学硕士学位;2006年获日本三重大学博士学位。1987-1988年赴英国Strathclyde大学访问学者;2000-2001年赴日本三重大学高级访问学者;2002-2006年受日本学术振兴会资助在日本三重大学进行论文博士研究。2002年至今为江南大学任教授、博士生导师;2005.1-2007.1担任江南大学医学院院长;2007.12至今担任江南大学教务处处长、设备处处长。1995年起担任江苏省微生物学会理事,现任常务理事兼副理事长;2001年起担任中国微生物学会理事。
在工业微生物菌种选育与改良方面,参加了国家“七五”课题《大容积发酵罐凝聚性酵母的选育》,研究建立了优良啤酒酿造酵母选育技术,试制成功“啤酒酵母发酵性能试验机(可自动控温EBC发酵管)并提供给国内10余个大中型啤酒企业,研究开发的“啤酒生产污染微生物的检测技术”已在多家啤酒企业得到应用,完成了横向合作课题“采油微生物筛选”和中日合作课题“氢气产生细菌Clostridium paraputrificum 几丁质分解酶的分子生物学研究”。在微生物制药方面,主要通过重组DNA技术,构建用于生物制药的微生物菌种,完成的课题包括“ATP再生系统的构建及在谷胱甘肽生物合成中的应用(霍英东基金项目)”、“乳酸乳球菌中谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽氧化物酶的生理作用(国家自然科学基金30300009)”、“构建重组细菌生物合成左旋多巴(已经转让给企业)”、“TAFI抑制因子CPI的克隆与表达”。出版教材和专著3本,发表论文50余篇。在科研方面获江苏省科技进步二等奖1项(2003年);在教学成果获江苏省高等教育成果一等奖、二等奖各1项(1993年、2005年)。
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【期刊论文】具有高谷胱甘肽合成活性重组大肠杆菌的构建及合成反应过程*
李华钟, 李寅, 林金萍, 陈坚**
微生物学报,2001,41(1):16~24,-0001,():
-1年11月30日
以野生型大肠杆菌E. coliⅡ为宿主细胞,转化带有编码谷胱甘肽合成酶系的基因gshⅠ和gshⅡ的质粒pGH501,获得了一株谷胱甘肽合成活性、质粒稳定性和传代稳定性俱佳,并且能够重复使用的重组大肠杆菌E. coli Ⅱ21。该菌株经过甲苯处理后,能够在胞外积累4g/L左右的谷胱甘肽(GSH)。在合成反应体系中,提高L2谷氨酸浓度可促进GSH合成,但L2半胱氨酸浓度增大到20mmol/L后会抑制GSH的合成。根据GSH合成反应中能量辅因子的变化情况,提出E. coliⅡ21细胞控制的GSH合成反应机理:由谷胱甘肽合成酶(GSH2Ⅱ)控制的第二步反应的能量供体是ADP而非ATP,该反应是整个GSH合成反应的限速步骤,高浓度ADP可能会抑制GSH2 Ⅱ的活性。在GSH合成反应体系中添加100mmol/L的L2丝氨酸-硼酸钾混合物,可以有效地防止GSH的进一步降解,反应3h后,GSH产量达到2310mmol/L(约711g/L)。
谷胱甘肽,, 重组大肠杆菌,, 构建,, 生物合成,, 反应机理
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李华钟, 李寅, 林金萍, 陈坚**
微生物学报,2001,41(2):191~197,-0001,():
-1年11月30日
利用重组大肠杆菌Ⅱ21中的谷胱甘肽合成酶系和面包酵母WSH2J7中的ATP生物合成酶系,构建了一个以葡萄糖为能源的种间耦合ATP再生系统。经过通透性处理的酵母细胞几乎不能消耗葡萄糖。在反应体系中添加1mmol/LAMP和0105mmol/LNADH,即可启动酵母的酵解途径。提高耦合系统中的葡萄糖浓度,可促进GSH的合成。当葡萄糖浓度为400mmol/L时,系统内GSH浓度达到1014mmol/L(312g/L)。Mg2+缺乏时,耦合系统和外加ATP的非耦合系统均不能合成谷胱甘肽。耦合系统中Mg2+与ATP 形成螯合物,可能是导致耦合系统中GSH产量较低的原因。在耦合系统中补加Mg2+,反应6h时GSH浓度达到1413mmol/L(414g/L)。
重组大肠杆菌,, 面包酵母,, 种间耦合ATP再生系统,, 谷胱甘肽,, 生物合成,, 构建
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【期刊论文】弗氏柠檬酸细菌酪氨酸酚解酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达
李华钟, 孙伟, 刘吉泉, 陈坚
工业微生物,2001,31(3):9、01、11,-0001,():
-1年11月30日
以基因组DNA为模板,利用PCR技术从弗氏柠檬酸细菌(Citrobacter freundii)中扩增得到含有酪氨酸酚解酶基因的DNA片段,定向连接到质粒pUC118上,得到重组质粒pTPL,将此重组质粒转化到受体菌E. coli XL-1-BlueMRF中,通过蓝白斑鉴定挑出阳性菌株。从此阳性菌株中提取质粒pTPL并将此质粒转入到E. coli JM109中,用E. coli JM109(pTPL)制备高活性的酪氨酸酚解酶。对质粒稳定性的研究表明,E. coli JM109(pTPL)在无选择压力下37 ℃连续培养50代以上,质粒丢失率仅有15%,说明质粒基本稳定。
Citrobacter freundii, E., coli, pTPL质粒, 酪氨酸酚解酶, 质粒稳定性
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李华钟, 李静
食品与发展工业,27(4):61、71、81、91,-0001,():
-1年11月30日
以甲酚红作指示剂,在加有酪氨酸的固态培养基上,根据甲酚红由黄变红所形成的变色圈的大小筛选酪氨酸酚解酶高产突变株是一种平板快速筛选方法。弗氏柠檬酸细菌ATCC8090菌株经紫外线和亚硝基胍诱变处理后,经该法筛选得到突变株C37230,该菌株产酪氨酸酚解酶达125U/g干菌体,较出发菌株提高232%。连续5代传代试验表明,突变株C37230 产酶稳定。
酪氨酸酚解酶, 快速筛选方法, 弗氏柠檬酸细菌, 甲酚红, 诱变
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李华钟, 孙伟, 王树英, 陈坚
工业微生物,2002,32(2):5~9,-0001,():
-1年11月30日
通过对合成体系各组分对产物形成的影响的研究,分别求得了底物邻苯二酚、丙酮酸及乙酸氨的表观米氏常数、表观底物抑制常数和最适底物浓度,并得出合成左旋多巴的最适反应体系为:1%丙酮酸,1.2%邻苯二酚,2%乙酸铵,0.1%EDTA,0.2%亚硫酸钠,用氨水调pH至8.0。加入从与合成体系等体积培养液中收获的重组大肠杆菌细胞,于15℃反应16h,L-DOPA 的产量为15.36g/L。
左旋多巴, 合成, 优化, 重组大肠杆菌
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【期刊论文】黄孢原毛平革菌选择性合成木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶
李华钟, 章燕芳, 华兆哲, 陈坚
过程工程学报,2002,2(2):137~141,-0001,():
-1年11月30日
在黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)的限氮浸没式培养中,研究了不同条件对选择性合成木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)的作用。LiP只在很窄的氮源浓度范围内(0.8~1.8mmol/L)才能测到,而MnP在较宽浓度范围内(0.4~1.8mmol/L)表现出较高的酶活水平.培养基中缺乏Mn2+不能合成MnP,但可以得到活力较高的LiP。[Mn2+]在0.06~0.84mmol/L时可获得LiP。添加微量Mn2+即可获得较高活力的MnP,此后增加Mn2+对MnP的活力影响不大,直至浓度为3.36mmol/L才表现出明显的抑制作用。通纯氧可使LiP活力提高50%,但对MnP影响不大。
黄孢原毛平革菌, 木质素过氧化物酶, 锰过氧化物酶, 选择性合成
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【期刊论文】黄孢原毛平革菌合成的木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶及其菌球在染料脱色过程中的作用
李华钟, 章燕芳, 华兆哲, 陈坚
过程工程学报,2002,2(2):246~251,-0001,():
-1年11月30日
在黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)限氮浸没式培养中,获得了含木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)、只含LiP或MnP以及无LiP和MnP 的4种培养物,考察了LiP,MnP及菌球在染料脱色过程中的作用。结果表明,4 种培养物对6种染料都有明显的脱色效果,甲基橙、橙I、次甲基蓝脱色率在90%左右,刚果红、直接湖蓝脱色率在80%左右,结晶紫脱色率在60%左右。无酶情况下染料的脱色主要是菌球的吸附,有酶情况下染料的脱色主要是酶的降解。菌球在脱色过程中除了吸附染料外,还起到提供H2O2和藜芦醇的作用,促进了染料的降解。
黄孢原毛平革菌, 木质素过氧化物酶, 锰过氧化物酶, 菌球, 染料, 脱色
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【期刊论文】曝气式反应器中木质素过氧化物酶的合成及对印染废水配制液的脱色处理
李华钟, 章燕芳, 华兆哲, 陈坚
过程工程学报,2002,2(5):459~463,-0001,():
-1年11月30日
比较了黄孢原毛平革菌在3 种生物反应器(搅拌式反应器、鼓泡式反应器、曝气式反应器)中合成木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)的差异。结果表明,曝气式反应器对酶的合成(尤其是LiP)最为有利. 考察了曝气式反应器中半连续培养和连续培养两种方式下酶的合成和橙I脱色情况,发现半连续培养可使培养体系长时间保持较高酶活力,置换比例为1/2时染料废水可连续脱色5批,脱色率达到90%以上,比脱色率在46.7g/(g×d)以上。连续培养条件下酶很快失活,废水的脱色率迅速下降。在曝气式反应器中用半连续培养的方式(置换比例1/2)对实际印染废水进行处理,可处理废水4批,前3批脱色率达到90%以上,第4批有明显下降。
曝气式反应器, 黄孢原毛平革菌, 木质素过氧化物酶, 印染废水配制液, 脱色中图分类号
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李华钟, H. Li, K. Morimoto, N. Katagiri, T. Kimura, K. Sakka, S. Lun, K. Ohmiya
,-0001,():
-1年11月30日
Abstract A b-N-acetylglucosaminidase gene (nag3A) from Clostridium paraputrificum M-21 was cloned in Escherichia coli. The nag3A gene consists of an open reading frame of 1,239-bp, encoding 413 amino acids with a deduced molecular weight of 45,531 Da. Nag3A is a single domain enzyme containing a family 3 glycoside hydrolase catalytic domain. Nag3A was purified from recombinant E. coli and characterized. The enzyme hydrolyzed chitooligomers such as di-N-acetylchitobiose, tri-N-acetylchitotriose, tetra-N-acetylchitotetraose, penta-N-acetylchitopentaose, hexa-N-acetylchitohexaose, ballmilled chitin, and synthetic substrates such as 4-methylumbelliferyl N-acetyl b-d-glucosaminide [4-MU-(Glc-NAc)], but had no activity at all against p-nitrophenyl-bd-glucoside, p-nitrophenyl-b-d-xyloside, or p-nitrophenyl-b-d-galactosamine. The enzyme was optimally active at 50℃ and pH 7.0, and the apparent Km and Vmax values for 4-MU-(GlcNAc) were 7.9μM and 21.8μmol min-1mg protein-1, respectively. SDS-PAGE, zymogram, and immunological analyses suggested that this enzyme is induced by ball-milled chitin.
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【期刊论文】A New Type of p-N-Acetylglucosaminidase from Hydrogen-Producing Clostridium paraputrfmm M-2 1
李华钟, HUAZHONG LI, , KENJI MORIMOT, TETSUYA KIMURA, KAZUO SAKKA, AND KUNIO OHMIYA*
JOUFWAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING, 2003, 96, 268-274,-0001,():
-1年11月30日
A fi-N-acetylglucosaminidase gene (nag84A) was cloned from Clostridium paraputr$cum M-21 in Escherichia coli. The nag84A gene consists of an open reading frame of 4647 bp encoding 1549 amino acids, with a deduced molecular weight of 174,311, which have a catalytic domain belonging to family 84 of the glycoside hydrolases. Nag84A was purified from a recombinant E. coli and characterized. Although Nag84A exhibited high homology to the hyaluronidase from Clostridium perfringens, it did not degrade hyluronic acid. The enzyme hydrolyzed chitooligomers such as di-, tri-, tetra-, penta- and hexa-N-acetylchitohexaose, and synthetic substrates such as 4-methylumbelliferyl N-acetyl fi-D-glucosaminide (4-MU-(GlcNAc)], but did not hydrolyze 4-MU-fl-D-glucoside,4-MU-a-D-glucoside, 4-MU-a-D-GlcNAc, 4-MU-a-D-galactoside, 4-MU-fl-D-xyloside, PNPP-D-galactoside, and PNP-a-D-xyloside. The enzyme was optimally active at 5O℃ and pH 6.5, and the apparent K, and Vm,, values for 4-MU-(GlcNAc) were 8.5pM and 1.39 ymol/min/mg of protein, respectively. SDS-PAGE, zymogram, and immunological analyses suggested that Nag84A was inducible by ball-milled chitin. Since Nag84A has a high molecular weight with a family 84 catalytic domain with high homology to hyaluronidases but no hyaluronidase activity, the enzyme is a novel j3-N-acetylglucosaminidase different from others reported having low molecular weights and belonging to family 3 and family 18.
gene cloning,, P-N-acetylglucosaminidase,, hydrogen,, Clostridiumparaputrijicum
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